Évaluation des tests non invasifs pour la détection du cancer urothélial

Le cancer de la vessie est l'une des tumeurs malignes les plus courantes dans le monde. Le taux d'apparition de ces tumeurs est le plus élevé dans les pays développés, se classant au sixième rang des tumeurs les plus fréquentes. Environ 90 % des tumeurs malignes apparaissant dans la vessie sont d'origine épithéliale, la majorité étant des carcinomes à cellules transitionnelles. Les tumeurs de la vessie à un stade précoce ont été classées en deux groupes avec des comportements distincts et des profils moléculaires différents : les tumeurs de bas grade (toujours papillaires et généralement superficielles) et les tumeurs de haut grade (papillaires ou non papillaires et souvent invasives). Cliniquement, les tumeurs superficielles de la vessie (stades Ta, Tis et T1) représentent 75 à 80 % des néoplasmes de la vessie, tandis que les 15 à 20 % restants sont des lésions invasives (T2, T3, T4) ou métastatiques au moment de la présentation. Plus de 70 % des patients atteints de tumeurs superficielles auront une ou plusieurs récidives après le traitement initial, et environ un tiers de ces patients progresseront et finiront par succomber à leur maladie.

Des publications antérieures de ce service d'urologie ont introduit l'idée d'un test moléculaire non invasif pour la détection et la surveillance du cancer de la vessie (Levesque et al. 1993 ; Fitzgerald et al. 1995). Au moment de la publication, les connaissances sur les changements moléculaires sous-jacents aux différentes voies cliniques décrites ci-dessus étaient limitées et notre test était basé sur un gène (c-H-ras-1). Au cours des dernières années, il est devenu clair que les événements d'activation associés au FGFR-3 peuvent être trouvés associés à 40 % à 60 % des tumeurs de la vessie de bas grade et de stade bas, tandis que les mutations p53 sont liées à un phénotype plus agressif progressant via la voie SIC. Les mutations trouvées dans le gène c-H-ras-1 peuvent chevaucher ces deux groupes. Nous proposons d'évaluer l'utilisation d'un test basé sur des mutations multiples, utilisant l'ADN de cellules exfoliées dans l'urine de patients, pour établir la sensibilité et la spécificité de la détection des tumeurs par rapport à la cystoscopie et à la cytologie. En outre, nous proposons d'isoler l'ADN libre pour une utilisation dans des essais moléculaires. L'urine restante sera stockée pour évaluer les biomarqueurs pour la détection de la présence ou de la progression de la tumeur à l'aide d'analyses basées sur les protéines.

Groupe de patients cancéreux :

Tous les patients porteurs de tumeurs et devant subir une cystectomie, une cystoscopie ou une néphrourétérectomie seront éligibles pour cette étude. Cela comprendra les patients à la première présentation et ceux qui sont en suivi. Les échantillons d'urine recueillis au moment d'une procédure seront obtenus à partir d'urine cathétérisée dans la salle d'opération. L'urine obtenue en milieu clinique sera obtenue par miction, comme avec la collecte d'échantillons d'urine standard. Nous proposons de recueillir l'urine des participants à l'étude qui ont une cystoscopie à chaque fois qu'ils visitent le service d'urologie concernant le traitement et le suivi de leur maladie. L'urine sera recueillie à intervalles réguliers sur une période de deux ans.

Groupe de patients témoins :

Les dosages du cancer à tester utilisent l'analyse de l'ADN et des anticorps dirigés contre des protéines spécifiques ainsi que des dosages fonctionnels des protéines pour tenter d'identifier la présence d'une tumeur de la vessie. Il est important de savoir si d'autres changements, y compris les calculs rénaux, la cystite, etc., provoquent la libération du même ADN ou des mêmes protéines dans l'urine que ceux trouvés chez les patients cancéreux. La fréquence des résultats faussement positifs déterminera l'utilité du test dans le domaine de la détection du cancer. Un groupe de patients témoins appariés selon l'âge sera recruté parmi les populations de patients susmentionnées nécessitant un seul don d'urine au moment de leur visite clinique prévue.

L'objectif principal de cette étude est d'évaluer l'utilité des technologies émergentes dans la détection des cellules tumorales de la vessie à l'aide d'approches non invasives utilisant des échantillons d'urine évacuée. Cela comprendra des méthodologies qui peuvent établir la sensibilité de la détection de mutations spécifiques associées à la progression du cancer de la vessie et l'utilité de cette approche en complément de la cystoscopie et de la cytologie. Le statut de mutation des fragments d'ADN amplifiés sera établi à l'aide de plusieurs techniques moléculaires. Nous allons également isoler l'ADN libre de l'urine et effectuer une PCR étendue pour vérifier la représentation proportionnelle des grands fragments d'ADN, c'est-à-dire> 1 500 pb comme indicateur de l'activité apoptotique et évaluer les profils de microARN à partir des échantillons d'urine.

Les cellules exfoliées transmises par l'urine seront granulées à partir des collections d'urine par centrifugation et l'ADN/ARN sera extrait. Le surnageant d'urine sera passé sur une colonne d'affinité d'ADN pour capturer l'ADN libre pour analyse. Les acides nucléiques isolés à partir de ces procédures seront analysés à l'aide de la PCR et de diverses technologies moléculaires pour établir le statut de mutation à différents locus génétiques. L'urine restante sera congelée et utilisée dans des tests de détection de protéines à l'aide d'un panel de biomarqueurs ayant une signification pronostique putative.

La détection de la présence de tumeurs sera comparée dans des échantillons d'urine soumis à une analyse mutationnelle et au traitement standard actuel (cytologie et cystoscopie ensemble). La cytologie n'étant pas pratiquée sur tous les patients, moins d'échantillons d'urine sont attendus dans le groupe cytologie et cystoscopie que dans le groupe analyse mutationnelle. Par conséquent, une analyse comparative entre ces deux groupes sera effectuée à l'aide d'un test d'analyse de variance (ANOVA) où la signification sera fixée à p<0,05.