Genetikai érzékenység az ózon által kiváltott légúti gyulladásra emberekben (GARBOZ)

Köpetfelmérési nap: Az orvosi szűrést követően az előírt egészségi állapotnak megfelelő alanyok szóbeli és írásbeli leírást kapnak minden kísérleti eljárásról és a részvételükkel járó lehetséges kockázatokról. Minden alanynak írásos beleegyezését kell adnia a vizsgálatban való részvételhez. Azt is meghatározzák, hogy az alanyok képesek-e megfelelő indukált köpetmintát termelni. Ezért az alanyokat arra kérik, hogy köpetet termeljenek a hipertóniás sóoldat belélegzése után (3, 4 és 5%). Az alanyoknak képesnek kell lenniük legalább 50 mg köpet (kiválasztott dugó) termelésére mintánként. Minden köpetmintának tartalmaznia kell legalább 100 000 sejt összsejtszámát, 40%-nál kevesebb laphámsejteket tartalmazó differenciális sejtszámot, és legalább 50%-os sejtéletképességet, így minimalizálva a sejt-visszanyerés változékonyságát és a laphámszennyeződést. Azok az alanyok, akik hatékony köpetképzők, ezután képzésre kerülnek. Az alanyok továbbra is kizárhatók a vizsgálatból, ha nem tudnak megfelelő tüdőfunkciós vizsgálatokat végezni.

Edzés: Az edzésre legalább 2 nappal az expozíció előtt kerül sor

• Tüdőfunkciós vizsgálatok, beleértve a spirometriát és a pletizmográfiát (testdoboz mérések).
• Az ózon expozíciós kamra bemutatása.
• Útmutató a futópad használatához, beleértve egy percnyi lélegeztetés mérést a vizsgálathoz szükséges terhelési szint eléréséhez.
• Nitrogén-monoxid mérés – a kilélegzett levegőben lévő nitrogén-monoxid (NO) mennyiségét méri. A kilélegzett levegőben megnövekedett NO koncentráció figyelhető meg normál személyeknél akut gyulladásban a felső légúti fertőzések során, valamint a tünetekkel összefüggésben allergiás rhinitisben szenvedő betegeknél. Így a kilélegzett levegő NO-koncentrációjának mérése hasznos lehet a légúti gyulladás közvetett értékeléseként. A tüdő NO-termelését a kilégzett gázból vett minta vételével mérik. A NO orrban történő termelését közvetlenül úgy kell mérni, hogy egy NO-elemző mintavevő vezetéket csatlakoztatnak az egyik orrlyukhoz, miközben a másik orrlyuk nyitva van a környezeti levegő számára. Az orrmérés során az alany egy karton, eldobható, ellenállással ellátott csövön keresztül lélegzik ki, hogy lezárja a szájpadlást és megakadályozza az orrminta szennyeződését. A teljes eljárást 15 percnél rövidebb idő alatt kell elvégezni.

Expozíciós és vizsgálati protokoll: A laboratóriumba érkezéskor az alanyok klinikai egészségi állapotát egészségügyi személyzet állapítja meg, beleértve a pulzusszám alapértékét, a vérnyomást, a légúti tünetek (légzési hangok) értékelését és az általános egészségi állapotot. Minden női alanynak meg kell adnia a menstruációs ciklus történetét, és vizeletmintát kell venni a terhességi teszthez. Minden terhességi teszt 7 napig érvényes. A vizsgálatot elhalasztják, ha egy alany túllépi a korábban meghatározott határértékeket.

A 0,4 ppm ózon expozíciót ózon expozíciós kamrában végzik. Minden alany ózon hatásának lesz kitéve 2 órán keresztül. Az expozíció alatt az alanyok négy 15 perces mérsékelt gyakorlatot (perc lélegeztetés vagy VE = 30 40 l/perc) hajtanak végre egy futópadon, mindegyiket 15 perces ülő pihenéssel választva. Az expozíció előtt és után a tüdőfunkciót és a légzési hangokat fel kell mérni a hörgők összehúzódásának minden jelére. A vénapunkció (amint fentebb megjegyeztük) az expozíció előtt történik. A kardiorespiratorikus teljesítmény mérése minden edzési periódus alatt történik.

Körülbelül 4-6 órával az ózonnal való érintkezést követően vénapunkció következik be. Az alanyok a fent leírt köpetindukciós eljárásokat porlasztott, inhalált hipertóniás sóoldattal (3, 4 és 5%) hajtják végre. Az alany mindaddig orvosi felügyelet alatt marad, amíg a tüdőfunkció (spirometria) vissza nem tér az expozíció előtti alapérték 5%-án belülre, mielőtt elhagyná a laboratóriumot. Körülbelül 24 órával az ózonexpozíció után az alanyok visszatérnek a laboratóriumba tüdőfunkciós vizsgálatra és köpet indukcióra, a vénás vérminta mellett.

Minden időpontban (az expozíció előtt és után, valamint 24 órával az expozíció után) vért vesznek az alkar vénájából klinikai laboratóriumi csövekbe. Az egyik ilyen vérvétel során további 5 ml-t vesznek le a genotipizáláshoz. A plazmát 4 ml-ből leválasztják, és 70 °C-on lefagyasztják az érdeklődésre számot tartó mediátorok, például a citokinek, valamint az ózon egyéb szisztémás hatásai jövőbeni elemzéséhez. A fennmaradó vért teljes vérvizsgálattal értékelik a gyulladásos és immunaktiváció (CD11b, CD14, CD64, CD16, HLA-DR, CD45, CD3, CD80, CD86) és a funkció (fagocitózis és oxidatív robbanás) markereire, kétszínű áramlással. citometria. Az RNS-t a köpet gyulladásos sejtjéből vonják ki microarray elemzés céljából.

A részvétel során minden tantárgynak tartózkodnia kell; C- és E-vitamin, aszpirin vagy bármely más gyulladáscsökkentő gyógyszer lenyelése, cigarettafüstnek vagy egyéb irritáló hatásnak való kitettség. Ezen túlmenően az alanyokat arra kérik, hogy a köpet indukciója előtt 2 órával ne kapjanak semmit szájon át. Arra kérik őket, hogy érkezzenek a kutatólaboratóriumba a képzés napján és az expozíció utáni napon 2 órával, és az expozíciós napon ebédeljenek olyan időpontban, amely lehetővé teszi a 2 órás NPO követelményt.