PIF-tunnistuksen prognostinen arvo alkioviljelyalustassa korrelaatiossa raskauden lopputuloksen kanssa (PIF-SET1)

Ehdotetun projektin tavoitteena on tutkia ei-invasiivista biomarkkeria, PIF:ää (PreImplantation Factor), 15 aminohapon peptidiä (MVRIKPGSANKPSDD), jota erittävät vain elävät alkiot ja istukka (Stamakin et al. RBE 2011).

PIF-positiiviset alkiot pystyvät kasvamaan blastokystivaiheeseen ja PIF-tasot voivat olla etenevän raskauden merkki. Mittaamme PIF-tasot IVF-viljelyalustassa ennen alkionsiirtoa korreloidaksemme IVF-raskauden PIF-tasojen kanssa. Tavoitteemme on määritellä PIF elinkelpoisten alkioiden biomarkkeriksi, jotta voidaan lisätä IVF:n onnistumisastetta SET:n jälkeen. PIF-tasot arvioidaan takautuvasti 500 SET:n jälkeen.

Neljä lisääntymiskeskustamme suorittavat noin 200 SET:tä vuodessa ja yli 500 koeputkihedelmöitystä.

SET-tutkimukseen valituilla naisilla PIF-tasot arvioidaan kaikissa alkioviljelyalustassa ja myöhemmin yhden ja kahden viikon kuluttua jokaisen tuoreen tai sulatetun pakastetun alkion siirron jälkeen äidin seerumissa. Alkionsiirrot tehdään sokkoutuneena PIF-tuloksiin. SET tai MET perustuvat kliiniseen arviointiin ja tavanomaisiin alkiokriteereihin. Näillä naisilla PIF arvioidaan myös ja sitä verrataan βhCG-tasoon äidin seerumissa.

PIF-arviointi suoritetaan käyttämällä spesifistä vasta-ainetta, joka on merkitty fluoresoivalla väriaineella, Luminex-lukijassa.

Erityinen tavoite yksi antaa meille mahdollisuuden arvioida:

• PIF-ennustusarvo implantaationopeudelle
• PIF-ennustusarvo raskaudelle Metodologia Kaikille naisille tiedotetaan täydellisesti ja kirjallinen suostumus tutkimukseen osallistumiseen hankitaan asianmukaisesti.

In vitro -menettely Munasolut otettiin talteen luonnollisen syklin jälkeen tai munasarjojen hyperstimulaation jälkeen, joka suoritetaan käyttämällä modifioitua pitkää protokollaa. Kerätyt munasolut hedelmöitetään klassisella IVF:llä tai ICSI:llä. Hedelmöityminen varmistetaan 16-18 tunnin kuluttua havainnoimalla 2 protumaa ja kaksi polaarikappaletta. Hedelmöitettyjä munasoluja viljellään 60 μl:ssa viljelyalustaa öljyn alla. Alkionsiirto suoritetaan 72 tuntia IVF- tai ICSI-toimenpiteen jälkeen (päivänä D3) ilman PIF-tulosta. Ennen siirtoa alkion laatu pisteytetään solujen lukumäärän, katkaisukinetiikan ja fragmentaationopeuden mukaan. Naisilla, joille tehdään SET, kliinisten kriteerien (ikä, FSH-taso jne.) mukaisesti jäljellä olevat hyvälaatuiset alkiot jäädytetään ja sulatetaan kohdun valmistelun jälkeen myöhemmissä yrityksissä. Kaikki jäljellä olevat viljelmän supernatantit (50-60 μl) kerätään, siirretään 8-liuskaisiin 0,2 ml:n putkiin ja säilytetään -80 °C:ssa, kunnes ne testaavat PIF:n (M) äidin seerumin talteenoton.

Äidin seerumi kerätään:

• ennen munasolujen talteenottoa munasarjojen hyperstimulaation (S0) seerumikontrollin aikana
• viikko siirron jälkeen (S1)
• kaksi viikkoa siirron jälkeen ihmisen β-koriongonadotropiinin sarjamittauksissa (S2) PIF-tason arviointi PIF-tasot viljelmän supernatanteissa ja äidin seerumista mitataan retrospektiivisesti käyttämällä helmipohjaista kilpailevaa määritystä käytettäväksi Luminex 200 IS -järjestelmässä. Tulokset on esitetty mediaanifluoresenssin intensiteetinä (MFI). PIF-tasot johdettiin standardikäyrästä käyttämällä 5-parametrin logistiikkakäyrää. Havaitsemiskynnys määritettiin mittaamalla tausta pelkästä elatusaineesta tai äidin seerumista käyttämällä keskiarvoa + 2SD raja-arvona (18,7 ng/ml).

Analyysi Korreloi PIF-detektio alkion seerumissa alkion elinkelpoisuuteen. PIF:n havaitsemisen tulokset alkion supernatanteissa korreloivat raskauden lopputulokseen.

Vertailu alkioiden valintaan PIF+ vs PIF- alkioiden avulla käyttämällä yksin morfologiaa ja morfologiaa yhdistettynä PIF:n läsnäoloon.

Ryhmien väliset vertailut suoritetaan khin neliöanalyysin avulla ja p < 0,05 katsotaan tilastollisesti merkitseväksi.

Sisällyttämis-/poissulkemiskriteerit

Sisällyttämiskriteerit:

Kaikki klassisen IVF- tai ICSI-keskuksissamme mukana olevat naiset, jotka allekirjoittavat kirjallisen suostumuksen tutkimukseen osallistumisesta. PIF-tason arviointi elatusaineissa (M) ja raskausennuste (S1 ja S2) tehdään vain naisille, joilla on SET.

Poissulkemiskriteerit Naiset, jotka kieltäytyvät osallistumasta ohjelmaan. Suunnitellut arvioinnit (aika- ja tapahtumataulukko) Kokonaisprojekti on suunniteltu toteutettavaksi viisivaiheisena työsuunnitelmana, jossa tutkimme PIF:n käyttöä biomarkkerina parempaan alkioiden valintaan (vain naiset, joilla on SET, otetaan mukaan) ja varhaisen raskauden merkkiaine äidin seerumissa.