Генетическая предрасположенность к озон-индуцированному воспалению дыхательных путей у людей (GARBOZ)

День оценки мокроты: Субъектам, отвечающим требуемому состоянию здоровья после медицинского осмотра, будет предоставлено устное и письменное описание всех экспериментальных процедур и возможных рисков, связанных с их участием. Все субъекты должны будут предоставить письменное информированное согласие на участие в исследовании. Также будет определена способность субъектов производить адекватные образцы индуцированной мокроты. Поэтому субъектов попросят произвести мокроту после вдыхания гипертонического солевого раствора (3, 4 и 5%). Субъекты должны быть в состоянии произвести не менее 50 мг мокроты (выбранной пробки) на образец. Каждый образец мокроты должен содержать общее количество клеток не менее 100 000 клеток, дифференциальное количество клеток, содержащее менее 40 % клеток плоского эпителия, и жизнеспособность клеток не менее 50 %, что сводит к минимуму вариабельность восстановления клеток и загрязнение плоскоклеточными клетками. Субъекты, которые являются эффективными производителями мокроты, затем будут назначены на тренировочную сессию. Субъекты по-прежнему могут быть исключены из исследования, если они не могут выполнить адекватные тесты функции легких.

Тренировочная сессия: Тренировочная сессия будет проводиться не менее чем за 2 дня до воздействия

• Функциональные тесты легких, включая спирометрию и плетизмографию (измерения телесной оболочки).
• Знакомство с озоновой камерой.
• Инструктаж по использованию беговой дорожки, включая минутное измерение вентиляции для достижения уровня упражнений, необходимого для исследования.
• Измерение оксида азота - измеряет количество оксида азота (NO), присутствующего в выдыхаемом воздухе. Повышенная концентрация NO в выдыхаемом воздухе может быть обнаружена у здоровых людей с острым воспалением при инфекциях верхних дыхательных путей и в сочетании с симптомами у пациентов с аллергическим ринитом. Таким образом, измерение концентрации NO в выдыхаемом воздухе может быть полезным в качестве косвенной оценки воспаления дыхательных путей. Производство NO в легких будет измеряться путем сбора образца выдыхаемого газа. Назальное производство NO будет измеряться непосредственно путем подключения линии отбора проб анализатора NO к одной ноздре, а другая ноздря открыта для окружающего воздуха. Во время назального измерения испытуемый будет выдыхать через картонную одноразовую трубку с сопротивлением, чтобы закрыть небо и предотвратить загрязнение назального образца. Вся процедура должна быть завершена менее чем за 15 минут.

Протокол воздействия и тестирования: по прибытии в лабораторию медицинский персонал оценит клиническое состояние здоровья испытуемых, включая исходную частоту сердечных сокращений, артериальное давление, оценку респираторных симптомов (звуки дыхания) и общее состояние здоровья. Все субъекты женского пола должны будут предоставить историю менструального цикла, а образец мочи потребуется для тестирования на беременность. Каждый тест на беременность будет считаться действительным в течение 7 дней. Тестирование будет отложено, если субъект превысит ранее установленные лимиты.

Воздействие озона 0,4 ppm будет проводиться в озоновой камере. Каждый субъект будет подвергаться воздействию озона в течение 2 часов. Во время воздействия испытуемые выполнят четыре 15-минутных цикла умеренных упражнений (минутная вентиляция легких или VE = 30–40 л/мин) на беговой дорожке, каждый из которых разделен 15-минутным отдыхом в положении сидя. До и после воздействия будут оцениваться функция легких и шумы дыхания на наличие любых признаков сужения бронхов. Венепункция (как указано выше) будет происходить до воздействия. Во время каждого периода упражнений будут проводиться измерения кардиореспираторной деятельности.

Приблизительно через 4-6 часов после воздействия озона происходит венепункция. Субъекты будут выполнять процедуры индукции мокроты, описанные выше, с вдыханием через небулайзер гипертонического солевого раствора (3, 4 и 5%). Субъект останется под медицинским наблюдением до тех пор, пока функция легких (спирометрия) не вернется в пределах 5% от исходных значений до воздействия перед тем, как покинуть лабораторию. Примерно через 24 часа после воздействия озона субъекты вернутся в лабораторию для проверки функции легких и индукции мокроты в дополнение к образцу венозной крови.

В каждый момент времени (до и после воздействия, а также через 24 часа после воздействия) кровь будет забираться из вены на предплечье в клинические лабораторные пробирки. Во время одного из таких заборов крови будут взяты дополнительные 5 мл для генотипирования. Плазма будет отделена от 4 мл и заморожена при 70°C для будущего анализа представляющих интерес медиаторов, таких как цитокины, а также других системных эффектов озона. Оставшуюся кровь будут оценивать с помощью анализов цельной крови на маркеры воспалительной и иммунной активации (CD11b, CD14, CD64, CD16, HLA-DR, CD45, CD3, CD80, CD86) и функции (фагоцитоз и окислительный взрыв) с помощью двухцветного потока. цитометрия. РНК будет извлечена из воспалительных клеток мокроты для анализа микрочипов.

В ходе участия все субъекты должны будут воздерживаться от; прием витаминов С и Е, аспирина или любых других противовоспалительных препаратов, воздействие сигаретного дыма или других раздражителей. Кроме того, субъектов попросят ничего не принимать внутрь в течение 2 часов до индукции мокроты. Им будет предложено прибыть в исследовательскую лабораторию NPO x 2 часа в день обучения и день после воздействия, а также пообедать в день воздействия во время, которое позволит выполнить требование NPO на 2 часа.