Biomarkkerit ruoka-allergioiden diagnosoinnissa (APSIS)

Tausta. Ruoka-aineallergiat ovat maailmanlaajuinen taakka, joka aiheuttaa vakavia kliinisiä reaktioita, mukaan lukien kuolemaan johtava anafylaksia. Maapähkinät ovat yksi tehokkaimmista IgE-välitteisten ruoka-allergioiden aiheuttajista. Maapähkinäallergia on relevantti sairausmalli, koska sen esiintyvyys lisääntyy jatkuvasti ja kasvun huono ennuste. Maapähkinäallergisten potilaiden kliiniset fenotyypit vaihtelevat suuresti. Potilaat voivat kokea erilaisia ​​lääketieteellisiä oireita (elimet, vakavuus, viive), kynnys ja ristireaktiivisuustasot viittaavat. Luotettava in vitro -biomarkkeri, joka mahdollistaisi kliinisen reaktiivisuuden ennustamisen ja potilaiden reaktioiden endotyyppien arvioinnin, puuttuu.

Tärkeimpien maapähkinäallergeenien biomolekyyliominaisuuksien biologista aktiivisuutta ja allergeenista voimaa on tutkittu. Voimakkaiden maapähkinäallergeenien selvän proteiinistabiilisuuden uskotaan myötävaikuttavan molekyylien allergeenisuuteen. Nieltynä ruokaproteiinit hajoavat ja pääsevät ihmiskehoon epiteelin pintojen kautta. Immunologisesti aktiivisten allergeenipeptidien identiteetti ja kohtalo epiteelin absorption jälkeen on edelleen vaikeaselkoinen. Tämän lisäksi akuuttien allergisten jaksojen aikana tapahtuu monimutkaisia ​​​​immuunikaskadeja. Se, kuinka immuunisolut, kuten lymfosyytit, toimivat potilailla, joilla on erilaisia ​​kliinisiä tuloksia (esim. herkkyys, vakavuus), on vielä ratkaisematta. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että suoliston mikrobiston koostumus ja monimuotoisuus vaikuttavat immuunivasteen muovaamiseen ruokaproteiineja vastaan. Funktionaalista vuorovaikutusta isännän ja suoliston mikrobiomin välillä oireiden kehittymisen ja fenotyyppisten vaihtelujen yhteydessä ei ole tutkittu tähän päivään asti.

Tavoitteet. Tämän projektin tavoitteena on tutkia oletettuja biomarkkereita eri tasoilla, IgE-profiilien tasolla, allergeenien imeytymisen tasolla, pisteytetyn basofiilien reaktiivisuuden tasolla, immuunifenotyyppien tasolla ja suoliston mikrobiomi-isäntävuorovaikutusten tasolla. , käyttämällä useita omics-tekniikoita.

Yhteistyökumppanit. Luxemburgin terveysinstituutin (LIH) infektio- ja immuniteettiosasto (DII; johtaja prof. M. Ollert) johtaa tieteellistä hanketta (päätutkija tohtori A. Kuehn). Tärkeimmät kliiniset kumppanit ovat tohtori F. Codreanu-Morel National Unit of Immunology-Allergologysta, Center Hospitalier (CHL), Luxemburg, sekä professori C. Bindslev-Jensen Odense Research Center for Anafylaksiasta (ORCA), Tanska. Yhteistyökumppanina kliinisen osan toteuttamisessa on Clinical and Epidemiological Investigation Center (CIEC, LIH), jota johtaa tri. M. Gantenbein. Integrated Biobank of Luxembourg (IBBL) valmistelee ja varastoi kliiniset näytteet käyttöön asti. Kliiniset näytteet (veri, seerumit, plasma) analysoidaan DII:ssa, LIH:ssa. Ulostenäytteitä tutkitaan Prof. P. Wilmesin avustuksella Systems Ecology -tutkimusryhmästä, Luxembourg Center for Systems Biomedicine (LCSB).

Projektin toteutus. Maapähkinän ruokahaasteet (OFC) etenevät virallisten ohjeiden mukaisesti (European Academy of Allergy and Clinical Immunology, EAACI). Terveet kontrollit (N=10) jaetaan, puolet saa kerta-annoksen enintään 100 g paahdettuja maapähkinöitä (avoin OFC) ja toinen puoli testataan enintään 5 lisäannoksella (kaksoissokko lumekontrolloitu). OFC) käyttäen samoja annoksia kuin allergisille potilaille. Kerta-annos OFC:tä varten verinäytteitä verrokeista otetaan ennen OFC:tä ja 30 minuutin, 60 minuutin ja 120 minuutin kohdalla. Kontrolleilta, jotka saavat 5 inkrementaalista allergeeniannosta, otetaan verinäyte ennen OFC:n alkua ja 1 tunti altistuksen päättymisen jälkeen. Tutkimuksen lisäkontrollihaarana OFC:ssä käytetään eläinperäistä allergiaa aiheuttavaa ruokaa. Muut terveet kontrollit (N=10) saavat joko kerta-annoksen enintään 200 g keitettyä kalaa (avoin OFC) ja toinen puoli testataan enintään viidellä lisäannoksella (kaksoissokko lumekontrolloitu OFC). Annokset 10 mg - 100 g kalaa valitaan sokkoutetulle OFC:lle kontrolleilla.

Allergiset osallistujat (N=30) nielevät vähitellen maapähkinöitä. OFC-annokset ovat alueella 5 mg, 15 mg, 60 mg, 120 mg, 200 mg, 390 mg, 790 mg, 1 580 mg, 3 160 mg ja 5 530 mg paahdettua maapähkinää. Enintään viisi annosta valitaan yllä mainituista maapähkinäannossarjoista. Kun allergisia oireita havaitaan, OFC lopetetaan. Jos ruokahaasteen aikana ei ilmennyt allergisia oireita viiden lisäannoksen aikana, potilasta pyydetään osallistumaan toiseen suulliseen provokaatioon (min. 14 päivää myöhemmin) testin suorittamiseksi suuremmilla allergeeniannoksilla. Verinäytteet allergisiin tutkimukseen osallistuneilta otetaan ennen OFC:tä, sen aikana ja sen jälkeen (0, 60, 150, 180 minuuttia).

Ulostenäytteet maapähkinäallergisilta osallistujilta (n=30) ja terveiltä kontrolleilta (n=20) kerätään aikaisintaan 2 kuukautta ruoka-altistuksen jälkeen. Ennen näytteenottoa osallistujat eivät saaneet olla käyttäneet antibiootteja viimeisen kuukauden aikana tai heillä ei pitäisi olla äskettäin/olemassa olevia maha-suolikanavan oireita (= ripuli; Bristolin asteikko 5-7) ulosteenkeräyksen aikana. Osallistujat saavat kotiin keräyssarjan, joka sisältää erityiset näytteenottoputket, käsineet ja ohjeet. Lisäksi potilaita pyydetään kirjaamaan muistiin viimeisten 24 tunnin ruokailunsa ennen näytteenottoa.

Kerätyt kliiniset näytteet pseudonyymitetään kliinisissä keskuksissa. Osana tutkijatiedostoa synonyymiluettelo, joka sisältää tiedot osallistujien henkilöllisyydestä ja vastaavan pseudonyymin, on saatavilla vain kliinisessä keskuksessa (lääketieteen tutkijat) ja CIEC:ssä. Henkilötietoja suojataan yksilöiden suojelusta henkilötietojen käsittelyssä 27.4.2016 annetun asetuksen (EU) 2016/679 (GDPR) ja kansallisen tietosuojakomission organisaatiosta 1.8.2018 annetun lain ja yleiseen tietosuojalakiin.