Evaluación de ensayos no invasivos para la detección de cáncer urotelial

El cáncer de vejiga es una de las neoplasias malignas más comunes en todo el mundo. La tasa de aparición de estos tumores es más alta en los países desarrollados, ubicándose como la sexta neoplasia más frecuente. Aproximadamente el 90% de los tumores malignos que surgen en la vejiga son de origen epitelial, siendo la mayoría carcinomas de células de transición. Los tumores de vejiga en etapa temprana se han clasificado en dos grupos con comportamientos distintos y perfiles moleculares diferentes: tumores de bajo grado (siempre papilares y generalmente superficiales) y tumores de alto grado (papilares o no papilares y, a menudo, invasivos). Clínicamente, los tumores vesicales superficiales (estadios Ta, Tis y T1) representan el 75-80% de las neoplasias vesicales, mientras que el 15-20% restante son lesiones invasivas (T2, T3, T4) o metastásicas en el momento de presentación. Más del 70 % de los pacientes afectados con tumores superficiales tendrán una o más recurrencias después del tratamiento inicial, y alrededor de un tercio de esos pacientes progresarán y finalmente sucumbirán a la enfermedad.

Publicaciones anteriores de este Departamento de Urología han introducido la idea de un ensayo molecular no invasivo para la detección y seguimiento del cáncer de vejiga (Levesque et al. 1993; Fitzgerald et al. 1995). En el momento de la publicación, había un conocimiento limitado de los cambios moleculares subyacentes a las diferentes vías clínicas descritas anteriormente y nuestro ensayo se basó en un gen (c-H-ras-1). En los últimos años, ha quedado claro que los eventos de activación asociados con FGFR-3 se pueden encontrar asociados con el 40 %-60 % de los tumores de vejiga de bajo grado y etapa baja, mientras que las mutaciones de p53 están vinculadas a un fenotipo más agresivo que progresa a través de la vía del CIS. Las mutaciones encontradas en el gen c-H-ras-1 pueden abarcar ambos grupos. Proponemos evaluar el uso de un ensayo basado en mutaciones múltiples, utilizando ADN de células exfoliadas en la orina de pacientes, para establecer la sensibilidad y especificidad en la detección de tumores en comparación con la cistoscopia y la citología. Además, proponemos aislar el ADN libre para su uso en ensayos moleculares. La orina restante se almacenará para evaluar biomarcadores para la detección de la presencia o progresión del tumor mediante análisis basados ​​en proteínas.

Grupo de pacientes con cáncer:

Todos los pacientes que albergan tumores y programados para someterse a una cistectomía, cistoscopia o nefroureterectomía serán elegibles para este estudio. Esto incluirá pacientes en la primera presentación y aquellos que están en seguimiento. Las muestras de orina recolectadas en el momento de un procedimiento se obtendrán de la orina cateterizada en la sala de operaciones. La orina obtenida en el entorno clínico se obtendrá mediante evacuación, al igual que con la recolección de muestras de orina estándar. Proponemos recolectar orina de los participantes del estudio que se someten a una cistoscopia en cada ocasión que visitan el Servicio de Urología con motivo del tratamiento y seguimiento de su enfermedad. La orina se recogerá a intervalos durante un período de dos años.

Grupo de pacientes de control:

Los ensayos de cáncer que se probarán utilizan análisis de ADN y anticuerpos para proteínas específicas, así como ensayos funcionales para proteínas para intentar identificar la presencia de tumores en la vejiga. Es importante saber si otros cambios, como cálculos renales, cistitis, etc. provocan la liberación del mismo ADN o proteínas en la orina que se encontró en pacientes con cáncer. La frecuencia de resultados falsos positivos determinará la utilidad del ensayo en el campo de la detección del cáncer. Se reclutará un grupo de pacientes de controles emparejados por edad de las poblaciones de pacientes antes mencionadas que requieren una sola donación de orina en el momento de su visita clínica programada.

El objetivo principal de este estudio es evaluar la utilidad de las tecnologías emergentes en la detección de células tumorales de vejiga mediante enfoques no invasivos que utilizan muestras de orina evacuadas. Esto incluirá metodologías que puedan establecer la sensibilidad de detección de mutaciones específicas asociadas con la progresión del cáncer de vejiga y la utilidad de este enfoque para complementar la cistoscopia y la citología. El estado de mutación de los fragmentos de ADN amplificados se establecerá mediante múltiples técnicas moleculares. También aislaremos el ADN libre de la orina y realizaremos una PCR extendida para determinar la representación proporcional de fragmentos grandes de ADN, es decir, >1500 pb como indicador de actividad apoptótica y evaluaremos los perfiles de microARN de las muestras de orina.

Las células exfoliadas transmitidas por la orina se sedimentarán a partir de muestras de orina mediante centrifugación y se extraerá el ADN/ARN. El sobrenadante de orina se pasará por una columna de afinidad de ADN para capturar el ADN libre para su análisis. Los ácidos nucleicos aislados de estos procedimientos se analizarán mediante PCR y varias tecnologías moleculares para establecer el estado de mutación en diferentes loci de genes. La orina restante se congelará y se usará en ensayos de detección de proteínas utilizando un panel de biomarcadores con importancia pronóstica putativa.

La detección de la presencia del tumor se comparará en muestras de orina sometidas a análisis mutacional y el estándar actual de tratamiento (citología y cistoscopia juntas). Como la citología no se realiza en todos los pacientes, se esperan menos muestras de orina en el grupo de citología y cistoscopia que en el grupo de análisis mutacional. Por lo tanto, se realizará un análisis comparativo entre estos dos grupos utilizando una prueba de análisis de varianza (ANOVA) donde la significación se establecerá en p<0,05.