Effetti dell'irrorazione nasale di LiveSpo Navax nel trattamento delle infezioni respiratorie acute nei bambini

Il virus respiratorio sinciziale (RSV) è il virus più comune che causa infezioni acute delle vie respiratorie (ARTI) nei bambini piccoli, con un alto rischio di bronchiolite grave. I sintomi dell'infezione da RSV vanno da febbre lieve, tosse, naso che cola e respiro sibilante a sintomi gravi come difficoltà respiratorie e insufficienza respiratoria. È stato dimostrato che le citochine nelle vie aeree dei bambini con bronchiolite, come il fattore di necrosi tumorale (TNF-alfa), l'interleuchina-6 (IL-6) e l'IL-8, aumentano a un livello molto elevato nell'infezione primaria da RSV e in condizioni estreme l'aumento di IL-6 è associato a morte improvvisa nei bambini con infezione da RSV. L'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) stima che ogni anno 160.000-600.000 bambini sotto i cinque anni muoiano o vengano ricoverati in ospedale a causa dell'infezione da RSV. Attualmente non esiste un vaccino o un trattamento specifico per i bambini con infezione da RSV perché la terapia con anticorpi monoclonali palivizumab e il farmaco antivirale nucleotidico ribavirina sono troppo costosi o troppo pericolosi per i bambini e sono raccomandati solo per i pazienti ad alto rischio.

Negli ultimi anni, le terapie preventive e di supporto per le infezioni del tratto respiratorio sono cresciute in popolarità, con i probiotici che stanno emergendo come promettenti candidati sicuri per il supporto terapeutico e la riduzione degli antibiotici. Si suggerisce che i probiotici possano catturare i virus attraverso interazioni dirette o produrre crescite secondarie che inibiscono la crescita del virus o stimolare il sistema immunitario a catturare l'intrusione del virus. Tuttavia, l'efficacia dei probiotici digeriti per via orale sulle vie respiratorie dei bambini è stata lenta a svilupparsi (normalmente ci vogliono circa 3-12 mesi) e viene utilizzata principalmente per la prevenzione piuttosto che per il trattamento di supporto delle ARIT. Di conseguenza, sono necessarie vie di consegna alternative per i probiotici nel trattamento delle ARTI.

Lo scopo dello studio è quello di valutare l'efficacia dei probiotici spray nasali contenenti due ceppi batterici, Bacillus subtilis e Bacillus clausii, nella prevenzione e nel supporto del trattamento di bambini con sintomi respiratori acuti dovuti a infezione da RSV.

Metodi: viene condotto uno studio clinico randomizzato, cieco e controllato. I genitori del paziente sono tenuti a fornire le seguenti informazioni sui propri figli: nome completo, sesso, età, storia ostetrica, storia vaccinale, storia dell'uso di antibiotici... Dopo il consenso informato, 100 pazienti con ARTI a causa di RSV saranno randomizzati in 2 gruppi (n = 50/gruppo): il gruppo di controllo (denominato gruppo "Controllo") utilizza soluzione fisiologica NaCl allo 0,9% e un gruppo sperimentale (denominato gruppo "Navax") utilizza i probiotici LiveSpo Navax. Al paziente viene somministrato uno spray codificato sotto forma di campione cieco per garantire l'obiettività dello studio. Il follow-up clinico sarà di 6 giorni, i campioni nasofaringei saranno raccolti al giorno 0 e al giorno 3 per valutare le potenziali riduzioni della carica virale e dei batteri di co-infezione, nonché la modulazione del rilascio di citochine con reazione eccessiva e la presenza di spore probiotiche nel mucosa nasale del paziente.

PCR in tempo reale per il rilevamento di microrganismi in campioni rinofaringei: i test semiquantitativi per misurare le variazioni del carico di RSV e le concentrazioni batteriche di coinfezione sono condotti dal protocollo di routine RT-PCR/PCR in tempo reale che è stato standardizzato secondo ISO 15189: Criteri del 2012 e utilizzati nel Vietnam National Children's Hospital. Il rilevamento di B. subtilis ANA4 e B. clausii ANA39 è condotto anche mediante PCR in tempo reale SYBR Green che è stato standardizzato secondo lo standard ISO 17025: 2017 e regolarmente nel Key Laboratory of Enzyme and Protein Technology, VNU University of Science.

Saggi ELISA per i livelli di citochine: i livelli di citochine pro-infiammatorie (pg/mL) inclusa l'interleuchina (IL-6, IL-8) e il TNF-alfa sono quantificati utilizzando un kit di analisi dell'immunosorbente legato all'enzima (ELISA) secondo le istruzioni del produttore.

Durante il trattamento, i pazienti vengono monitorati quotidianamente per i sintomi clinici tipici delle infezioni del tratto respiratorio indotte da VRS, tra cui naso che cola, depressione toracica, difficoltà respiratorie, rantoli secchi, rantoli umidi, temperatura corporea (oC), ossimetria (SpO2) (%), polso (battiti/min) e respiro (battiti/min) fino alla dimissione. Le condizioni di salute dei pazienti vengono osservate da medici e infermieri e le loro informazioni vengono inserite nelle cartelle cliniche. Durante questo studio, ai genitori dei pazienti viene chiesto di astenersi dal consumo per i propri figli di altri probiotici, sia tramite spray nasale che somministrazione orale e di astenersi dal pulire il naso dei propri figli con altri nebulizzatori di soluzione fisiologica NaCl allo 0,9%.

Raccolta dati e analisi statistica: vengono raccolte le cartelle cliniche individuali e le informazioni del paziente vengono quindi raccolte e sistematizzate in un set di dati. L'efficacia di LiveSpo Navax viene valutata e confrontata con una soluzione fisiologica NaCl allo 0,9% sulla base dei seguenti criteri clinici e subclinici ottenuti nei gruppi Navax e di controllo: (i) il giorno di sollievo dai sintomi; (ii) i livelli di riduzione (2^△Ct) della carica di RSV e delle concentrazioni di batteri di coinfezione. △Ct per i geni target è calcolato come Ct (ciclo di soglia) al giorno 3 - Ct al giorno 0 mentre il Ct del controllo interno è aggiustato per essere uguale tra tutti i campioni; (iii) i livelli di riduzione delle citochine IL-6, IL-8 e TNF-alfa. L'analisi tabulare viene eseguita su variabili dicotomiche utilizzando il test χ2 o il test esatto di Fisher quando il valore atteso di qualsiasi cella è inferiore a cinque. Le variabili continue vengono confrontate utilizzando il test di Wilcoxon, il test t o il test di Mann-Whitney quando i dati non sono distribuiti normalmente. Le correlazioni tra le variabili sono valutate dall'analisi di correlazione di Spearman. Le analisi statistiche e grafiche vengono eseguite sul software GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, USA). Il livello di significatività di tutte le analisi è fissato a p <0,05. Valori P.

Risultati attesi: (i) LiveSpo Navax allevia i sintomi dell'infezione da RSV in modo più efficace di circa il 25%, come indicato dal 90% dei pazienti che utilizzano LiveSpo Navax (gruppo Navax) sono asintomatici al giorno 3-6 dell'intervento a seconda dei sintomi, rispetto a 65% dei pazienti nel gruppo di controllo; (ii) I pazienti nel gruppo Navax hanno riduzioni più significative del carico di RSV (> 10 volte) rispetto ai pazienti nel gruppo di controllo al giorno 3 dell'intervento.