Efeitos do spray nasal LiveSpo Navax no tratamento de infecções respiratórias agudas em crianças

O vírus sincicial respiratório (RSV) é o vírus mais comum que causa infecções agudas do trato respiratório (ARTIs) em crianças pequenas, com alto risco de bronquiolite grave. Os sintomas da infecção por RSV variam de febre leve, tosse, coriza e respiração ofegante a sintomas graves, como dificuldade para respirar e insuficiência respiratória. Citocinas nas vias aéreas de crianças com bronquiolite, como fator de necrose tumoral (TNF-alfa), interleucina-6 (IL-6) e IL-8, demonstraram aumentar em um nível muito alto na infecção primária por RSV e em níveis extremos a elevação de IL-6 está associada à morte súbita em crianças com infecção por RSV. A Organização Mundial da Saúde (OMS) estima que 160.000 a 600.000 crianças menores de cinco anos morrem ou são hospitalizadas a cada ano como resultado da infecção por RSV. Atualmente, não há vacina ou tratamento específico para crianças infectadas por RSV porque a terapia com anticorpo monoclonal palivizumabe e o nucleotídeo antiviral ribavirina são muito caros ou muito perigosos para crianças e são recomendados apenas para pacientes de alto risco.

Nos últimos anos, terapias preventivas e de suporte para infecção do trato respiratório cresceram em popularidade, com os probióticos emergindo como candidatos seguros e promissores para suporte terapêutico e redução de antibióticos. Sugere-se que os probióticos podem capturar vírus por meio de interações diretas ou produzir crescimentos secundários que inibem o crescimento do vírus ou estimulam o sistema imunológico a capturar a intrusão do vírus. No entanto, a eficácia dos probióticos digeridos orais nas vias respiratórias das crianças tem se desenvolvido lentamente (normalmente leva cerca de 3 a 12 meses) e é usada principalmente para prevenção, em vez de tratamento de suporte de ARITs. Como resultado, são necessárias rotas alternativas de entrega de probióticos no tratamento de ARTIs.

O objetivo do estudo é avaliar a eficácia de probióticos de pulverização nasal contendo duas cepas bacterianas, Bacillus subtilis e Bacillus clausii, na prevenção e no suporte ao tratamento de crianças com sintomas respiratórios agudos devido à infecção por VSR.

Métodos: Realiza-se um ensaio clínico randomizado, cego e controlado. Os pais do paciente são obrigados a fornecer as seguintes informações de seus filhos: nome completo, sexo, idade, histórico obstétrico, histórico de vacinação, histórico de uso de antibióticos… = 50/grupo): o grupo controle (denominado grupo "Controle") utiliza solução salina fisiológica NaCl 0,9% e um grupo experimental (denominado grupo "Navax") utiliza os probióticos LiveSpo Navax. O paciente recebe um spray codificado na forma de uma amostra cega para garantir a objetividade do estudo. O acompanhamento clínico será de 6 dias, amostras de nasofaringe serão coletadas no dia 0 e no dia 3 para avaliar possíveis reduções na carga viral e bactérias da co-infecção, bem como modulação da liberação exagerada de citocinas e presença de esporos probióticos no mucosa nasal do paciente.

PCR em tempo real para detecção de microrganismo em amostras nasofaríngeas: ensaios semiquantitativos para medir mudanças na carga de RSV e concentrações bacterianas de co-infecção são conduzidos pelo protocolo de rotina RT-PCR/PCR em tempo real que foi padronizado pela ISO 15189: Critérios de 2012 e usados ​​no Vietnam National Children's Hospital. A detecção de B. subtilis ANA4 e B. clausii ANA39 também é realizada por PCR em tempo real SYBR Green, que foi padronizado sob o padrão ISO 17025: 2017 e rotineiramente no Key Laboratory of Enzyme and Protein Technology, VNU University of Science.

Ensaios ELISA para níveis de citocinas: os níveis de citocinas pró-inflamatórias (pg/mL), incluindo interleucina (IL-6, IL-8) e TNF-alfa, são quantificados usando um kit de ensaio imunoenzimático (ELISA) de acordo com as instruções do fabricante.

Durante o tratamento, os pacientes são monitorados diariamente quanto a sintomas clínicos típicos de infecções do trato respiratório induzidas por VSR, incluindo coriza, depressão torácica, dificuldade respiratória, estertores secos, estertores úmidos, temperatura corporal (oC), oximetria (SpO2) (%), pulso (batidas/min) e respiração (batidas/min) até a alta. As condições de saúde dos pacientes são observadas por médicos e enfermeiras, e seus dados são preenchidos em prontuários. Durante este estudo, os pacientes dos pais são solicitados a abster-se de consumir outros probióticos para seus filhos, seja por spray nasal ou administração oral, e de limpar o nariz de seus filhos com outros borrifadores de solução salina fisiológica de NaCl a 0,9%.

Coleta de dados e análise estatística: são coletados prontuários individuais e as informações do paciente são reunidas e sistematizadas em um banco de dados. A eficácia de LiveSpo Navax é avaliada e comparada com solução salina fisiológica de NaCl a 0,9% com base nos seguintes critérios clínicos e subclínicos obtidos nos grupos Navax e Controle: (i) o dia de alívio sintomático; (ii) os níveis de redução (2^△Ct) da carga de RSV e as concentrações de bactérias de co-infecção. △Ct para genes-alvo é calculado como Ct (ciclo limiar) no dia 3 - Ct no dia 0, enquanto o Ct do controle interno é ajustado para ser igual entre todas as amostras; (iii) os níveis de redução das citocinas IL-6, IL-8 e TNF-alfa. A análise tabular é realizada em variáveis ​​dicotômicas usando o teste χ2 ou o teste exato de Fisher quando o valor esperado de qualquer célula é inferior a cinco. As variáveis ​​contínuas são comparadas usando o teste de Wilcoxon, teste t ou o teste de Mann-Whitney quando os dados não são normalmente distribuídos. As correlações entre as variáveis ​​são avaliadas pela análise de correlação de Spearman. As análises estatísticas e gráficas são realizadas no software GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, EUA). O nível de significância de todas as análises é definido em p < 0,05. Valores P.

Resultados esperados: (i) LiveSpo Navax alivia os sintomas de infecção por RSV com cerca de 25% mais eficácia, conforme indicado por 90% dos pacientes que usam LiveSpo Navax (grupo Navax) sem sintomas no dia 3-6 da intervenção, dependendo dos sintomas, em comparação com 65% dos pacientes do grupo Controle; (ii) Os pacientes do grupo Navax apresentam reduções mais significativas na carga de VSR (>10 vezes) do que os pacientes do grupo Controle no dia 3 da intervenção.