Susceptibilité génétique à l'inflammation des voies respiratoires induite par l'ozone chez l'homme (GARBOZ)

Journée d'évaluation des expectorations : les sujets répondant à l'état de santé requis à la suite de l'examen médical recevront une description verbale et écrite de toutes les procédures expérimentales et des risques possibles liés à leur participation. Tous les sujets devront fournir un consentement éclairé écrit pour participer à l'étude. La capacité des sujets à produire des échantillons d'expectorations induits adéquats sera également déterminée. Par conséquent, les sujets seront invités à produire des expectorations après inhalation de solution saline hypertonique (3, 4 et 5%). Les sujets doivent être capables de produire au moins 50 mg d'expectoration (bouchon sélectionné) par échantillon. Chaque échantillon d'expectoration doit contenir une numération cellulaire totale d'au moins 100 000 cellules, une numération cellulaire différentielle contenant moins de 40 % de cellules épithéliales squameuses et une viabilité cellulaire d'au moins 50 %, minimisant ainsi la variabilité de la récupération cellulaire et la contamination des cellules squameuses. Les sujets qui sont des producteurs d'expectorations efficaces seront ensuite programmés pour une session de formation. Les sujets peuvent toujours être exclus de l'étude s'ils sont incapables d'effectuer des tests de fonction pulmonaire adéquats.

Session de formation : la session de formation aura lieu au moins 2 jours avant l'exposition

• Tests de la fonction pulmonaire, y compris la spirométrie et la pléthysmographie (mesures de la boîte corporelle).
• Introduction à la chambre d'exposition à l'ozone.
• Instruction sur la façon d'utiliser le tapis roulant, y compris une mesure de ventilation minute pour atteindre le niveau d'exercice requis pour l'étude.
• Mesure de l'oxyde nitrique - elle mesure la quantité d'oxyde nitrique (NO) présente dans l'air expiré. Une concentration accrue de NO dans l'air expiré peut être trouvée chez les personnes normales présentant une inflammation aiguë lors d'infections des voies respiratoires supérieures et en association avec des symptômes chez les patients atteints de rhinite allergique. Ainsi, la mesure de la concentration de NO dans l'air expiré peut être utile comme évaluation indirecte de l'inflammation des voies respiratoires. La production pulmonaire de NO sera mesurée par la collecte d'un échantillon de gaz expiré. La production nasale de NO sera mesurée directement en connectant une ligne de prélèvement d'analyseur de NO à une narine avec l'autre narine ouverte à l'air ambiant. Pendant la mesure nasale, le sujet expirera à travers un tube jetable en carton avec une résistance afin de fermer le palais et d'éviter la contamination de l'échantillon nasal avec. L'ensemble de la procédure devrait être complété en moins de 15 minutes.

Protocole d'exposition et de test : à leur arrivée au laboratoire, l'état de santé clinique des sujets sera vérifié par le personnel médical, y compris la fréquence cardiaque de base, la pression artérielle, l'évaluation des symptômes respiratoires (bruits respiratoires) et l'état de santé général. Tous les sujets féminins devront fournir un historique du cycle menstruel et un échantillon d'urine sera requis pour les tests de grossesse. Chaque test de grossesse sera considéré comme valide pendant 7 jours. Les tests seront reportés si un sujet dépasse les limites préalablement établies.

L'exposition à l'ozone à 0,4 ppm sera effectuée dans une chambre d'exposition à l'ozone. Chaque sujet sera exposé à l'ozone pendant 2 heures. Pendant l'exposition, les sujets effectueront quatre périodes d'exercice modéré de 15 minutes (ventilation minute ou VE = 30 40 L/min) sur un tapis roulant, chacune séparée par 15 minutes de repos assis. Avant et après l'exposition, la fonction pulmonaire et les bruits respiratoires seront évalués pour tout signe de constriction bronchique. La ponction veineuse (comme indiqué ci-dessus) aura lieu avant l'exposition. Des mesures de la performance cardiorespiratoire seront obtenues au cours de chaque période d'exercice.

Environ 4 à 6 heures après l'exposition à l'ozone, une ponction veineuse se produira. Les sujets effectueront les procédures d'induction d'expectoration décrites ci-dessus avec une solution saline hypertonique inhalée nébulisée (3, 4 et 5 %). Le sujet restera sous surveillance médicale jusqu'à ce que la fonction pulmonaire (spirométrie) revienne à moins de 5 % des valeurs de référence avant l'exposition avant de quitter le laboratoire. Environ 24 heures après l'exposition à l'ozone, les sujets retourneront au laboratoire pour des tests de la fonction pulmonaire et l'induction d'expectorations, en plus d'un échantillon de sang veineux.

À chaque instant (avant et après l'exposition et 24 heures après l'exposition), le sang sera prélevé de la veine de l'avant-bras dans des tubes de laboratoire clinique. Au cours de l'une de ces prises de sang, les 5 ml supplémentaires seront prélevés pour le génotypage. Le plasma sera séparé de 4 ml et congelé à 70 degrés C pour une analyse future des médiateurs d'intérêt, tels que les cytokines, ainsi que d'autres effets systémiques de l'ozone. Le sang restant sera évalué par des analyses de sang total pour les marqueurs d'activation inflammatoire et immunitaire (CD11b, CD14, CD64, CD16, HLA-DR, CD45, CD3, CD80, CD86) et la fonction (phagocytose et explosion oxydative) par flux bicolore cytométrie. L'ARN sera extrait des cellules inflammatoires des expectorations pour l'analyse des puces à ADN.

Au cours de la participation, tous les sujets devront s'abstenir de; ingestion de vitamines C et E, d'aspirine ou de tout autre médicament anti-inflammatoire, exposition à la fumée de cigarette ou à d'autres irritants. De plus, il sera demandé aux sujets de ne rien avoir par la bouche pendant 2 heures avant l'induction de l'expectoration. Ils seront invités à arriver dans le laboratoire de recherche NPO x 2 heures le jour de la formation et le jour post-exposition, et déjeuneront le jour de l'exposition à une heure qui permettra l'exigence de 2 heures NPO.