Účinky nosního spreje LiveSpo Navax při léčbě akutních respiračních infekcí u dětí

Respirační syncyciální virus (RSV) je nejběžnějším virem, který způsobuje akutní infekce dýchacích cest (ARTI) u malých dětí s vysokým rizikem závažné bronchiolitidy. Příznaky infekce RSV se pohybují od mírné horečky, kašle, rýmy a sípání až po závažné příznaky, jako jsou potíže s dýcháním a respirační selhání. Ukázalo se, že cytokiny v dýchacích cestách dětí s bronchiolitidou, jako je tumor nekrotizující faktor (TNF-alfa), interleukin-6 (IL-6) a IL-8, se zvyšují na velmi vysoké úrovni u primární infekce RSV a extrémních elevace IL-6 je spojena s náhlou smrtí u dětí s infekcí RSV. Světová zdravotnická organizace (WHO) odhaduje, že 160 000–600 000 dětí ve věku do pěti let zemře nebo je hospitalizováno každý rok v důsledku infekce RSV. V současné době neexistuje žádná vakcína ani specifická léčba pro děti infikované RSV, protože terapie palivizumabem monoklonálními protilátkami a antivirovým nukleotidovým lékem ribavirinem jsou pro děti buď příliš drahé, nebo příliš nebezpečné a jsou doporučovány pouze pro vysoce rizikové pacienty.

V posledních letech vzrostla popularita preventivních a podpůrných terapií infekcí dýchacích cest, přičemž probiotika se objevila jako slibní bezpeční kandidáti na terapeutickou podporu a redukci antibiotik. Předpokládá se, že probiotika mohou zachycovat viry prostřednictvím přímých interakcí nebo produkovat sekundární růsty, které inhibují růst viru nebo stimulují imunitní systém k zachycení pronikání viru. Účinnost perorálně natrávených probiotik na dýchací cesty dětí se však vyvíjela pomalu (běžně to trvá asi 3–12 měsíců) a primárně se používá spíše k prevenci než k podpůrné léčbě ARIT. V důsledku toho jsou vyžadovány alternativní cesty podávání probiotik při léčbě ARTI.

Cílem studie je zhodnotit účinnost nosních probiotik obsahujících dva bakteriální kmeny Bacillus subtilis a Bacillus clausii v prevenci a podpoře léčby dětí s akutními respiračními příznaky v důsledku infekce RSV.

Metody: Provádí se randomizovaná, slepá a kontrolovaná klinická studie. Rodiče pacienta jsou povinni poskytnout následující informace o svých dětech: celé jméno, pohlaví, věk, porodnická anamnéza, vakcinační historie, historie užívání antibiotik… Po informovaném souhlasu bude 100 pacientů s ARTI kvůli RSV randomizováno do 2 skupin (n = 50/skupina): kontrolní skupina (nazvaná "Kontrolní" skupina) používá 0,9% NaCl fyziologický roztok a experimentální skupina (pojmenovaná skupina "Navax") používá probiotika LiveSpo Navax. Pacientovi je podán kódovaný sprej ve formě slepého vzorku, aby byla zajištěna objektivita studie. Klinické sledování bude 6 dní, vzorky z nosohltanu budou odebrány v den 0 a den 3, aby se vyhodnotilo potenciální snížení virové zátěže a koinfekce bakterií, stejně jako modulace nadměrného uvolňování cytokinů a přítomnost probiotických spor v nosní sliznice pacienta.

PCR v reálném čase pro detekci mikroorganismů ve vzorcích nosohltanu: semikvantitativní testy pro měření změn v zátěži RSV a koncentrací koinfekce bakterií se provádějí pomocí rutinního protokolu RT-PCR/PCR v reálném čase, který byl standardizován podle ISO 15189: 2012 a používá se ve Vietnamské národní dětské nemocnici. Detekce B. subtilis ANA4 a B. clausii ANA39 se také provádí pomocí PCR v reálném čase SYBR Green, která byla standardizována podle normy ISO 17025: 2017 a rutinně v Key Laboratory of Enzyme and Protein Technology, VNU University of Science.

Testy ELISA na hladiny cytokinů: hladiny prozánětlivých cytokinů (pg/ml) včetně interleukinu (IL-6, IL-8) a TNF-alfa jsou kvantifikovány pomocí soupravy pro imunosorbentní test s enzymatickým spojením (ELISA) podle pokynů výrobce.

Během léčby jsou pacienti denně sledováni kvůli typickým klinickým příznakům infekcí dýchacích cest vyvolaných RSV, včetně rýmy, deprese hrudníku, potíží s dýcháním, suchého chrochtání, vlhkého chrochtání, tělesné teploty (oC), oxymetrie (SpO2) (%), pulzu (údery/min) a dech (údery/min) až do vybití. Zdravotní stav pacientů sledují lékaři a sestry a jejich údaje jsou vyplněny do zdravotnické dokumentace. Během této studie jsou pacienti rodičů požádáni, aby se zdrželi konzumace jiných probiotik pro své děti, ať už prostřednictvím nosního spreje nebo perorálního podávání, a aby svým dětem nečistili nos jinými spreji s fyziologickým roztokem 0,9% NaCl.

Sběr dat a statistická analýza: shromažďují se jednotlivé lékařské záznamy a poté se shromažďují a systematizují informace o pacientovi do souboru dat. Účinnost LiveSpo Navax se hodnotí a porovnává s 0,9% fyziologickým roztokem NaCl na základě následujících klinických a subklinických kritérií získaných ve skupinách Navax a kontrolních skupinách: (i) den zmírňující příznaky; (ii) úrovně snížení (2^△Ct) zátěže RSV a koncentrací koinfekčních bakterií. △Ct pro cílové geny se vypočítá jako Ct (prahový cyklus) v den 3 - Ct v den 0, zatímco Ct vnitřní kontroly je upraveno tak, aby bylo stejné pro všechny vzorky; (iii) úrovně snížení IL-6, IL-8 a TNF-alfa cytokinů. Tabulková analýza se provádí na dichotomických proměnných pomocí χ2 testu nebo Fisherova exaktního testu, když je očekávaná hodnota kterékoli buňky nižší než pět. Spojité proměnné se porovnávají buď pomocí Wilcoxonova testu, t-testu nebo Mann-Whitneyho testu, pokud data nejsou normálně distribuována. Korelace mezi proměnnými jsou hodnoceny Spearmanovou korelační analýzou. Statistické a grafické analýzy se provádějí na softwaru GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, USA). Hladina významnosti všech analýz je nastavena na p < 0,05. P-hodnoty.

Očekávané výsledky: (i) LiveSpo Navax zmírňuje příznaky infekce RSV asi o 25 % účinněji, jak uvádí 90 % pacientů používajících LiveSpo Navax (skupina Navax) bez příznaků v den 3-6 zásahu v závislosti na příznacích ve srovnání s 65 % pacientů v kontrolní skupině; (ii) Pacienti ve skupině Navax mají významnější snížení zátěže RSV (>10krát) než pacienti v kontrolní skupině v den 3 intervence.