Prognostisk værdi af PIF-detektion i embryokulturmediekorrelation med graviditetsresultat (PIF-SET1)

Målet med det foreslåede projekt er at undersøge en ikke-invasiv biomarkør, PIF (PreImplantation Factor), et 15 aminosyre peptid (MVRIKPGSANKPSDD), der kun udskilles af levedygtige embryoner og placenta (Stamakin et al. RBE 2011).

PIF-positive embryoner vil være i stand til at vokse til blastocyststadiet, og PIF-niveauer kan være en markør for progressiv graviditet. Vi vil måle PIF-niveauer i IVF-kulturmedier før embryooverførsel for at korrelere IVF-graviditet med PIF-niveauer. Vores mål vil være at definere PIF som en biomarkør for levedygtige embryoner for at øge IVF-succesraterne efter SET. PIF-niveauer vil blive evalueret retrospektivt efter 500 SET.

Vores fire reproduktionscentre udfører omkring 200 SET om året og mere end 500 in vitro-fertiliseringer.

For kvinder udvalgt til et SET vil PIF-niveauer blive evalueret i alle embryodyrkningsmedier og senere en og to uger efter hver overførsel af friske eller optøede frosne embryoner i moderens serum. Embryooverførsler vil blive udført blindet for PIF-resultater. SET eller MET vil være baseret på klinisk evaluering og konventionelle embryokriterier. For disse kvinder vil PIF også blive evalueret og sammenlignet med βhCG-niveau på moderens serum.

PIF-vurdering vil blive udført ved hjælp af specifikt antistof mærket med et fluorescerende farvestof i Luminex-læser.

Specifikt mål 1 vil give os mulighed for at evaluere:

• PIF prædiktiv værdi på implantationshastighed
• PIF prædiktiv værdi for graviditet Metode Alle kvinder vil blive fuldt informeret, og der vil blive indhentet et skriftligt samtykke til at deltage i undersøgelsen.

In vitro-procedure Oocytter blev udvundet efter naturlig cyklus eller efter ovariehyperstimulering, som vil blive udført ved anvendelse af den modificerede lange protokol. Opsamlede oocytter vil blive befrugtet ved klassisk IVF eller ICSI. Befrugtning vil blive bekræftet ved observation af 2 pronuclei og to polære legemer efter 16-18 timer. Befrugtede oocytter vil blive dyrket i 60μl dyrkningsmedier under olie. Embryooverførsel vil blive udført 72 timer efter IVF eller ICSI procedure (på dag D3) uden PIF resultat. Før overførsel vil embryokvaliteten blive bedømt i henhold til antallet af celler, kinetik af spaltning og fragmenteringshastighed. For kvinder, der vil have et SET, i henhold til kliniske kriterier (alder, FSH-niveau, osv...) vil resterende embryoner af god kvalitet blive frosset og optøet efter livmoderforberedelse i yderligere forsøg. Alle resterende kultursupernatanter (50-60 μl) vil blive opsamlet, overført til 8-strimmel 0,2 ml rør og opbevaret ved -80 C, indtil de vil teste for PIF (M) Maternal serumudvinding

Moderens serum vil blive indsamlet:

• før oocytudvinding i løbet af en serumkontrol af ovariehyperstimulering (S0)
• en uge efter overførsel (S1)
• to uger efter overførsel under serielle humane β-choriongonadotropin-målinger (S2) Evaluering af PIF-niveau PIF-niveauer i kultursupernatanter og i maternelt serum vil blive målt retrospektivt ved hjælp af et perlebaseret kompetitivt assay til brug i Luminex 200 IS-systemet. Resultater præsenteret som median fluorescensintensitet (MFI). PIF-niveauer blev afledt fra standardkurve ved anvendelse af en 5-parameter logistikkurve. Detektionstærsklen blev etableret ved at måle baggrunden fra dyrkningsmedier eller maternelt serum alene ved at bruge middel+2SD som et cut-off (18,7 ng/ml).

Analyse Korreler PIF-detektion i embryoserum med embryolevedygtighed. Resultater af PIF-detektion i embryosupernatanter vil være korreleret med graviditetsresultatet.

Sammenligning med embryoselektion ved PIF+ vs PIF-embryoner, ved brug af morfologi alene, og ved morfologi kombineret med PIF-tilstedeværelse.

Sammenligninger mellem grupper vil blive udført ved hjælp af chi-kvadratanalyse, og p<0,05 vil blive betragtet som statistisk signifikant.

Inklusions-/udelukkelseskriterier

Inklusionskriterier:

Alle kvinder inkluderet i vores centre for klassisk IVF eller ICSI, som vil underskrive det skriftlige samtykke til at deltage i undersøgelsen. PIF-niveauevaluering i kulturmedier (M) og graviditetsprognose (S1 og S2) vil kun blive udført for kvinder med SET.

Eksklusionskriterier Kvinder, der vil nægte at deltage i programmet. Planlagte vurderinger (tids- og begivenhedstabel) Det overordnede projekt er planlagt gennemført gennem fem trins arbejdsplan, hvor vi vil undersøge brugen af ​​PIF som biomarkør for bedre embryoselektion (kun kvinder med SET vil blive inkluderet) og som en tidlig graviditetsmarkør i moderens serum.