Эффекты назального спрея LiveSpo Navax при лечении острых респираторных инфекций у детей

Респираторно-синцитиальный вирус (РСВ) является наиболее распространенным вирусом, вызывающим острые инфекции дыхательных путей (ОРДП) у детей раннего возраста с высоким риском серьезного бронхиолита. Симптомы инфекции RSV варьируются от легкой лихорадки, кашля, насморка и хрипов до тяжелых симптомов, таких как затрудненное дыхание и дыхательная недостаточность. Было показано, что цитокины в дыхательных путях детей с бронхиолитом, такие как фактор некроза опухоли (ФНО-альфа), интерлейкин-6 (ИЛ-6) и ИЛ-8, повышаются на очень высоком уровне при первичной инфекции РСВ, а в крайних случаях Повышение уровня ИЛ-6 связано с внезапной смертью у детей с РСВ-инфекцией. По оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), от 160 000 до 600 000 детей в возрасте до пяти лет ежегодно умирают или госпитализируются в результате инфекции РСВ. В настоящее время не существует вакцины или специфического лечения для детей, инфицированных РСВ, поскольку терапия моноклональными антителами паливизумабом и противовирусным нуклеотидным препаратом рибавирином либо слишком дороги, либо слишком опасны для детей и рекомендуются только для пациентов с высоким риском.

В последние годы возросла популярность профилактической и поддерживающей терапии инфекций дыхательных путей, а пробиотики стали перспективными безопасными кандидатами для терапевтической поддержки и сокращения антибиотиков. Предполагается, что пробиотики могут захватывать вирусы путем прямого взаимодействия или вызывать вторичный рост, который подавляет рост вируса или стимулирует иммунную систему для захвата вирусного вторжения. Однако эффективность пероральных переваренных пробиотиков в отношении дыхательных путей детей развивается медленно (обычно это занимает около 3–12 месяцев) и в основном используется для профилактики, а не для поддерживающего лечения ОРИТ. В результате требуются альтернативные пути доставки пробиотиков при лечении ОРВИ.

Цель исследования — оценить эффективность пробиотиков для назального спрея, содержащих два бактериальных штамма, Bacillus subtilis и Bacillus clausii, в профилактике и поддержке лечения детей с острыми респираторными симптомами, вызванными RSV-инфекцией.

Методы. Проведено рандомизированное, слепое и контролируемое клиническое исследование. Родители пациента должны предоставить следующую информацию о своих детях: полное имя, пол, возраст, акушерский анамнез, историю вакцинации, историю использования антибиотиков… После получения информированного согласия 100 пациентов с ОРВИ, вызванными РСВ, будут рандомизированы в 2 группы (n = 50/группа): контрольная группа (названная «контрольной») использовала 0,9% физиологический раствор NaCl, а экспериментальная группа (названная «группа «навакс») использовала пробиотики LiveSpo Navax. Пациенту выдается закодированный спрей в виде слепой пробы для обеспечения объективности исследования. Клиническое наблюдение будет длиться 6 дней, образцы из носоглотки будут собираться на 0-й и 3-й день для оценки потенциального снижения вирусной нагрузки и коинфицированных бактерий, а также модуляции высвобождения гиперреагировавших цитокинов и присутствия пробиотических спор в слизистой оболочке. слизистая носа пациента.

ПЦР в реальном времени для обнаружения микроорганизмов в образцах из носоглотки: полуколичественные анализы для измерения изменений нагрузки РСВ и концентраций бактерий при коинфекции проводятся по обычному протоколу ОТ-ПЦР/ПЦР в реальном времени, стандартизированному в соответствии с ISO 15189: 2012 года и используется во Вьетнамской национальной детской больнице. Обнаружение B. subtilis ANA4 и B. clausii ANA39 также проводится с помощью ПЦР в реальном времени SYBR Green, которая была стандартизирована в соответствии со стандартом ISO 17025: 2017 и регулярно проводится в Ключевой лаборатории ферментных и белковых технологий Научного университета ВНУ.

ELISA для определения уровней цитокинов: уровни провоспалительных цитокинов (пг/мл), включая интерлейкин (IL-6, IL-8) и TNF-альфа, количественно определяют с использованием набора для твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) в соответствии с инструкциями производителя.

Во время лечения у пациентов ежедневно контролируют типичные клинические симптомы РСВ-индуцированных инфекций дыхательных путей, включая насморк, угнетение грудной клетки, затрудненное дыхание, сухие хрипы, влажные хрипы, температуру тела (оС), оксиметрию (SpO2) (%), пульс (уд/мин) и дыхание (уд/мин) до разрядки. За состоянием здоровья пациентов наблюдают врачи и медсестры, а их сведения заносятся в медицинские карты. В ходе этого исследования пациентов родителей просили воздерживаться от потребления для своих детей других пробиотиков либо в виде назального спрея, либо перорального введения, а также воздерживаться от очистки носа для своих детей с помощью других распылителей физиологического раствора 0,9% NaCl.

Сбор данных и статистический анализ: собираются отдельные медицинские записи, а затем информация о пациенте собирается и систематизируется в наборе данных. Эффективность LiveSpo Navax оценивается и сравнивается с 0,9% физиологическим раствором NaCl на основе следующих клинических и субклинических критериев, полученных в группах Navax и Control: (i) симптоматический день; (ii) уровни снижения (2 ^ △ Ct) нагрузки RSV и концентрации бактерий коинфекции. △Ct для целевых генов рассчитывается как Ct (пороговый цикл) на 3-й день - Ct на 0-й день, в то время как Ct внутреннего контроля корректируется так, чтобы он был одинаковым для всех образцов; (iii) снижение уровней цитокинов IL-6, IL-8 и TNF-альфа. Табличный анализ выполняется на дихотомических переменных с использованием критерия χ2 или точного критерия Фишера, когда математическое ожидание любой ячейки меньше пяти. Непрерывные переменные сравниваются с использованием критерия Уилкоксона, t-критерия или критерия Манна-Уитни, когда данные не распределены нормально. Корреляции между переменными оцениваются с помощью корреляционного анализа Спирмена. Статистический и графический анализы выполнены с помощью программного обеспечения GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, Калифорния, США). Уровень значимости всех анализов установлен на уровне p < 0,05. P-значения.

Ожидаемые результаты: (i) LiveSpo Navax облегчает симптомы РСВ-инфекции примерно на 25% эффективнее, о чем свидетельствуют 90% пациентов, использующих LiveSpo Navax (группа Navax), у которых отсутствуют симптомы на 3–6-й день вмешательства в зависимости от симптомов, по сравнению с 65% пациентов в контрольной группе; (ii) У пациентов в группе Navax наблюдалось более значительное снижение нагрузки RSV (более чем в 10 раз), чем у пациентов в контрольной группе на 3-й день вмешательства.