非侵入性检测尿路上皮癌检测的评价

膀胱癌是全球最常见的恶性肿瘤之一。 这些肿瘤的发生率在发达国家最高，在最常见的肿瘤中排名第六。 大约 90% 的膀胱恶性肿瘤起源于上皮细胞，其中大部分为移行细胞癌。 早期膀胱肿瘤已分为两组，具有不同的行为和不同的分子特征：低级别肿瘤（总是乳头状且通常是浅表的）和高级肿瘤（乳头状或非乳头状且通常是侵入性的）。 临床上，浅表性膀胱肿瘤（Ta、Tis 和 T1 期）占膀胱肿瘤的 75-80%，而其余 15-20% 在就诊时为浸润性（T2、T3、T4）或转移性病变。 超过 70% 的浅表性肿瘤患者在初始治疗后会出现一次或多次复发，其中约三分之一会进展并最终死于疾病。

该泌尿科的先前出版物介绍了用于检测和监测膀胱癌的非侵入性、基于分子的测定法的想法（Levesque 等人，1993 年；Fitzgerald 等人，1995 年）。 在出版时，对上述不同临床途径背后的分子变化的了解有限，我们的检测基于一个基因 (c-H-ras-1)。 在过去的几年里，很明显，与 FGFR-3 相关的激活事件与 40%-60% 的低级别、低阶段膀胱肿瘤相关，而 p53 突变与通过独联体途径。 在 c-H-ras-1 基因中发现的突变可以跨越这两个组。 我们建议评估基于多重突变的检测方法的使用，使用患者尿液中脱落细胞的 DNA，与膀胱镜检查和细胞学检查相比，确定肿瘤检测的灵敏度和特异性。 此外，我们建议分离游离 DNA 用于分子检测。 剩余的尿液将被储存起来，以评估生物标志物，以使用基于蛋白质的分析来检测肿瘤的存在或进展。

癌症患者组：

所有患有肿瘤并计划进行膀胱切除术、膀胱镜检查或肾输尿管切除术的患者都将有资格参加这项研究。 这将包括初次就诊的患者和正在接受随访的患者。 手术时收集的尿液样本将从手术室的导尿管中获取。 与标准尿样采集一样，在诊所环境中获得的尿液将通过排尿获得。 我们建议收集研究参与者的尿液，这些参与者在每次访问泌尿科时都进行了膀胱镜检查，以了解其疾病的治疗和随访情况。 尿液将在两年内每隔一段时间收集一次。

对照患者组：

要测试的癌症检测使用 DNA 分析和针对特定蛋白质的抗体以及蛋白质的功能检测来尝试识别膀胱肿瘤的存在。 重要的是要知道其他变化，包括肾结石、膀胱炎等，是否会导致与在癌症患者身上发现的相同的 DNA 或蛋白质释放到尿液中。 假阳性结果的频率将决定该检测在癌症检测领域的效用。 将从上述患者群体中招募一组年龄匹配的对照患者，这些患者群体在他们预定的门诊就诊时需要单次尿液捐献。

本研究的主要目的是评估新兴技术在使用排泄尿液样本的非侵入性方法检测膀胱肿瘤细胞中的效用。 这将包括可以建立检测与膀胱癌进展相关的特定突变的敏感性的方法，以及这种方法在补充膀胱镜检查和细胞学方面的效用。 将使用多种分子技术确定扩增 DNA 片段的突变状态。 我们还将从尿液中分离游离 DNA 并执行扩展 PCR 以确定大 DNA 片段的比例表示，即 >1,500bp 作为细胞凋亡活性的指标，并评估尿液样本中的 microRNA 图谱。

使用离心法从收集的尿液中沉淀尿液脱落细胞，并提取 DNA/RNA。 尿液上清液将流过 DNA 亲和柱以捕获游离 DNA 进行分析。 从这些程序中分离出的核酸将使用 PCR 和各种分子技术进行分析，以确定不同基因位点的突变状态。 剩余的尿液将被冷冻并用于使用一组具有推定预后意义的生物标志物的蛋白质检测分析。

将在进行突变分析的尿液标本中检测肿瘤的存在，并与当前的治疗标准（细胞学和膀胱镜检查一起）进行比较。 由于并非对所有患者都进行细胞学检查，因此预计细胞学检查和膀胱镜检查组的尿液标本少于突变分析组。 因此，将使用方差分析 (ANOVA) 检验对这两组进行比较分析，其中显着性将设置为 p<0.05。