Dd-cfDNS és Treg a veseátültetés akut kilökődésének előrejelzésében

Háttér

Az immunszuppresszió terén elért előrelépés ellenére a veseátültetés után a graft 10 éves túlélése 50% körüli szinten stagnált. A vesetranszplantált betegek akut kilökődésének időben történő diagnosztizálása elengedhetetlen a graft hosszú távú túlélésének javításához. Az akut kilökődés klinikai gyanúja jelenleg a szérum kreatininszint emelkedésének monitorozásán és a vese allograft biopsziával történő diagnosztikai megerősítésén alapul. A szérum kreatininszint emelkedése azonban nem specifikus az akut kilökődésre, és az allograft jelentős immunológiai károsodása után észlelhető. A biopsziával történő megerősítés invazív, 1%-os súlyos szövődményaránnyal jár, és nem megfelelő mintavételnek, valamint szakértői olvasói eltéréseknek van kitéve. Új módszerekre van szükség az immunológiai sérülést megelőző akut kilökődés non-invazív módon történő monitorozására és diagnosztizálására a veseátültetés utáni hosszú távú graft túlélés javítása érdekében. A sejtmentes DNS általában akkor szabadul fel a véráramba, amikor a sejtek apoptózison vagy nekrózison mennek keresztül. Vesetranszplantáció és allograft jelenléte esetén a donortól származó sejtmentes DNS (dd-cfDNS) az allograft sejtforgalom következtében folyamatosan a recipiens véráramába kerül, és a teljes sejtforgalom kis részét teszi ki. szabad DNS (donor plusz recipiens eredetű). A Dd-cfDNS-frakció kezdetben magas ischaemia-reperfúziós sérülés következtében, és általában a vesetranszplantáció után 10-14 nappal az alapszintre csökken. Ezt követően az allograft sérülésének epizódjai, mint például az akut kilökődés, a dd-cfDNS-frakció növekedéséhez vezetnek a recipiens véráramában. Az egynukleotidos polimorfizmusokon alapuló multiplex polimeráz láncreakció technológiával és a fejlett bioinformatikával a plazma dd-cfDNS frakció ma már vesetranszplantált recipiensben is mérhető anélkül, hogy a donor vagy a recipiens előzetes genotipizálása szükséges lenne. A közelmúltban végzett vizsgálatok kimutatták, hogy a plazma dd-cfDNS ígéretes új módszer az akut kilökődés kimutatására az immunológiai sérülést megelőzően nem invazív módon, mivel a biopsziával igazolt akut kilökődés előtt és időpontjában megemelkedik. Az 1%-nál nagyobb vagy egyenlő dd-cfDNS-frakció akut kilökődés előrejelzésére volt képes közepestől jóig azokban a vizsgálatokban, ahol a görbe alatti terület (AUC) 0,59 és 0,97 között változott a vevő működési jellemzői (ROC) görbe elemzésekor. Ha az akut kilökődést mechanizmussal vizsgáljuk, úgy tűnik, hogy a dd-cfDNS-frakció jobb prediktív teljesítménnyel rendelkezik az antitest-mediált kilökődés (ABMR) esetében, míg a T-sejt-közvetített kilökődés (TCMR) előrejelzésére való használhatósága továbbra is kétséges, különösen akkor, ha az alacsonyabb súlyosságú (kevesebb, mint a Banffé). 1B). Mindazonáltal az alacsonyabb súlyosságú TCMR-ben (Banff 1A vagy szubklinikai) kimutatták, hogy a 0,5%-os vagy annál nagyobb dd-cfDNS-frakció potenciálisan azonosítja azokat a vesetranszplantált recipienseket, akiknél nagyobb a becsült glomeruláris filtrációs ráta (eGFR) csökkenése, és de-novo alakul ki. donorspecifikus antitestek és a jövőbeni kilökődési epizódok. Annak ellenére, hogy a Medicare klinikai felhasználásra jóváhagyta, a dd-cfDNS-nek számos korlátozása maradt az akut kilökődés előrejelzésében. Először is, a dd-cfDNS emelkedése nem kilökődés-specifikus, mivel más orvosi szövődmények, például húgyúti fertőzések, szisztémás fertőzések és BK-vírus nefropátia szintén növelhetik a dd-cfDNS-t. Másodszor, a dd-cfDNS prediktív teljesítménye a TCMR-re, különösen az alacsonyabb súlyosságúra, továbbra is kétséges. Végül nem világos, hogy a vesetranszplantáció utáni korai dd-cfDNS-frakció megjósolhatja-e a jövőbeli immunológiai graft sérüléseket és funkciót. A dd-cfDNS-nek az akut kilökődésre specifikusabbá tételére, a TCMR-re vonatkozó prediktív teljesítményének javítására és a jövőbeli graftfunkcióval való korrelálására szolgáló új módszerek tovább javítanák a klinikai használhatóságot. A szabályozó T-sejtek (Treg-sejtek) alapvető fontosságúak a tolerancia kiváltásában és fenntartásában különböző vesetranszplantációs állatmodellekben az effektor immunválaszok elnyomásával. A tregek a CD4+ T-sejtek 5-10%-át teszik ki, és hagyományosan homogén populációként azonosítják őket, magas a CD25 expressziójával, alacsony a CD127 expressziójával és a FoxP3 fő transzkripciós faktor expressziójával. A legújabb adatok azonban azt mutatják, hogy a Treg-ek heterogénebbek, és további molekulák expressziója, mint a hagyományos CD25, CD127 és FoxP3, befolyásolja szuppresszív funkcionális aktivitásukat. Humán vesetranszplantációban a transzplantáció után keringő CD4+CD25hiCD127lo/- Treg értékek hasonlóak voltak az akut kilökődésben szenvedő és nem szenvedő recipiensek között. Azonban a HLA-DR magas expressziója a transzplantáció után keringő Tregeken, amelyek maximálisan szuppresszív funkcionális aktivitású populációt azonosítottak, alacsonyabb volt az akut kilökődésben szenvedő recipienseknél. Egy másik molekula, amely egy maximálisan szupresszív funkcionális aktivitással rendelkező Treg populációt azonosít, a TNFR2. A TNFR2 közvetíti a gyulladást elősegítő citokin, a TNF-a biológiai funkcióját, amely részt vesz az effektor T-sejtek toborzásában és aktiválásában az allograft kilökődés során. Érdekes módon kimutatták, hogy a TNFR2 preferenciálisan a Treg-eken expresszálódik, szemben az effektor T-sejtekkel. Mind az egéren, mind az emberen végzett vizsgálatokban a TNF-α jelátvitel a TNFR2+ Treg-eken keresztül növelte túlélésüket, proliferációjukat és szuppresszív funkcionális aktivitásukat.

Előzetes eredmények A kutatók korábban a TNFR2+ Tregeket tanulmányozták a vesetranszplantáció specifikus kontextusában. A kutatók a vesetranszplantációs jelöltek egy csoportjában megerősítették, hogy a TNFR2 expressziója a Treg-sejteken korrelált a szuppresszív funkcióval, amelyet a Tregek stimulált effektor T-sejtekkel végzett hagyományos kotenyésztési vizsgálatával mértek (r=0,63, p<0,01). Egy 76 elhunyt donor vesetranszplantált recipiensből álló csoportjában a kutatók közzétették a transzplantáció előtti keringő TNFR2+ Treg-ek szerepét a veseátültetés utáni késleltetett és lassú graft funkció előrejelzésében. Mivel a késleltetett és lassú graft működése ismert kockázati tényező a veseátültetés utáni akut kilökődés kialakulásában, a kutatók megvizsgálták a transzplantáció előtt keringő recipiens TNFR2+ Treg-ek szerepét az akut kilökődés előrejelzésében a recipiensek ugyanabban a kohorszában, amelyben 75 beteg volt. rendelkezésre álló akut kilökődési adatok ígéretes eredménnyel, különösen alacsony súlyosságú TCMR esetén.

Hipotézisek

Mivel a korábbi tanulmányok és a vizsgálók előzetes eredményei egy túlnyomórészt alacsony súlyosságú TCMR-t tartalmazó kohorszban azt sugallják, hogy a HLA-DR+TNFR2+ Treg szerepet játszik az akut kilökődés előrejelzésében, a kutatók azt feltételezik, hogy a dd-cfDNS-frakcióval való integrálása javíthatja a specificitást és a prediktív képességet. teljesítmény akut kilökődés esetén, különösen a TCMR. A kutatók azt is feltételezik, hogy a korai dd-cfDNS-frakció és a transzplantáció előtti HLA-DR+TNFR2+ Treg-ek mérése előre jelezheti a vesetranszplantáció utáni jövőbeni kimeneteleket, beleértve az akut kilökődést és az eGFR-rel mért graft funkciót.

Célok

1. Tesztelje, hogy a dd-cfDNS-frakció integrálása HLA-DR+TNFR2+ Tregekkel az allograft sérülése előtt vagy az allograft sérülésekor javíthatja-e a vesetranszplantáció utáni akut kilökődés előrejelző teljesítményét.
2. Tesztelje, hogy a dd-cfDNS-frakció integrálása a transzplantáció után 2 héttel a transzplantáció előtti HLADR+TNFR2+ Tregekkel megjósolhatja-e a jövőbeli akut kilökődési epizódokat és az 1 éves graft működését.

A kutatók 150 felnőtt vesetranszplantált személyt vesznek fel biztosítási fedezettel a dd-cfDNS-frakció mérésére.