Virkninger af næsespraying LiveSpo Navax til behandling af akutte luftvejsinfektioner hos børn

Respiratorisk syncytialvirus (RSV) er den mest almindelige virus, der forårsager akutte luftvejsinfektioner (ARTI'er) hos små børn med en høj risiko for alvorlig bronchiolitis. Symptomer på RSV-infektion spænder fra mild feber, hoste, løbende næse og hvæsende vejrtrækning til alvorlige symptomer som åndedrætsbesvær og respirationssvigt. Cytokiner i luftvejene hos børn med bronchiolitis, såsom tumornekrosefaktor (TNF-alpha), Interleukin-6 (IL-6) og IL-8, har vist sig at stige på et meget højt niveau ved primær RSV-infektion og ekstrem Forhøjelse af IL-6 er forbundet med pludselig død hos børn med RSV-infektion. Verdenssundhedsorganisationen (WHO) anslår, at 160.000-600.000 børn under fem år dør eller indlægges hvert år som følge af RSV-infektion. Der er i øjeblikket ingen vaccine eller specifik behandling til RSV-inficerede børn, fordi monoklonalt antistof palivizumab-terapi og antiviralt nukleotidlægemiddel ribavirin enten er for dyrt eller for farligt for børn og kun anbefales til højrisikopatienter.

I de senere år er forebyggende og understøttende behandlinger for luftvejsinfektion vokset i popularitet, hvor probiotika er blevet lovende sikre kandidater til terapeutisk støtte og antibiotikareduktion. Det foreslås, at probiotika kan fange vira gennem direkte interaktioner eller producere sekundære vækster, der hæmmer virusvækst eller stimulerer immunsystemet til at fange virusindtrængen. Effekten af ​​oralt fordøjet probiotika på børns luftveje har imidlertid været langsom til at udvikle sig (normalt tager det omkring 3-12 måneder) og bruges primært til forebyggelse frem for støttende behandling af ARIT. Som følge heraf kræves alternative leveringsveje for probiotika i behandlingen af ​​ARTI'er.

Formålet med undersøgelsen om at evaluere effektiviteten af ​​næsesprayende probiotika indeholdende to bakteriestammer, Bacillus subtilis og Bacillus clausii, til at forebygge og understøtte behandlingen af ​​børn med akutte luftvejssymptomer på grund af RSV-infektion.

Metoder: Et randomiseret, blindt og kontrolleret klinisk forsøg udføres. Patientens forældre er forpligtet til at give følgende oplysninger om deres børn: fulde navn, køn, alder, obstetrisk historie, vaccinationshistorie, antibiotikabrugshistorie... Efter informeret samtykke vil 100 patienter med ARTI'er på grund af RSV blive randomiseret i 2 grupper (n = 50/gruppe): kontrolgruppen (kaldet "Kontrol"-gruppen) bruger 0,9% NaCl fysiologisk saltvand og en eksperimentel gruppe (kaldet "Navax"-gruppen) bruger probiotika LiveSpo Navax. Patienten får en kodet spray i form af en blindprøve for at sikre undersøgelsens objektivitet. Den kliniske opfølgning vil vare 6 dage, nasopharyngeale prøver vil blive indsamlet på dag 0 og dag 3 for at evaluere potentielle reduktioner i viral belastning og co-infektionsbakterier, samt modulering af overreageret cytokinfrigivelse og tilstedeværelsen af ​​probiotiske sporer i patientens næseslimhinde.

Real-time PCR til påvisning af mikroorganisme i nasopharyngeale prøver: semikvantitative assays til måling af ændringer i RSV-belastning og co-infektion bakterielle koncentrationer udføres af real-time RT-PCR/PCR rutineprotokollen, som er blevet standardiseret under ISO 15189: 2012 kriterier og brugt i Vietnam National Children's Hospital. Påvisning af B. subtilis ANA4 og B. clausii ANA39 udføres også af real-time PCR SYBR Green, der er blevet standardiseret under ISO 17025: 2017 standarden og rutinemæssigt i Key Laboratory of Enzyme and Protein Technology, VNU University of Science.

ELISA-assays for cytokinniveauer: Pro-inflammatoriske cytokinniveauer (pg/ml) inklusive interleukin (IL-6, IL-8) og TNF-alfa kvantificeres ved hjælp af et enzymbundet immunosorbent-assaykit (ELISA) i henhold til producentens instruktioner.

Under behandlingen overvåges patienter dagligt for typiske kliniske symptomer på RSV-inducerede luftvejsinfektioner, herunder løbende næse, brystdepression, åndedrætsbesvær, tørre rystelser, fugtige rynker, kropstemperatur (oC), oxymetri (SpO2) (%), puls (slag/min) og åndedræt (slag/min) indtil udledning. Patienternes helbredsforhold observeres af læger og sygeplejersker, og deres oplysninger udfyldes i journaler. I løbet af denne undersøgelse bliver forældres patienter bedt om at afholde sig fra at indtage andre probiotika til deres børn, enten via næsespray eller oral administration og afstå fra at rense næsen for deres børn med andre 0,9 % NaCl fysiologiske saltvandssprøjter.

Dataindsamling og statistisk analyse: individuelle journaler indsamles, og patientens informationer samles derefter og systematiseres i et datasæt. Effekten af ​​LiveSpo Navax evalueres og sammenlignes med 0,9 % NaCl fysiologisk saltvand baseret på følgende kliniske og subkliniske kriterier opnået i Navax- og kontrolgrupper: (i) den symptomatisk lindrende dag; (ii) reduktionsniveauerne (2^△Ct) af RSV-belastning og koncentrationer af co-infektionsbakterier. △Ct for målgener beregnes som Ct (tærskelcyklus) på dag 3 - Ct på ​​dag 0, mens Ct for intern kontrol justeres til at være ens blandt alle prøver; (iii) reduktionsniveauerne af IL-6-, IL-8- og TNF-alfa-cytokiner. Den tabelformede analyse udføres på dikotome variable ved hjælp af χ2-testen eller Fishers eksakte test, når den forventede værdi af en celle er under fem. Kontinuerlige variable sammenlignes ved hjælp af enten Wilcoxon-testen, t-testen eller Mann-Whitney-testen, når data ikke er normalfordelt. Korrelationerne mellem variablerne vurderes ved Spearmans korrelationsanalyse. Statistiske og grafiske analyser udføres på GraphPad Prism v8.4.3 software (GraphPad Software, CA, USA). Signifikansniveauet for alle analyser er sat til p < 0,05. P-værdier.

Forventede resultater: (i) LiveSpo Navax lindrer RSV-infektionssymptomer omkring 25 % mere effektivt, som angivet af 90 % af patienter, der bruger LiveSpo Navax (Navax-gruppen), er symptomfrie på dag 3-6 af interventionen afhængigt af symptomer, sammenlignet med 65 % af patienterne i kontrolgruppen; (ii) Patienter i Navax-gruppen har mere signifikant reduktion i RSV-belastning (>10 gange) end patienter i kontrolgruppen på dag 3 af intervention.