배아 배양 배지에서 PIF 검출의 예후적 가치와 임신 결과의 상관관계 (PIF-SET1)

제안된 프로젝트의 목적은 생존 가능한 배아와 태반에서만 분비되는 15아미노산 펩타이드(MVRIKPGSANKPSDD)인 비침습적 바이오마커 PIF(PreImplantation Factor)를 조사하는 것입니다(Stamakin et al. RBE 2011).

PIF 양성 배아는 배반포 단계까지 자랄 수 있으며 PIF 수치는 임신 진행의 지표가 될 수 있습니다. 우리는 IVF 임신을 PIF 수준과 연관시키기 위해 배아 이식 전에 IVF 배양 배지에서 PIF 수준을 측정할 것입니다. 우리의 목표는 SET 이후 IVF 성공률을 높이기 위해 PIF를 생존 가능한 배아에 대한 바이오마커로 정의하는 것입니다. PIF 수준은 500 SET 이후 소급 평가됩니다.

우리의 4개 생식 센터는 연간 약 200회의 SET와 500회 이상의 체외 수정을 수행합니다.

SET를 위해 선택된 여성의 경우, PIF 수치는 모든 배아 배양 배지에서 평가되며, 이후 모체 혈청에서 신선하거나 해동된 냉동 배아를 각각 이식한 후 1주 및 2주 후에 평가됩니다. 배아 이식은 PIF 결과를 보지 않고 수행됩니다. SET 또는 MET는 임상 평가 및 기존 배아 기준을 기반으로 합니다. 이 여성의 경우 PIF도 평가하고 모체 혈청의 βhCG 수준과 비교할 것입니다.

PIF 평가는 Luminex 판독기에서 형광 염료로 표시된 특정 항체를 사용하여 수행됩니다.

특정 목표 1을 통해 다음을 평가할 수 있습니다.

• 이식률에 대한 PIF 예측값
• 임신 방법론에 대한 PIF 예측 값 모든 여성에게 충분한 정보를 제공하고 연구 참여에 대한 서면 동의를 정식으로 얻습니다.

시험관 내 절차 난모세포는 자연 주기 후 또는 수정된 긴 프로토콜을 사용하여 수행될 난소 과자극 후 회수되었습니다. 수집된 난모세포는 고전적인 IVF 또는 ICSI에 의해 수정됩니다. 수정은 16~18시간 후 2개의 전핵과 ​​2개의 극체를 관찰하여 확인한다. 수정된 난모세포는 60μl의 배양 배지에서 기름 아래에서 배양됩니다. 배아 이식은 PIF 결과 없이 IVF 또는 ICSI 절차(D3일) 후 72시간에 수행됩니다. 이식하기 전에 배아 품질은 세포 수, 절단 동역학 및 단편화 속도에 따라 점수가 매겨집니다. SET를 가질 여성의 경우, 임상 기준(연령, FSH 수준 등)에 따라 남아 있는 양질의 배아를 동결하고 추가 시도에서 자궁 준비 후 해동합니다. 나머지 모든 배양 상청액(50-60μl)을 수집하고 8-스트립 0.2ml 튜브로 옮기고 PIF(M) 모체 혈청 회수를 테스트할 때까지 -80C에 보관합니다.

산모 혈청을 수집합니다:

• 난소과자극의 혈청 조절 과정에서 난자 채취 전(S0)
• 이체 후 1주일(S1)
• 일련의 인간 β-융모막 고나도트로핀 측정(S2) 동안 전달 후 2주 PIF 수준 평가 배양 상청액 및 모체 혈청에서 PIF 수준은 Luminex 200 IS 시스템에서 사용하기 위한 비드 기반 경쟁 분석을 사용하여 후향적으로 측정됩니다. 중간 형광 강도(MFI)로 표시되는 결과. PIF 수준은 5개 매개변수 물류 곡선을 사용하여 표준 곡선에서 파생되었습니다. 검출 역치는 평균 + 2SD를 컷오프(18.7ng/ml)로 사용하여 배양 배지 또는 모체 혈청 단독의 배경을 측정하여 설정되었습니다.

분석 배아 혈청의 PIF 검출과 배아 생존력의 상관관계를 확인합니다. 배아 상청액에서 PIF 검출 결과는 임신 결과와 상관관계가 있습니다.

PIF+ 대 PIF- 배아에 의한 배아 선택과의 비교, 형태 단독 사용 및 PIF 존재와 결합된 형태에 의한 비교.

그룹 간의 비교는 카이제곱 분석을 사용하여 수행되며 p<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다.

포함/제외 기준

포함 기준:

기존 IVF 또는 ICSI 센터에 포함된 모든 여성은 연구 참여에 대한 서면 동의서에 서명할 것입니다. 배양 배지(M) 및 임신 예후(S1 및 S2)에서의 PIF 수준 평가는 SET가 있는 여성에 대해서만 수행됩니다.

제외 기준 프로그램 참여를 거부할 여성. 계획된 평가(시간 및 이벤트 표) 전체 프로젝트는 더 나은 배아 선택(SET을 가진 여성만 포함됨)을 위한 바이오마커로서 PIF의 사용을 조사하는 5단계 작업 계획을 통해 수행될 예정입니다. 모체 혈청의 초기 임신 마커.