Biomarcadores en el diagnóstico de alergia alimentaria (APSIS)

Fondo. Las alergias alimentarias son una carga mundial que provoca reacciones clínicas graves, incluida la anafilaxia mortal. Los cacahuetes se cuentan entre los inductores más potentes implicados en las alergias alimentarias mediadas por IgE. La alergia al maní es un modelo de enfermedad relevante debido a su prevalencia en constante aumento y al mal pronóstico de su desarrollo. Los fenotipos clínicos de los pacientes alérgicos al maní son muy variables. Los pacientes pueden experimentar síntomas médicos variables (órganos, gravedad, retraso), según sugieren los niveles de umbral y reactividad cruzada. Falta un biomarcador in vitro fiable que permita predecir la reactividad clínica y clasificar a los pacientes en endotipos de reacción.

Se han estudiado los alérgenos de maní más importantes en cuanto a sus propiedades biomoleculares, actividades biológicas y potencia alergénica. Se cree que la pronunciada estabilidad proteica de los potentes alérgenos del maní contribuye a la alergenicidad de las moléculas. Tras la ingestión, las proteínas de los alimentos se descomponen y entran en el cuerpo humano a través de las superficies epiteliales. La identidad y el destino de los péptidos alérgenos inmunológicamente activos después de la absorción epitelial siguen siendo difíciles de alcanzar. Más allá de esto, se producen complejas cascadas inmunitarias durante los episodios alérgicos agudos. Aún queda por resolver cómo las células inmunitarias, como los linfocitos, se orquestan en pacientes con diferentes resultados clínicos (p. ej., sensibilidad, gravedad). Varios estudios han demostrado que la composición y la diversidad de la microbiota intestinal son relevantes para configurar la respuesta inmune a las proteínas de los alimentos. La interacción funcional entre el huésped y el microbioma intestinal, en el contexto del desarrollo de los síntomas y las variaciones fenotípicas, no se ha explorado hasta el día de hoy.

Objetivos. Este proyecto tiene como objetivo explorar biomarcadores putativos en varios niveles, a nivel de perfiles de IgE, a nivel de absorción de alérgenos, a nivel de reactividad basófila puntuada, a nivel de fenotipos inmunes y a nivel de interacciones microbioma intestinal-huésped , mediante la aplicación de múltiples tecnologías ómicas.

Socios. El Instituto de Salud de Luxemburgo (LIH), Departamento de Infecciones e Inmunidad (DII; jefe Prof. M. Ollert) tiene el líder del proyecto científico (Investigador Principal Dr. A. Kuehn). Los principales socios clínicos son el Dr. F. Codreanu-Morel de la Unidad Nacional de Inmunología-Alergología, Centre Hospitalier (CHL), Luxemburgo, así como el Prof. C. Bindslev-Jensen del Odense Research Center for Anaphylaxis (ORCA), Dinamarca. Socio para la ejecución de la parte clínica será el Centro de Investigaciones Clínicas y Epidemiológicas (CIEC, LIH) encabezado por el Dr. M. Gantenbein. El Biobanco Integrado de Luxemburgo (IBBL) preparará y almacenará muestras clínicas hasta su uso. Las muestras clínicas (sangre, sueros, plasma) serán analizadas en DII, LIH. Las muestras de heces se investigarán con la ayuda del Prof. P. Wilmes del grupo de investigación de Ecología de Sistemas del Centro de Biomedicina de Sistemas de Luxemburgo (LCSB).

Implementacion de proyecto. Los desafíos alimentarios (OFC) al maní se realizarán de acuerdo con las pautas oficiales (Academia Europea de Alergia e Inmunología Clínica, EAACI). Los controles sanos (N=10) se dividirán, la mitad recibirá una dosis única de alimentos de hasta 100 g de maní tostado (OFC abierto) y la otra mitad se probará con hasta 5 dosis incrementales (doble ciego controlado con placebo). OFC) utilizando las mismas dosis que para los pacientes alérgicos. Para OFC de dosis única, se tomarán muestras de sangre de los controles antes de la OFC ya los 30 minutos, a los 60 minutos ya los 120 minutos. Los controles que reciban 5 dosis incrementales de alérgenos se someterán a muestras de sangre antes del comienzo de la OFC y 1 h después del final del desafío. Como brazo de control adicional en el estudio, se utilizarán alimentos alergénicos de origen animal en OFC. Los controles sanos adicionales (N = 10) recibirán una dosis única de alimentos de hasta 200 g de pescado cocido (OFC abierto) y la otra mitad se probará con hasta 5 dosis incrementales (OFC doble ciego controlado con placebo). Se seleccionarán dosis en un rango de 10 mg a 100 g de pescado para el OFC ciego con controles.

Los participantes alérgicos (N=30) ingerirán dosis incrementales de maní. Las dosis de OFC estarán en el rango de 5 mg, 15 mg, 60 mg, 120 mg, 200 mg, 390 mg, 790 mg, 1580 mg, 3160 mg y 5530 mg de maní tostado. Se seleccionarán un máximo de cinco dosis de los rangos de dosis de maní mencionados anteriormente. Tras la observación de síntomas alérgicos, se detendrá la OFC. Si no se produjeron síntomas alérgicos durante una provocación alimentaria con cinco dosis incrementales, se le pedirá al paciente que participe en una segunda provocación oral (mín. 14 días después) para someterse a una prueba con dosis más altas de alérgenos. Se extraerán muestras de sangre de los participantes del estudio alérgico antes, durante y después de la OFC (0, 60, 150, 180 minutos).

Las muestras de heces de los participantes alérgicos al cacahuate (n=30) y los controles sanos (n=20) se recolectarán antes de los 2 meses posteriores al desafío alimentario. Muestreo previo, los participantes no deben haber usado antibióticos en el último mes, o tener síntomas gastrointestinales recientes/en curso (= diarrea; escala de Bristol 5-7) en el momento de la recolección de heces. Los participantes recibirán un kit de recolección en casa, que contiene tubos de muestreo especiales, guantes e instrucciones. Además, se pide a los pacientes que registren su ingesta de alimentos durante las últimas 24 horas antes de la toma de muestras.

Las muestras clínicas recogidas serán seudonimizadas en los centros clínicos. Una lista de sinónimos, como parte del expediente del investigador, con la información sobre la identidad de los participantes y el seudónimo correspondiente, estará disponible únicamente en el centro clínico (investigadores médicos) y en el CIEC. Los datos personales están protegidos por el Reglamento (UE) 2016/679, de 27 de abril de 2016, relativo a la protección de las personas físicas en lo que respecta al tratamiento de datos personales (RGPD) y la Ley de 1 de agosto de 2018, sobre organización de la Comisión Nacional de Protección de Datos y la Ley General de Protección de Datos.