Effecten van neusspray LiveSpo Navax bij de behandeling van acute luchtweginfecties bij kinderen

Respiratoir syncytieel virus (RSV) is het meest voorkomende virus dat acute luchtweginfecties (ARTI's) veroorzaakt bij jonge kinderen, met een hoog risico op ernstige bronchiolitis. RSV-infectiesymptomen variëren van lichte koorts, hoesten, loopneus en piepende ademhaling tot ernstige symptomen zoals ademhalingsmoeilijkheden en ademhalingsfalen. Van cytokines in de luchtwegen van kinderen met bronchiolitis, zoals tumornecrosefactor (TNF-alfa), interleukine-6 ​​(IL-6) en IL-8, is aangetoond dat ze in zeer hoge mate toenemen bij primaire RSV-infectie en extreme verhoging van IL-6 wordt in verband gebracht met plotseling overlijden bij kinderen met een RSV-infectie. De Wereldgezondheidsorganisatie (WHO) schat dat jaarlijks 160.000-600.000 kinderen onder de vijf jaar sterven of in het ziekenhuis worden opgenomen als gevolg van een RSV-infectie. Er is momenteel geen vaccin of specifieke behandeling voor RSV-geïnfecteerde kinderen omdat therapie met monoklonaal antilichaam palivizumab en antiviraal nucleotide ribavirine te duur of te gevaarlijk zijn voor kinderen en alleen worden aanbevolen voor patiënten met een hoog risico.

In de afgelopen jaren zijn preventieve en ondersteunende therapieën voor luchtweginfecties steeds populairder geworden, waarbij probiotica naar voren kwamen als veelbelovende veilige kandidaten voor therapeutische ondersteuning en vermindering van antibiotica. Er wordt gesuggereerd dat probiotica virussen kunnen vangen door directe interacties, of secundaire gezwellen kunnen produceren die virusgroei remmen of het immuunsysteem stimuleren om virusindringing op te vangen. De werkzaamheid van oraal verteerbare probiotica op de luchtwegen van kinderen ontwikkelt zich echter langzaam (normaal gesproken duurt dit ongeveer 3-12 maanden) en wordt voornamelijk gebruikt voor preventie in plaats van ondersteunende behandeling van ARIT's. Als gevolg hiervan zijn alternatieve toedieningsroutes voor probiotica bij de behandeling van ARTI's vereist.

Het doel van de studie is om de effectiviteit te evalueren van neusspray-probiotica die twee bacteriestammen bevatten, Bacillus subtilis en Bacillus clausii bij het voorkomen en ondersteunen van de behandeling van kinderen met acute luchtwegsymptomen als gevolg van RSV-infectie.

Methoden: Er wordt een gerandomiseerde, blinde en gecontroleerde klinische studie uitgevoerd. De ouders van de patiënt moeten de volgende informatie over hun kinderen verstrekken: volledige naam, geslacht, leeftijd, verloskundige geschiedenis, vaccinatiegeschiedenis, geschiedenis van antibioticagebruik... Na geïnformeerde toestemming zullen 100 patiënten met ARTI's als gevolg van RSV gerandomiseerd worden in 2 groepen (n = 50/groep): de controlegroep (genaamd "Control"-groep) gebruikt 0,9% NaCl fysiologische zoutoplossing en een experimentele groep (genaamd de "Navax"-groep) gebruikt de probiotica LiveSpo Navax. De patiënt krijgt een gecodeerde spray in de vorm van een blind monster om de objectiviteit van het onderzoek te waarborgen. De klinische follow-up zal 6 dagen zijn, er zullen nasofaryngeale monsters worden verzameld op dag 0 en dag 3 om mogelijke reducties in virale belasting en co-infectiebacteriën te evalueren, evenals modulatie van overreageerde cytokine-afgifte en de aanwezigheid van probiotische sporen in de neusslijmvlies van de patiënt.

Real-time PCR voor detectie van micro-organismen in nasofaryngeale monsters: semi-kwantitatieve assays voor het meten van veranderingen in RSV-belasting en co-infectie bacteriële concentraties worden uitgevoerd door het real-time RT-PCR/PCR-routineprotocol dat is gestandaardiseerd onder ISO 15189: 2012 criteria en gebruikt in Vietnam National Children's Hospital. Detectie van B. subtilis ANA4 en B. clausii ANA39 worden ook uitgevoerd door middel van real-time PCR SYBR Green die is gestandaardiseerd volgens ISO 17025: 2017-standaard en routinematig in het Key Laboratory of Enzyme and Protein Technology, VNU University of Science.

ELISA-assays voor cytokineniveaus: pro-inflammatoire cytokineniveaus (pg/ml) inclusief interleukine (IL-6, IL-8) en TNF-alfa worden gekwantificeerd met behulp van een enzymgekoppelde immunosorbent assaykit (ELISA) volgens de instructies van de fabrikant.

Tijdens de behandeling worden patiënten dagelijks gecontroleerd op typische klinische symptomen van RSV-geïnduceerde luchtweginfecties, waaronder loopneus, depressie van de borst, moeite met ademhalen, droge hoest, vochtige hoest, lichaamstemperatuur (oC), oxymetrie (SpO2) (%), pols (slagen/min) en adem (slagen/min) tot de ontlading. De gezondheidstoestand van de patiënten wordt geobserveerd door artsen en verpleegkundigen, en hun stukjes informatie worden ingevuld in medische dossiers. Tijdens deze studie wordt de patiënten van de ouders gevraagd om voor hun kinderen geen andere probiotica te consumeren, hetzij via neusspray of orale toediening, en om de neus van hun kinderen niet te reinigen met andere 0,9% NaCl fysiologische zoutsprays.

Gegevensverzameling en statistische analyse: individuele medische dossiers worden verzameld en de informatie van de patiënt wordt vervolgens verzameld en gesystematiseerd in een dataset. De werkzaamheid van LiveSpo Navax wordt geëvalueerd en vergeleken met 0,9% NaCl fysiologische zoutoplossing op basis van de volgende klinische en subklinische criteria verkregen in Navax- en controlegroepen: (i) de dag waarop de symptomen worden verlicht; (ii) de reductieniveaus (2^△Ct) van RSV-belasting en co-infectiebacterieconcentraties. △Ct voor doelwitgenen wordt berekend als Ct (drempelcyclus) op dag 3 - Ct op dag 0, terwijl de Ct van de interne controle wordt aangepast zodat deze gelijk is voor alle monsters; (iii) de reductieniveaus van IL-6, IL-8 en TNF-alfa-cytokinen. De tabelanalyse wordt uitgevoerd op dichotome variabelen met behulp van de χ2-test of Fisher's exact-test wanneer de verwachte waarde van een cel lager is dan vijf. Continue variabelen worden vergeleken met behulp van de Wilcoxon-test, t-test of de Mann-Whitney-test wanneer gegevens niet normaal verdeeld zijn. De correlaties tussen de variabelen worden beoordeeld door Spearman's correlatieanalyse. Statistische en grafische analyses worden uitgevoerd op GraphPad Prism v8.4.3-software (GraphPad Software, CA, VS). Het significantieniveau van alle analyses is vastgesteld op p < 0,05. P-waarden.

Verwachte resultaten: (i) LiveSpo Navax verlicht symptomen van RSV-infectie ongeveer 25% effectiever, zoals aangegeven door 90% van de patiënten die LiveSpo Navax gebruiken (Navax-groep) zijn symptoomvrij op dag 3-6 van de interventie, afhankelijk van de symptomen, in vergelijking met 65% van de patiënten in de controlegroep; (ii) Patiënten in de Navax-groep hebben meer significante verminderingen in RSV-belasting (> 10-voudig) dan patiënten in de controlegroep op dag 3 van de interventie.