Prognostischer Wert des PIF-Nachweises in der Korrelation von Embryonenkulturmedien mit dem Schwangerschaftsergebnis (PIF-SET1)

Ziel des vorgeschlagenen Projekts ist die Untersuchung eines nicht-invasiven Biomarkers, PIF (PreImplantation Factor), eines 15-Aminosäure-Peptids (MVRIKPGSANKPSDD), das nur von lebensfähigen Embryonen und Plazenta sezerniert wird (Stamakin et al. RBE 2011).

PIF-positive Embryonen können bis zum Blastozystenstadium heranwachsen und PIF-Werte könnten ein Hinweis auf eine fortschreitende Schwangerschaft sein. Wir werden die PIF-Werte in IVF-Kulturmedien vor dem Embryotransfer messen, um die IVF-Schwangerschaft mit den PIF-Werten zu korrelieren. Unser Ziel wird es sein, PIF als Biomarker für lebensfähige Embryonen zu definieren, um die IVF-Erfolgsraten nach SET zu erhöhen. Die PIF-Werte werden nachträglich nach 500 SET bewertet.

Unsere vier Reproduktionszentren führen etwa 200 SET pro Jahr und mehr als 500 In-vitro-Fertilisationen durch.

Bei Frauen, die für ein SET ausgewählt werden, werden die PIF-Werte in allen Embryonenkulturmedien und später eine und zwei Wochen nach jedem Transfer frischer oder aufgetauter gefrorener Embryonen in mütterliches Serum bewertet. Embryotransfers werden blind gegenüber den PIF-Ergebnissen durchgeführt. SET oder MET basieren auf der klinischen Bewertung und herkömmlichen Embryokriterien. Bei diesen Frauen wird auch der PIF bewertet und mit dem βhCG-Spiegel im mütterlichen Serum verglichen.

Die PIF-Bewertung wird unter Verwendung eines spezifischen Antikörpers durchgeführt, der mit einem Fluoreszenzfarbstoff im Luminex-Lesegerät markiert ist.

Spezifisches Ziel eins wird es uns ermöglichen, Folgendes zu bewerten:

• PIF-Vorhersagewert für die Implantationsrate
• PIF-Vorhersagewert für die Schwangerschaft. Methodik: Alle Frauen werden umfassend informiert und eine schriftliche Einwilligung zur Teilnahme an der Studie wird ordnungsgemäß eingeholt.

In-vitro-Verfahren Die Eizellen wurden nach dem natürlichen Zyklus oder nach einer Überstimulation der Eierstöcke entnommen, was unter Verwendung des modifizierten langen Protokolls durchgeführt wird. Die entnommenen Eizellen werden durch klassische IVF oder ICSI befruchtet. Die Befruchtung wird durch die Beobachtung von zwei Vorkernen und zwei Polkörperchen nach 16–18 Stunden bestätigt. Befruchtete Eizellen werden in 60 μl Kulturmedium unter Öl kultiviert. Der Embryotransfer wird 72 Stunden nach dem IVF- oder ICSI-Eingriff (am Tag D3) ohne PIF-Ergebnis durchgeführt. Vor dem Transfer wird die Qualität des Embryos anhand der Anzahl der Zellen, der Spaltungskinetik und der Fragmentierungsrate bewertet. Bei Frauen, bei denen ein SET durchgeführt werden soll, werden nach klinischen Kriterien (Alter, FSH-Wert usw.) verbleibende Embryonen von guter Qualität eingefroren und nach der Uterusvorbereitung in weiteren Versuchen aufgetaut. Alle verbleibenden Kulturüberstände (50–60 μl) werden gesammelt, in 0,2-ml-Röhrchen mit 8 Streifen überführt und bei -80 °C gelagert, bis sie auf PIF (M) mütterliche Serumgewinnung getestet werden

Das mütterliche Serum wird wie folgt gesammelt:

• vor der Eizellentnahme im Rahmen einer Serumkontrolle der ovariellen Überstimulation (S0)
• eine Woche nach dem Transfer (S1)
• zwei Wochen nach dem Transfer während serieller Messungen des menschlichen β-Choriongonadotropins (S2) PIF-Spiegelbewertung Die PIF-Spiegel in Kulturüberständen und im mütterlichen Serum werden retrospektiv mithilfe eines auf Kügelchen basierenden kompetitiven Assays zur Verwendung im Luminex 200 IS-System gemessen. Die Ergebnisse werden als mittlere Fluoreszenzintensität (MFI) dargestellt. Die PIF-Werte wurden aus der Standardkurve unter Verwendung einer 5-Parameter-Logistikkurve abgeleitet. Die Nachweisschwelle wurde durch Messung des Hintergrunds aus Kulturmedien oder mütterlichem Serum allein ermittelt, wobei der Mittelwert + 2SD als Grenzwert (18,7 ng/ml) verwendet wurde.

Analyse Korrelieren Sie den PIF-Nachweis im Embryoserum mit der Lebensfähigkeit des Embryos. Die Ergebnisse des PIF-Nachweises in Embryonenüberständen werden mit dem Schwangerschaftsausgang korreliert.

Vergleich mit der Embryoselektion durch PIF+ vs. PIF-Embryonen, unter Verwendung der Morphologie allein und anhand der Morphologie in Kombination mit dem Vorhandensein von PIF.

Vergleiche zwischen Gruppen werden mithilfe einer Chi-Quadrat-Analyse durchgeführt und p <0,05 wird als statistisch signifikant angesehen.

Einschluss-/Ausschlusskriterien

Einschlusskriterien:

Alle in unsere Zentren für klassische IVF oder ICSI aufgenommenen Frauen werden die schriftliche Einwilligung zur Teilnahme an der Studie unterzeichnen. Die Bewertung des PIF-Spiegels in Kulturmedien (M) und die Schwangerschaftsprognose (S1 und S2) werden nur für Frauen mit SET durchgeführt.

Ausschlusskriterien Frauen, die die Teilnahme am Programm verweigern. Geplante Bewertungen (Zeit- und Ereignistabelle) Das Gesamtprojekt soll in einem fünfstufigen Arbeitsplan durchgeführt werden, in dem wir die Verwendung von PIF als Biomarker für eine bessere Embryonenauswahl (nur Frauen mit SET werden einbezogen) und als untersuchen werden Frühschwangerschaftsmarker im mütterlichen Serum.