A PIF kimutatásának prognosztikus értéke az embriókultúra tápközegében, összefüggésben a terhesség eredménnyel (PIF-SET1)

A javasolt projekt célja egy nem invazív biomarker, a PIF (PreImplantation Factor), egy 15 aminosavból álló peptid (MVRIKPGSANKPSDD) vizsgálata, amelyet csak életképes embriók és placenta választ ki (Stamakin et al. RBE 2011).

A PIF-pozitív embriók képesek lesznek a blasztocisztás stádiumig növekedni, és a PIF-szint a progresszív terhesség markere lehet. Az embriótranszfer előtt megmérjük a PIF-szintet IVF-tenyésztő tápközegben, hogy az IVF-terhesség és a PIF-szintek korrelálhassanak. Célunk az lesz, hogy a PIF-et az életképes embriók biomarkereként határozzuk meg, hogy növeljük az IVF sikerességi arányát a SET után. A PIF szinteket 500 SET után visszamenőlegesen értékeljük.

Négy reproduktív központunk évente körülbelül 200 SET-et és több mint 500 in vitro megtermékenyítést végez.

A SET-re kiválasztott nők esetében a PIF-szinteket minden embriótenyésztő tápközegben értékelik, majd később egy és két héttel az anyai szérumban lévő friss vagy felolvasztott fagyasztott embriók minden egyes áthelyezése után. Az embrióátültetés a PIF eredményekre vakon történik. A SET vagy MET a klinikai értékelésen és a hagyományos embriókritériumokon alapul. Ezeknél a nőknél a PIF-et is értékelik, és összehasonlítják az anyai szérum βhCG szintjével.

A PIF-értékelés fluoreszcens festékkel jelölt specifikus antitesttel történik a Luminex olvasóban.

Az 1. konkrét cél lehetővé teszi számunkra, hogy értékeljük:

• PIF prediktív érték a beültetési sebességre
• PIF prediktív érték a terhességre vonatkozóan Módszertan Minden nőt teljes körűen tájékoztatnak, és a vizsgálatban való részvételhez írásos beleegyezést kapnak.

In vitro eljárás A petesejteket a természetes ciklus vagy a petefészek hiperstimulációja után nyertük ki, amelyet a módosított hosszú protokoll szerint végeztünk. Az összegyűjtött petesejteket klasszikus IVF-el vagy ICSI-vel megtermékenyítik. A megtermékenyítést 2 pronukleusz és két poláris test megfigyelése igazolja 16-18 óra elteltével. A megtermékenyített petesejteket 60 μl táptalajban olaj alatt tenyésztik. Az embrióátültetésre 72 órával az IVF vagy ICSI eljárás után (a D3. napon) kerül sor PIF eredmény nélkül. Az átvitel előtt az embrió minőségét a sejtek száma, a hasítás kinetikája és a fragmentációs sebesség alapján pontozzák. Azoknál a nőknél, akiknél SET-t kapnak, a klinikai kritériumok (életkor, FSH-szint stb.) szerint a megmaradt jó minőségű embriókat a méh előkészítése után a további próbálkozások során lefagyasztják és felolvasztják. Az összes megmaradt tenyészet felülúszóját (50-60 μl) összegyűjtik, 8 csíkos, 0,2 ml-es csövekbe helyezik, és -80 C-on tárolják, amíg tesztelik a PIF (M) anyai szérum kinyerését.

Az anyai szérum gyűjtése:

• a petesejt levétele előtt a petefészek hiperstimuláció szérumkontrollja során (S0)
• egy héttel az átutalás után (S1)
• két héttel a transzfert követően soros humán β-koriongonadotropin mérések során (S2) PIF-szint értékelés A tenyészet felülúszójában és az anyai szérumban lévő PIF-szinteket retrospektív módon mérjük, egy gyöngy alapú kompetitív tesztet használva a Luminex 200 IS rendszerben való használatra. Az eredmények medián fluoreszcencia intenzitásként (MFI) vannak megadva. A PIF szinteket standard görbéből származtattuk egy 5 paraméteres logisztikai görbe segítségével. A kimutatási küszöböt úgy határoztuk meg, hogy a hátteret csak tápközegből vagy anyai szérumból mértük, az átlag + 2SD értékét (18,7 ng/ml) használva cut-offként.

Elemzés Korrelálja a PIF kimutatását az embriószérumban az embrió életképességével. Az embrió-felülúszók PIF kimutatásának eredményei korrelálnak a terhesség kimenetelével.

Összehasonlítás a PIF+ vs PIF-embriók embriószelekciójával, egyedül a morfológia és a PIF jelenlétével kombinált morfológia alapján.

A csoportok közötti összehasonlítást khi-négyzet analízissel végezzük, és a p<0,05 statisztikailag szignifikánsnak tekinthető.

Bevételi/kizárási kritériumok

Bevételi kritériumok:

Minden olyan nő, aki a klasszikus IVF vagy ICSI központunkban szerepel, és aki aláírja a vizsgálatban való részvételhez való írásos beleegyezését. A tápközegben (M) és a terhességi prognózisban (S1 és S2) csak a SET-ben szenvedő nők esetében kerül sor a PIF-szint értékelésére.

Kizárási kritériumok Nők, akik megtagadják a programban való részvételt. Tervezett értékelések (idő- és eseménytáblázat) Az átfogó projektet a tervek szerint öt lépésből álló munkatervben hajtják végre, amelyben megvizsgáljuk a PIF biomarkerként való használatát a jobb embriószelekció érdekében (csak a SET-ben szenvedő nőket tartalmazza), és mint egy korai terhesség marker az anyai szérumban.