Valutazione di saggi non invasivi per la rilevazione del cancro uroteliale

Il cancro alla vescica è una delle neoplasie più comuni al mondo. Il tasso di insorgenza di questi tumori è più alto nei paesi sviluppati, classificandosi come la sesta neoplasia più frequente. Circa il 90% dei tumori maligni che insorgono nella vescica sono di origine epiteliale, la maggior parte dei quali sono carcinomi a cellule transizionali. I tumori della vescica in stadio iniziale sono stati classificati in due gruppi con comportamenti distinti e profili molecolari diversi: tumori di basso grado (sempre papillari e solitamente superficiali) e tumori di alto grado (papillari o non papillari e spesso invasivi). Clinicamente i tumori superficiali della vescica (stadi Ta, Tis e T1) rappresentano il 75-80% delle neoplasie vescicali, mentre il restante 15-20% sono lesioni invasive (T2, T3, T4) o metastatiche al momento della presentazione. Oltre il 70% dei pazienti affetti da tumori superficiali avrà una o più recidive dopo il trattamento iniziale e circa un terzo di questi pazienti progredirà e alla fine soccomberà alla malattia.

Precedenti pubblicazioni di questo Dipartimento di Urologia hanno introdotto l'idea di un test molecolare non invasivo per la rilevazione e il monitoraggio del cancro della vescica (Levesque et al. 1993; Fitzgerald et al. 1995). Al momento della pubblicazione c'era una conoscenza limitata dei cambiamenti molecolari alla base dei diversi percorsi clinici descritti sopra e il nostro test era basato su un gene (c-H-ras-1). Negli ultimi anni, è diventato chiaro che gli eventi di attivazione associati a FGFR-3 possono essere trovati associati al 40%-60% dei tumori della vescica di basso grado e di basso stadio, mentre le mutazioni di p53 sono legate a un fenotipo più aggressivo che progredisce attraverso il percorso CSI. Le mutazioni trovate nel gene c-H-ras-1 possono cavalcare entrambi questi gruppi. Proponiamo di valutare l'uso di un test basato su mutazioni multiple, utilizzando il DNA di cellule esfoliate nelle urine dei pazienti, per stabilire la sensibilità e la specificità nella rilevazione del tumore rispetto alla cistoscopia e alla citologia. Inoltre, proponiamo di isolare il DNA libero per l'uso in saggi molecolari. L'urina rimanente verrà conservata per valutare i biomarcatori per il rilevamento della presenza o della progressione del tumore utilizzando analisi basate sulle proteine.

Gruppo di malati di cancro:

Tutti i pazienti che ospitano tumori e programmati per sottoporsi a cistectomia, cistoscopia o nefroureterectomia saranno idonei per questo studio. Ciò includerà i pazienti alla prima presentazione e quelli che sono in follow-up. I campioni di urina raccolti al momento di una procedura saranno ottenuti da urina cateterizzata in sala operatoria. L'urina ottenuta in ambiente clinico sarà ottenuta tramite svuotamento, come con la raccolta standard di campioni di urina. Proponiamo di raccogliere l'urina dai partecipanti allo studio che hanno una cistoscopia ogni volta che visitano il Dipartimento di Urologia per il trattamento e il follow-up della loro malattia. L'urina sarà raccolta ad intervalli su un periodo di due anni.

Gruppo di pazienti di controllo:

I test del cancro da testare utilizzano l'analisi del DNA e gli anticorpi contro proteine ​​specifiche, nonché i test funzionali per le proteine ​​per tentare di identificare la presenza di tumore alla vescica. È importante sapere se altri cambiamenti, compresi i calcoli renali, la cistite ecc. causano il rilascio dello stesso DNA o delle stesse proteine ​​nelle urine che è stato riscontrato nei pazienti oncologici. La frequenza dei risultati falsi positivi determinerà l'utilità del test nell'arena di rilevamento del cancro. Verrà reclutato un gruppo di pazienti di controllo di pari età dalle suddette popolazioni di pazienti che richiedono una singola donazione di urina al momento della loro visita clinica programmata.

L'obiettivo principale di questo studio è valutare l'utilità delle tecnologie emergenti nella rilevazione delle cellule tumorali della vescica utilizzando approcci non invasivi che utilizzano campioni di urina svuotati. Ciò includerà metodologie che possono stabilire la sensibilità del rilevamento di specifiche mutazioni associate alla progressione del cancro della vescica e l'utilità di questo approccio nel complementare cistoscopia e citologia. Lo stato di mutazione dei frammenti di DNA amplificati sarà stabilito utilizzando molteplici tecniche molecolari. Isoleremo anche il DNA libero dall'urina ed eseguiremo una PCR estesa per accertare la rappresentazione proporzionale di grandi frammenti di DNA, cioè >1.500 bp come indicatore di attività apoptotica e valuteremo i profili di microRNA dai campioni di urina.

Cellule esfoliate di origine urinaria saranno pellettizzate dalle raccolte di urina mediante centrifugazione e DNA/RNA saranno estratti. Il surnatante urinario verrà fatto scorrere su una colonna di affinità del DNA per catturare il DNA libero per l'analisi. Gli acidi nucleici isolati da queste procedure saranno analizzati mediante PCR e varie tecnologie molecolari per stabilire lo stato di mutazione in diversi loci genici. L'urina rimanente verrà congelata e utilizzata nei test di rilevamento delle proteine ​​​​utilizzando un pannello di biomarcatori con presunto significato prognostico.

La rilevazione della presenza del tumore sarà confrontata nei campioni di urina sottoposti ad analisi mutazionale e l'attuale standard di trattamento (citologia e cistoscopia insieme). Poiché la citologia non viene eseguita su tutti i pazienti, sono previsti meno campioni di urina nel gruppo di citologia e cistoscopia rispetto al gruppo di analisi mutazionale. Pertanto un'analisi comparativa tra questi due gruppi sarà eseguita utilizzando un test di analisi della varianza (ANOVA) dove la significatività sarà fissata a p<0.05.