Biomarcadores no diagnóstico de alergia alimentar (APSIS)

Fundo. As alergias alimentares são um fardo global, causando reações clínicas graves, incluindo anafilaxia fatal. Os amendoins são contados entre os elicitores mais potentes envolvidos em alergias alimentares mediadas por IgE. A alergia ao amendoim é um modelo de doença relevante por causa de sua prevalência cada vez maior e prognóstico ruim de crescimento. Os fenótipos clínicos dos pacientes alérgicos ao amendoim são altamente variáveis. Os pacientes podem apresentar sintomas médicos variáveis ​​(órgãos, gravidade, atraso), sugerem níveis de limiar e reatividade cruzada. Falta um biomarcador in vitro confiável que permita prever a reatividade clínica e classificar os pacientes em endótipos de reação.

Os alérgenos mais importantes do amendoim têm sido estudados quanto às suas propriedades biomoleculares, atividades biológicas e potência alergênica. Acredita-se que a pronunciada estabilidade proteica de potentes alérgenos de amendoim contribua para a alergenicidade das moléculas. Após a ingestão, as proteínas dos alimentos são decompostas, entrando no corpo humano através de superfícies epiteliais. A identidade e o destino dos peptídeos alergênicos imunologicamente ativos após a absorção epitelial permanecem indefinidos. Além disso, cascatas imunológicas complexas ocorrem durante episódios alérgicos agudos. Como as células imunes, como os linfócitos, se orquestram em pacientes com diferentes desfechos clínicos (por exemplo, sensibilidade, gravidade) ainda precisa ser resolvido. Vários estudos mostraram que a composição e a diversidade da microbiota intestinal são relevantes para moldar a resposta imune às proteínas alimentares. A interação funcional entre hospedeiro e microbioma intestinal, no contexto do desenvolvimento de sintomas e variações fenotípicas, é inexplorada até hoje.

Mira. Este projeto visa explorar biomarcadores putativos em vários níveis, no nível de perfis de IgE, no nível de absorção de alérgenos, no nível de reatividade basofílica pontuada, no nível de fenótipos imunológicos e no nível de interações microbioma-hospedeiro do intestino , aplicando múltiplas tecnologias ômicas.

Parceiros. O Instituto de Saúde de Luxemburgo (LIH), Departamento de Infecção e Imunidade (DII; chefe Prof. M. Ollert) tem o líder do projeto científico (Investigador Principal Dr. A. Kuehn). Os principais parceiros clínicos são o Dr. F. Codreanu-Morel da Unidade Nacional de Imunologia-Alergologia, Centro Hospitalar (CHL), Luxemburgo, bem como o Prof. C. Bindslev-Jensen do Centro de Pesquisa Odense para Anafilaxia (ORCA), Dinamarca. O parceiro para a execução da parte clínica será o Centro de Investigação Clínica e Epidemiológica (CIEC, LIH) dirigido pelo Dr. M. Gantenbein. O Biobanco Integrado de Luxemburgo (IBBL) preparará e armazenará amostras clínicas até o uso. Amostras clínicas (sangue, soro, plasma) serão analisadas no DII, LIH. Amostras de fezes serão investigadas com a ajuda do Prof. P. Wilmes do grupo de pesquisa de Ecologia de Sistemas, Centro de Luxemburgo para Biomedicina de Sistemas (LCSB).

Implementação de projeto. As provocações alimentares (OFC) ao amendoim serão realizadas de acordo com as diretrizes oficiais (Academia Europeia de Alergia e Imunologia Clínica, EAACI). Os controles saudáveis ​​(N=10) serão divididos, metade receberá uma única dose alimentar de até 100 g de amendoim torrado (OFC aberto) e a outra metade será testada com até 5 doses incrementais (duplo-cego controlado por placebo OFC) usando as mesmas doses para pacientes alérgicos. Para OFC em dose única, amostras de sangue dos controles serão colhidas antes do COF e aos 30 minutos, aos 60 minutos e aos 120 minutos. Os controles que receberam 5 doses incrementais de alérgenos serão submetidos a coleta de sangue antes do início da OFC e 1 h após o término do desafio. Como outro braço de controle no estudo, alimentos alergênicos de origem animal serão usados ​​em OFC. Outros controles saudáveis ​​(N = 10) receberão uma dose única de alimento de até 200 g de peixe cozido (OFC aberto) e a outra metade será testada com até 5 doses incrementais (OFC duplo-cego controlado por placebo). Doses na faixa de 10 mg a 100 g de peixe serão selecionadas para o OFC cego com controles.

Participantes alérgicos (N=30) irão ingerir doses incrementais de amendoim. As doses de OFC estarão na faixa de 5 mg, 15 mg, 60 mg, 120 mg, 200 mg, 390 mg, 790 mg, 1.580 mg, 3.160 mg e 5.530 mg de amendoim torrado. No máximo cinco doses serão selecionadas das faixas de doses de amendoim mencionadas acima. Após a observação de sintomas alérgicos, o OFC será interrompido. Se nenhum sintoma alérgico ocorrer durante um desafio alimentar com cinco doses incrementais, o paciente será convidado a participar de uma segunda provocação oral (min. 14 dias depois) para fazer um teste com doses mais altas de alérgenos. Amostras de sangue dos participantes alérgicos do estudo serão coletadas antes, durante e após a OFC (0, 60, 150, 180 minutos).

Amostras de fezes de participantes alérgicos a amendoim (n=30) e controles saudáveis ​​(n=20) serão coletadas 2 meses após o desafio alimentar. Antes da amostragem, os participantes não deveriam ter usado antibióticos no último mês ou apresentar sintomas gastrointestinais recentes/contínuos (= diarreia; escala de Bristol 5-7) no momento da coleta de fezes. Os participantes receberão um kit de coleta em casa, contendo tubos de amostragem especiais, luvas e instruções. Além disso, os pacientes são solicitados a registrar sua ingestão de alimentos nas últimas 24 horas antes da amostragem.

As amostras clínicas coletadas serão pseudonimizadas nos centros clínicos. Uma lista de sinônimos, como parte do arquivo do investigador, contendo as informações sobre a identidade dos participantes e o pseudônimo correspondente, estará disponível apenas no centro clínico (investigadores médicos) e no CIEC. Os dados pessoais são protegidos pelo regulamento (UE) 2016/679 de 27 de abril de 2016 sobre a proteção de indivíduos no que diz respeito ao processamento de dados pessoais (GDPR) e a lei de 1 de agosto de 2018 sobre a organização da Comissão Nacional de Proteção de Dados e a Lei Geral de Proteção de Dados.