Prognostisk verdi av PIF-deteksjon i embryokulturmediekorrelasjon med graviditetsutfall (PIF-SET1)

Målet med det foreslåtte prosjektet er å undersøke en ikke-invasiv biomarkør, PIF (PreImplantation Factor), et 15 aminosyrepeptid (MVRIKPGSANKPSDD) som bare skilles ut av levedyktige embryoer og placenta (Stamakin et al. RBE 2011).

PIF-positive embryoer vil kunne vokse til blastocyststadiet og PIF-nivåer kan være en markør for progressiv graviditet. Vi vil måle PIF-nivåer i IVF-kulturmedier før embryooverføring for å korrelere IVF-graviditet med PIF-nivåer. Målet vårt vil være å definere PIF som en biomarkør for levedyktige embryoer for å øke suksessraten for IVF etter SET. PIF-nivåer vil bli evaluert i ettertid etter 500 SET.

Våre fire reproduksjonssentre utfører ca. 200 SET per år og mer enn 500 in vitro-fertiliseringer.

For kvinner valgt for en SET vil PIF-nivåer bli evaluert i alle embryokulturmedier, og senere én og to uker etter hver overføring av ferske eller tinte frosne embryoer i mors serum. Embryooverføringer vil bli gjort blindet for PIF-resultater. SET eller MET vil være basert på klinisk evaluering og konvensjonelle embryokriterier. For disse kvinnene vil PIF også bli evaluert og sammenlignet med βhCG-nivå på mors serum.

PIF-vurdering vil bli utført ved å bruke spesifikt antistoff merket med et fluorescerende fargestoff, i Luminex reader.

Spesifikt mål 1 vil tillate oss å evaluere:

• PIF prediktiv verdi på implantasjonshastighet
• PIF prediktiv verdi på graviditet Metodikk Alle kvinner vil bli fullstendig informert og et skriftlig samtykke til å delta i studien vil bli innhentet.

In vitro-prosedyre Oocytter ble hentet etter naturlig syklus eller etter ovariehyperstimulering som vil bli utført ved bruk av den modifiserte lange protokollen. Innsamlede oocytter vil bli befruktet ved klassisk IVF eller ICSI. Befruktning vil bli bekreftet ved observasjon av 2 pronuclei og to polare legemer, etter 16-18 timer. Befruktede oocytter vil bli dyrket i 60μl kulturmedium under olje. Embryooverføring vil bli utført 72 timer etter IVF- eller ICSI-prosedyre (på dag D3) uten PIF-resultat. Før overføring vil embryokvaliteten bli skåret i henhold til antall celler, kinetikk for spaltning og fragmenteringshastighet. For kvinner som vil ha en SET, i henhold til kliniske kriterier (alder, FSH-nivå, etc...) vil gjenværende embryoer av god kvalitet fryses og tines etter livmorforberedelse i ytterligere forsøk. Alle gjenværende kultursupernatanter (50-60 μl) vil bli samlet, overført til 8-strips 0,2 ml rør og lagret til -80C til de skal teste for PIF (M) Maternal seruminnhenting

Morserum vil bli samlet inn:

• før oocyttuthenting i løpet av en serumkontroll av ovariehyperstimulering (S0)
• en uke etter overføring (S1)
• to uker etter overføring under serielle målinger av humant β-koriongonadotropin (S2) PIF-nivåevaluering PIF-nivåer i kultursupernatanter og i morserum vil bli målt retrospektivt, ved bruk av en kulebasert konkurrerende analyse for bruk i Luminex 200 IS-systemet. Resultater presentert som median fluorescensintensitet (MFI). PIF-nivåer ble avledet fra standardkurve ved bruk av en 5-parameter logistikkkurve. Terskelen for deteksjon ble etablert ved å måle bakgrunnen fra kulturmedier eller morsserum alene, ved å bruke gjennomsnitt+2SD som et cut-off (18,7 ng/ml).

Analyse Korreler PIF-deteksjon i embryoserum med embryolevedyktighet. Resultater av PIF-deteksjon i embryosupernatanter vil være korrelert med graviditetsutfall.

Sammenligning med embryoseleksjon ved PIF+ vs PIF-embryoer, ved bruk av morfologi alene, og ved morfologi kombinert med PIF-tilstedeværelse.

Sammenligninger mellom grupper vil bli utført ved bruk av kjikvadratanalyse og p<0,05 vil bli vurdert som statistisk signifikant.

Inkluderings-/eksklusjonskriterier

Inklusjonskriterier:

Alle kvinner inkludert i våre sentre for klassisk IVF eller ICSI, som vil signere det skriftlige samtykket til å delta i studien. PIF-nivåevaluering i kulturmedier (M) og graviditetsprognose (S1 og S2) vil kun gjøres for kvinner med SET.

Ekskluderingskriterier Kvinner som vil nekte å delta i programmet. Planlagte vurderinger (tids- og hendelsestabell) Det overordnede prosjektet planlegges gjennomført gjennom fem trinns arbeidsplan der vi skal undersøke bruken av PIF som biomarkør for bedre embryoseleksjon (kun kvinner med SET vil inkluderes) og som en tidlig graviditetsmarkør i mors serum.