Estudio de megacariocitos de pacientes con vesículas plaquetarias anormales

Los trastornos hemorrágicos congénitos caracterizados por gránulos plaquetarios anormales incluyen el síndrome de plaquetas grises (GPS; gránulos alfa defectuosos), el síndrome de Hermansky-Pudlak (HPS; gránulos delta defectuosos) y la deficiencia combinada de reserva de almacenamiento alfa delta (alfa delta-SPD). Otras enfermedades asociadas con defectos variables en los gránulos gamma plaquetarios incluyen los síndromes de Chediak-Higashi, Griscelli, Wiskott-Aldrich y trombocitopenia de radio ausente. Estos trastornos son modelos para el estudio de la formación de orgánulos en megacariocitos y plaquetas. No se han investigado las características de la megacariocitopoyesis en estos trastornos porque no se pudieron cultivar megacariocitos de pacientes en cantidades suficientes para fines experimentales. Avances recientes han hecho posible el cultivo de megacariocitos utilizando medios libres de suero suplementados con trombopoyetina humana recombinante (TPO). Dichos megacariocitos humanos cultivados, amplificados a partir de células madre CD34+ derivadas de médula ósea, sintetizan y almacenan proteínas de organelos y producen plaquetas funcionales. En este protocolo, planeamos obtener aspirados de médula ósea de 40 niños y adultos (edades de 2 a 80 años) con GPS, HPS y trastornos relacionados. Los pacientes ingresados ​​en el Centro Clínico de los NIH con protocolos relacionados con enfermedades específicas se inscribirán en este protocolo durante sus visitas de rutina de 3 a 5 días. Cultivaremos megacariocitos a partir de células madre CD34+ aisladas de aspirados de médula ósea. Los estudios de megacariocitos cultivados incluirán la evaluación de la membrana de los gránulos y las proteínas solubles utilizando anticuerpos fluorescentes y microscopía inmunoelectrónica y la comparación de patrones de expresión de ARN y proteínas entre células normales y de pacientes. Se tomarán precauciones para prevenir el riesgo primario de la aspiración de médula ósea, es decir, sangrado prolongado en el sitio de aspiración. Los estudios de diagnóstico estándar en la muestra de médula ósea pueden revelar información que puede beneficiar directamente a los pacientes. Sin embargo, el beneficio más amplio de este estudio es la adquisición de una mejor comprensión de las características de los trastornos plaquetarios funcionales y el proceso de formación de vesículas intracelulares.