Nenäsumutteen LiveSpo Navaxin vaikutukset lasten akuuttien hengitystieinfektioiden hoidossa

Respiratory syncytial virus (RSV) on yleisin virus, joka aiheuttaa akuutteja hengitystieinfektioita (ARTI) pienillä lapsilla, ja vakavan keuhkoputkentulehduksen riski on suuri. RSV-infektion oireet vaihtelevat lievästä kuumeesta, yskästä, nenän vuotamisesta ja hengityksen vinkumisesta vakaviin oireisiin, kuten hengitysvaikeuksiin ja hengitysvaikeuksiin. Bronkioliittia sairastavien lasten hengitysteissä olevien sytokiinien, kuten tuumorinekroositekijän (TNF-alfa), interleukiini-6:n (IL-6) ja IL-8:n, on osoitettu lisääntyvän erittäin korkealla tasolla primaarisessa RSV-infektiossa ja äärimmäisenä. IL-6:n nousu liittyy äkilliseen kuolemaan lapsilla, joilla on RSV-infektio. Maailman terveysjärjestö (WHO) arvioi, että 160 000–600 000 alle viisivuotiasta lasta kuolee tai joutuu sairaalaan vuosittain RSV-infektion seurauksena. RSV-tartunnan saaneille lapsille ei tällä hetkellä ole rokotetta tai erityistä hoitoa, koska monoklonaalinen vasta-ainepalivitsumabihoito ja viruslääke ribaviriini ovat joko liian kalliita tai liian vaarallisia lapsille ja niitä suositellaan vain suuren riskin potilaille.

Viime vuosina hengitystieinfektioiden ehkäisevät ja tukevat hoidot ovat kasvattaneet suosiotaan, ja probiootit ovat tulleet lupaaviksi turvallisiksi ehdokkaiksi terapeuttiseen tukeen ja antibioottien vähentämiseen. On ehdotettu, että probiootit voivat siepata viruksia suorien vuorovaikutusten kautta tai tuottaa sekundaarisia kasvaimia, jotka estävät viruksen kasvua tai stimuloivat immuunijärjestelmää sieppaamaan viruksen tunkeutumista. Suun kautta sulatettujen probioottien teho lasten hengitysteihin on kuitenkin kehittynyt hitaasti (tavallisesti se kestää noin 3-12 kuukautta), ja sitä käytetään ensisijaisesti ehkäisyyn eikä tukihoitoon. Tämän seurauksena probiooteille tarvitaan vaihtoehtoisia toimitusreittejä ARTI:n hoidossa.

Tutkimuksen tavoitteena on arvioida kahta bakteerikantaa, Bacillus subtilis ja Bacillus clausii, sisältävien nenäsuihkutettavien probioottien tehokkuutta RSV-infektion aiheuttamien akuuttien hengitystieoireiden ehkäisyssä ja hoidon tukemisessa.

Menetelmät: Suoritetaan satunnaistettu, sokea ja kontrolloitu kliininen tutkimus. Potilaan vanhempien on annettava seuraavat tiedot lapsistaan: koko nimi, sukupuoli, ikä, synnytyshistoria, rokotushistoria, antibioottien käyttöhistoria... Tietoisen suostumuksen jälkeen 100 RSV:n aiheuttamaa ARTI-potilasta satunnaistetaan kahteen ryhmään (n = 50/ryhmä): kontrolliryhmä (nimeltään "kontrolliryhmä") käyttää 0,9-prosenttista NaCl-fysiologista suolaliuosta ja koeryhmä (nimeltään "Navax-ryhmä") käyttää probiootteja LiveSpo Navax. Potilaalle annetaan koodattu suihke sokkonäytteen muodossa tutkimuksen objektiivisuuden varmistamiseksi. Kliininen seuranta kestää 6 päivää, nenänielun näytteet kerätään päivinä 0 ja 3, jotta voidaan arvioida mahdollisia viruskuorman ja yhteisinfektiobakteerien vähenemistä sekä ylireagoineen sytokiinien vapautumisen modulaatiota ja probioottisten itiöiden esiintymistä potilaan nenän limakalvo.

Reaaliaikainen PCR mikro-organismien havaitsemiseksi nenänielun näytteistä: puolikvantitatiiviset määritykset RSV-kuorman ja samanaikaisten bakteeripitoisuuksien muutosten mittaamiseksi suoritetaan reaaliaikaisella RT-PCR/PCR-rutiiniprotokollalla, joka on standardoitu ISO 15189:n mukaisesti: 2012 kriteerit ja käytetty Vietnamin kansallisessa lastensairaalassa. B. subtilis ANA4:n ja B. clausii ANA39:n havaitseminen suoritetaan myös reaaliaikaisella PCR SYBR Greenillä, joka on standardoitu ISO 17025: 2017 -standardin mukaisesti, ja rutiininomaisesti VNU:n tiedeyliopiston entsyymi- ja proteiiniteknologian avainlaboratoriossa.

ELISA-määritykset sytokiinitasoille: pro-inflammatoriset sytokiinitasot (pg/ml), mukaan lukien interleukiini (IL-6, IL-8) ja TNF-alfa, kvantifioidaan käyttämällä entsyymikytkentäistä immunosorbenttimäärityssarjaa (ELISA) valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Hoidon aikana potilaita seurataan päivittäin RSV:n aiheuttamien hengitystieinfektioiden tyypillisten kliinisten oireiden varalta, mukaan lukien vuotava nenä, rintakehän lamaantuminen, hengitysvaikeudet, kuivuvat kohinat, kosteat kuonat, kehon lämpötila (oC), oksimetria (SpO2) (%), pulssi (lyöntiä/min) ja hengitys (lyöntiä/min), kunnes se purkautuu. Lääkärit ja sairaanhoitajat tarkkailevat potilaiden terveydentilaa ja heidän tiedot täytetään potilasasiakirjoihin. Tämän tutkimuksen aikana vanhempien potilaita pyydetään pidättymään muiden probioottien nauttimisesta lapsilleen joko nenäsumutteen tai suun kautta ja pidättäytymään lastensa nenän puhdistamisesta muilla 0,9 % NaCl fysiologisilla suolaliuossumuttimilla.

Tiedonkeruu ja tilastollinen analyysi: yksittäisiä potilastietoja kerätään, minkä jälkeen potilastiedot kerätään ja systematisoidaan tietojoukoksi. LiveSpo Navaxin tehoa arvioidaan ja sitä verrataan 0,9-prosenttiseen NaCl-fysiologiseen suolaliuokseen seuraavien Navax- ja kontrolliryhmissä saatujen kliinisten ja subkliinisten kriteerien perusteella: (i) oireita lievittävä päivä; (ii) RSV-kuormituksen ja samanaikaisen infektion bakteeripitoisuuksien vähentymistasot (2^△Ct). △ Kohdegeenien Ct lasketaan Ct:nä (kynnyssykli) päivänä 3 - Ct päivänä 0, kun taas sisäisen kontrollin Ct säädetään yhtä suureksi kaikkien näytteiden kesken; (iii) IL-6:n, IL-8:n ja TNF-alfa-sytokiinien vähentymistasot. Taulukkoanalyysi suoritetaan dikotomisille muuttujille käyttämällä χ2-testiä tai Fisherin tarkkaa testiä, kun minkä tahansa solun odotusarvo on alle viisi. Jatkuvia muuttujia verrataan käyttämällä joko Wilcoxon-testiä, t-testiä tai Mann-Whitney-testiä, kun tiedot eivät ole normaalijakaumassa. Muuttujien välisiä korrelaatioita arvioidaan Spearmanin korrelaatioanalyysillä. Tilastolliset ja graafiset analyysit suoritetaan GraphPad Prism v8.4.3 -ohjelmistolla (GraphPad Software, CA, USA). Kaikkien analyysien merkitsevyystasoksi asetetaan p < 0,05. P-arvot.

Odotetut tulokset: (i) LiveSpo Navax lievittää RSV-infektion oireita noin 25 % tehokkaammin, kuten 90 % LiveSpo Navaxia käyttävistä potilaista (Navax-ryhmä) on oireeton interventiopäivänä 3-6 oireiden mukaan verrattuna 65 % kontrolliryhmän potilaista; (ii) Navax-ryhmän potilailla RSV-kuormitus pienenee merkittävästi (>10-kertaisesti) kuin kontrolliryhmän potilailla interventiopäivänä 3.