Facteurs associés à la cyclooxygénase-2 et mécanismes de cancérogenèse gastrique - Association clinique et investigation génomique

Arrière-plan:

Le carcinome gastrique (GC) reste l'une des tumeurs malignes les plus fréquentes à Taïwan ainsi que dans le monde et également l'une des principales causes de décès liés au cancer. De plus en plus de preuves montrent que l'inflammation chronique conduit à l'apparition de cancers, y compris GC, via de multiples mécanismes.

La cyclooxygénase-2 (COX-2) est une enzyme cruciale dans le processus inflammatoire et s'avère être régulée positivement dans une variété de cancers. Par conséquent, la COX-2 peut jouer un rôle important dans la carcinogenèse. Les caractéristiques du cancer comprennent la prolifération continue, l'évitement de l'apoptose, l'interdiction de l'immunité, la promotion de l'angiogenèse, l'amélioration de l'invasion et des métastases. Nous émettons l'hypothèse que la COX-2 induit la carcinogenèse par le biais de multiples stratégies mécanistes et les interactions de plusieurs gènes simultanément.

La microdissection par capture laser (LCM) pour obtenir des cellules cancéreuses pures et la technologie et l'analyse des microréseaux sont désormais généralement acceptées comme des outils puissants dans la recherche génomique, fournissant une microdissection fiable des cellules cancéreuses et une analyse simultanée du génome entier.

But:

Utilisez la technologie des puces à ADN pour étudier les modèles de changement génomique liés à l'expression différentielle de la COX-2 et leur association clinicopathologique en GC.

Matériaux:

Les lignées cellulaires GC sont transfectées avec un vecteur exprimant COX-2 pour établir des lignées cellulaires avec des niveaux différentiels d'expression de COX-2. Les échantillons cliniques sont obtenus à partir d'une résection chirurgicale de GC prouvée par pathologie au département de chirurgie de l'hôpital universitaire national de Taiwan, dont l'expression de COX-2 est évaluée par Western blot et coloration immunohistochimique.

Méthodes :

Le présent projet utilisera des puces à ADN pour l'analyse des schémas de regroupement du génome des tissus chirurgicaux (cellules GC obtenues par LCM) et des lignées cellulaires GC en fonction des niveaux d'expression différentiels de COX-2, afin de découvrir des regroupements de gènes significativement associés positivement ou négativement qui contiennent des gènes candidats pour des études. des mécanismes de cancérogenèse et mise en place de modèles d'expérimentation animale dans une autre composante du projet.

Exécution:

Au cours de la première année de ce projet de 3 ans, nous établirons des lignées cellulaires GC exprimant des niveaux différentiels de COX-2 par transfection de vecteur exprimant COX-2 et nous nous concentrerons sur l'analyse de leurs génomes par microarray. Nous commençons également à collecter des échantillons chirurgicaux de GC, enregistrons les caractéristiques clinicopathologiques, procurons des cellules par LCM et évaluons la qualité de l'ARN, effectuons des expériences sur microréseaux. Au cours de la deuxième année, nous poursuivrons les expériences de LCM, d'extraction d'ARN et de puces à ADN. Au cours de la troisième année, l'expérience de microréseaux d'un total de 60 paires, dont 30 cas de COX-2 élevé et 30 cas de COX-2 faible, de tissus tumoraux et non tumoraux est terminée. L'analyse finale est effectuée pour identifier le regroupement, sélectionner les gènes candidats et étudier leur relation avec les caractéristiques clinicopathologiques, selon l'expression de COX-2. Ces gènes doivent faire l'objet d'études de mécanismes et d'études animales. Nous nous attendons à une meilleure compréhension des modèles de regroupement de gènes dans l'expression différentielle des gènes COX-2.