Étude des mégacaryocytes de patients présentant des vésicules plaquettaires anormales

Les troubles hémorragiques congénitaux caractérisés par des granules plaquettaires anormaux comprennent le syndrome des plaquettes grises (GPS ; alpha-granules défectueux), le syndrome de Hermansky-Pudlak (HPS ; delta-granules défectueux) et le déficit combiné en alpha delta-stockage pool (alpha delta-SPD). D'autres maladies associées à des anomalies variables des granules gamma plaquettaires comprennent les syndromes de Chediak-Higashi, Griscelli, Wiskott-Aldrich et Thrombocytopenia Absent Radius. Ces troubles sont des modèles pour l'étude de la formation des organites dans les mégacaryocytes et les plaquettes. Les caractéristiques de la mégacaryocytopoïèse dans ces troubles n'ont pas été étudiées car les mégacaryocytes n'ont pas pu être cultivés à partir de patients en quantités suffisantes à des fins expérimentales. Des progrès récents ont permis de cultiver des mégacaryocytes en utilisant des milieux sans sérum additionnés de thrombopoïétine humaine recombinante (TPO). De tels mégacaryocytes humains cultivés, amplifiés à partir de cellules souches CD34+ dérivées de la moelle osseuse, synthétisent et stockent des protéines organites et produisent des plaquettes fonctionnelles. Dans ce protocole, nous prévoyons d'obtenir des aspirations de moelle osseuse de 40 enfants et adultes (âgés de 2 à 80 ans) avec GPS, HPS et troubles apparentés. Les patients admis au NIH Clinical Center sur des protocoles spécifiques liés à la maladie seront inscrits à ce protocole lors de leurs visites de routine de 3 à 5 jours. Nous cultiverons des mégacaryocytes à partir de cellules souches CD34+ isolées d'aspirats de moelle osseuse. Les études de mégacaryocytes en culture comprendront l'évaluation de la membrane granulaire et des protéines solubles à l'aide d'anticorps fluorescents et de la microscopie immunoélectronique et la comparaison des profils d'expression de l'ARN et des protéines entre les cellules normales et les cellules du patient. Des précautions seront prises pour prévenir le risque principal de l'aspiration de la moelle osseuse, c'est-à-dire un saignement prolongé au site d'aspiration. Les études diagnostiques standard sur l'échantillon de moelle osseuse peuvent révéler des informations qui peuvent bénéficier directement aux patients. Cependant, l'avantage plus large de cette étude est l'acquisition d'une meilleure compréhension des caractéristiques des troubles fonctionnels des plaquettes et du processus de formation des vésicules intracellulaires.