Suscetibilidade genética à inflamação das vias aéreas induzida por ozônio em humanos (GARBOZ)

Dia da avaliação de escarro: Os indivíduos que atendem ao estado de saúde exigido após a triagem médica receberão uma descrição verbal e escrita de todos os procedimentos experimentais e possíveis riscos envolvidos em sua participação. Todos os indivíduos serão obrigados a fornecer consentimento informado por escrito para participar do estudo. A capacidade dos indivíduos para produzir amostras adequadas de escarro induzido também será determinada. Portanto, os sujeitos serão solicitados a produzir escarro após a inalação de solução salina hipertônica (3, 4 e 5%). Os indivíduos devem ser capazes de produzir pelo menos 50 mg de escarro (plugue selecionado) por amostra. Cada amostra de escarro deve conter uma contagem total de células de pelo menos 100.000 células, uma contagem diferencial de células contendo menos de 40% de células epiteliais escamosas e viabilidade celular de pelo menos 50%, minimizando assim a variabilidade na recuperação celular e a contaminação por células escamosas. Os indivíduos que são produtores eficazes de escarro serão então agendados para uma sessão de treinamento. Os indivíduos ainda podem ser excluídos do estudo se incapazes de realizar testes de função pulmonar adequados.

Sessão de treinamento: A sessão de treinamento ocorrerá pelo menos 2 dias antes da exposição

• Testes de função pulmonar, incluindo espirometria e pletismografia (medidas da caixa corporal).
• Introdução à câmara de exposição ao ozônio.
• Instrução sobre como usar a esteira, incluindo uma medição da ventilação minuto para atingir o nível de exercício necessário para o estudo.
• Medição de óxido nítrico - mede a quantidade de óxido nítrico (NO) presente no ar expirado. Uma concentração aumentada de NO no ar exalado pode ser encontrada em pessoas normais com inflamação aguda durante infecções do trato respiratório superior e em associação com sintomas em pacientes com rinite alérgica. Assim, a medição da concentração de NO no ar expirado pode ser útil como uma avaliação indireta da inflamação das vias aéreas. A produção pulmonar de NO será medida pela coleta de uma amostra do gás exalado. A produção nasal de NO será medida diretamente conectando uma linha de amostragem do analisador de NO a uma narina com a outra aberta ao ar ambiente. Durante a mensuração nasal o sujeito expirará através de um tubo descartável de papelão com resistência para fechar o palato e evitar a contaminação da amostra nasal com. Todo o procedimento deve ser concluído em menos de 15 minutos.

Protocolo de exposição e teste: Ao chegar ao laboratório, o estado de saúde clínico dos participantes será verificado pela equipe médica, incluindo frequência cardíaca basal, pressão arterial, avaliação de sintomas respiratórios (sons respiratórios) e saúde geral. Todos os indivíduos do sexo feminino serão obrigados a fornecer um histórico do ciclo menstrual e uma amostra de urina será necessária para o teste de gravidez. Cada teste de gravidez será considerado válido por 7 dias. O teste será adiado se um sujeito exceder os limites previamente estabelecidos.

A exposição a 0,4 ppm de ozônio será conduzida em uma câmara de exposição a ozônio. Cada sujeito será exposto ao ozônio por 2 horas. Durante a exposição, os sujeitos realizarão quatro sessões de 15 minutos de exercício moderado (ventilação por minuto ou VE = 30 40 L/min) em uma esteira, cada uma separada por 15 minutos de descanso sentado. Antes e depois da exposição, a função pulmonar e os sons respiratórios serão avaliados quanto a quaisquer sinais de constrição brônquica. A punção venosa (conforme observado acima) ocorrerá antes da exposição. Medidas de desempenho cardiorrespiratório serão obtidas durante cada período de exercício.

Aproximadamente 4-6 horas após a exposição ao ozônio, ocorrerá a punção venosa. Os indivíduos realizarão os procedimentos de indução de escarro descritos acima com solução salina hipertônica inalada nebulizada (3, 4 e 5%). O sujeito permanecerá sob supervisão médica até que a função pulmonar (espirometria) retorne a 5% dos valores basais pré-exposição antes de deixar o laboratório. Aproximadamente 24 horas após a exposição ao ozônio, os indivíduos retornarão ao laboratório para testes de função pulmonar e indução de escarro, além de uma amostra de sangue venoso.

Em cada ponto de tempo (pré e pós-exposição e 24 horas após a exposição), o sangue será coletado da veia do antebraço para tubos de laboratório clínico. Durante uma dessas coletas de sangue, 5ml adicionais serão coletados para genotipagem. O plasma será separado de 4 ml e congelado a 70 graus C para futura análise de mediadores de interesse, como citocinas, bem como outros efeitos sistêmicos do ozônio. O sangue restante será avaliado por análises de sangue total para marcadores de ativação inflamatória e imune (CD11b, CD14, CD64, CD16, HLA-DR, CD45, CD3, CD80, CD86) e função (fagocitose e explosão oxidativa) por fluxo de duas cores citometria. O RNA será extraído de células inflamatórias do escarro para análise por microarray.

Durante o curso de participação, todos os participantes serão obrigados a se abster; ingestão de vitaminas C e E, aspirina ou qualquer outro medicamento anti-inflamatório, exposição à fumaça de cigarro ou outros irritantes. Além disso, os indivíduos serão solicitados a não ingerir nada por via oral por 2 horas antes da indução de escarro. Eles serão solicitados a chegar ao laboratório de pesquisa NPO x 2 horas no dia de treinamento e no dia pós-exposição, e almoçarão no dia da exposição em um horário que permita o requisito de 2 horas de NPO.