Dd-cfDNA и Treg в прогнозировании острого отторжения трансплантата почки

Фон

Несмотря на достижения в области иммуносупрессии, 10-летняя выживаемость трансплантата после трансплантации почки остается на уровне около 50%. Своевременная диагностика острого отторжения у реципиентов почечного трансплантата необходима для улучшения долгосрочной выживаемости трансплантата. Клиническое подозрение на острое отторжение в настоящее время основывается на мониторинге повышения уровня креатинина в сыворотке крови и диагностическом подтверждении с помощью биопсии почечного аллотрансплантата. Однако повышение уровня креатинина в сыворотке неспецифично для острого отторжения и обнаруживается после того, как уже произошло значительное иммунологическое повреждение аллотрансплантата. Подтверждение биопсией является инвазивным, связано с частотой серьезных осложнений 1% и зависит от неадекватного отбора проб, а также от экспертных оценок. Новые способы мониторинга и диагностики острого отторжения до иммунологического повреждения неинвазивным способом необходимы для улучшения долгосрочной выживаемости трансплантата после трансплантации почки. Внеклеточная ДНК обычно высвобождается в кровоток, когда клетки подвергаются апоптозу или некрозу. В контексте трансплантации почки и при наличии аллотрансплантата бесклеточная ДНК донора (dd-cfDNA) постоянно попадает в кровоток реципиента в результате оборота клеток аллотрансплантата и представляет собой небольшую долю общего количества клеток. свободная ДНК (полученная от донора и реципиента). Фракция Dd-cfDNA изначально высока из-за ишемически-реперфузионного повреждения и обычно снижается до исходного уровня через 10–14 дней после трансплантации почки. Впоследствии эпизоды повреждения аллотрансплантата, такие как острое отторжение, приводят к увеличению фракции dd-cfDNA в кровотоке реципиента. Используя технологию мультиплексной полимеразной цепной реакции на основе однонуклеотидных полиморфизмов и передовую биоинформатику, фракцию dd-cfDNA в плазме теперь можно измерить у реципиента почечного трансплантата без необходимости предварительного генотипирования донора или реципиента. Недавние исследования продемонстрировали, что dd-cfDNA плазмы является многообещающим новым методом выявления острого отторжения до иммунологического повреждения неинвазивным способом, поскольку она повышается заранее и во время подтвержденного биопсией острого отторжения. Доля отсечки dd-cfDNA, превышающая или равная 1%, могла предсказать острое отторжение с эффективностью от умеренной до хорошей в тех исследованиях, где площадь под кривыми (AUC) варьировалась от 0,59 до 0,97 при анализе кривой рабочих характеристик приемника (ROC). При изучении механизма острого отторжения фракция dd-cfDNA, по-видимому, лучше предсказывает отторжение, опосредованное антителами (ABMR), в то время как ее полезность для прогнозирования опосредованного Т-клетками отторжения (TCMR) остается сомнительной, особенно при более низкой степени тяжести (менее, чем по шкале Банфа). 1Б). Тем не менее, было показано, что при более низкой степени тяжести TCMR (Banff 1A или субклиническая) фракция dd-cfDNA, превышающая или равная 0,5%, потенциально идентифицирует реципиентов почечного трансплантата с риском более резкого снижения расчетной скорости клубочковой фильтрации (рСКФ), развивающегося de novo. донорские специфические антитела и будущие эпизоды отторжения. Несмотря на то, что Medicare одобрила клиническое использование, у dd-cfDNA остается несколько ограничений в прогнозировании острого отторжения. Во-первых, повышение уровня dd-cfDNA не является специфичным для отторжения, поскольку другие медицинские осложнения, такие как инфекции мочевыводящих путей, системные инфекции и нефропатия, вызванная вирусом BK, также могут повышать уровень dd-cfDNA. Во-вторых, прогностическая эффективность dd-cfDNA для TCMR, особенно более низкой степени тяжести, остается сомнительной. Наконец, неясно, может ли ранняя фракция dd-cfDNA после трансплантации почки предсказать будущие иммунологические повреждения и функцию трансплантата. Новые способы сделать dd-cfDNA более специфичной для острого отторжения, улучшить ее прогностическую эффективность для TCMR и сопоставить ее с будущей функцией трансплантата еще больше улучшат ее клиническую полезность. Регуляторные Т-клетки (Treg) необходимы для индукции и поддержания толерантности в различных моделях животных с трансплантацией почек путем подавления эффекторных иммунных ответов. Tregs составляют 5-10% CD4+ Т-клеток и традиционно идентифицируются как однородная популяция с высокой экспрессией CD25, низкой экспрессией CD127 и экспрессией главного транскрипционного фактора FoxP3. Однако недавние данные показывают, что Treg более гетерогенны и что экспрессия дополнительных молекул, чем традиционные CD25, CD127 и FoxP3, влияет на их супрессивную функциональную активность. При трансплантации почки человека посттрансплантационные циркулирующие CD4+CD25hiCD127lo/-Treg были одинаковыми у реципиентов, которые страдали от острого отторжения, и у тех, у кого его не было. Однако высокая экспрессия HLA-DR на посттрансплантационных циркулирующих Treg, выявляющая популяцию с максимально супрессивной функциональной активностью, была ниже у реципиентов с острым отторжением. Другой молекулой, идентифицирующей популяцию Treg с максимально подавляющей функциональной активностью, является TNFR2. TNFR2 опосредует биологическую функцию провоспалительного цитокина TNF-a, который участвует в рекрутировании и активации эффекторных Т-клеток при отторжении аллотрансплантата. Интересно, что было показано, что TNFR2 преимущественно экспрессируется на Treg, а не на эффекторных Т-клетках. В исследованиях как на мышах, так и на людях передача сигналов TNF-α через TNFR2+ Tregs увеличивала их выживаемость, пролиферацию и супрессивную функциональную активность.

Предварительные результаты Исследователи ранее изучали TNFR2+ Treg в конкретном контексте трансплантации почки. Исследователи подтвердили в когорте кандидатов на трансплантацию почки, что экспрессия TNFR2 на Tregs коррелирует с супрессорной функцией, измеренной с помощью традиционного анализа совместного культивирования Tregs со стимулированными эффекторными Т-клетками (r = 0,63, р<0,01). В когорте из 76 умерших реципиентов донорской почки исследователи опубликовали информацию о роли TNFR2+ Treg, циркулирующих до трансплантации, в прогнозировании отсроченной и медленной функции трансплантата после трансплантации почки. Поскольку отсроченная и медленная функция трансплантата являются известными факторами риска развития острого отторжения после трансплантации почки, исследователи затем изучили роль TNFR2+ Treg, циркулирующих до трансплантации, в прогнозировании острого отторжения в той же когорте реципиентов, в которой 75 человек перенесли трансплантацию. имеющиеся данные об остром отторжении с многообещающими результатами, особенно при TCMR низкой степени тяжести.

Гипотезы

Поскольку предыдущие исследования и предварительные результаты исследователей в когорте, преимущественно включающей TCMR легкой степени тяжести, предполагают роль HLA-DR+TNFR2+ Treg в прогнозировании острого отторжения, исследователи предполагают, что их интеграция с фракцией dd-cfDNA может улучшить специфичность и прогностическую значимость. эффективность при остром отторжении, особенно TCMR. Исследователи также предполагают, что измерение ранней фракции dd-cfDNA и предтрансплантационных HLA-DR+TNFR2+ Treg может прогнозировать будущие результаты после трансплантации почки, включая острое отторжение и функцию трансплантата, измеряемую с помощью рСКФ.

Цели

1. Проверьте, может ли интеграция фракции dd-cfDNA с Treg HLA-DR+TNFR2+ заранее или во время повреждения аллотрансплантата улучшить прогностическую эффективность острого отторжения после трансплантации почки.
2. Проверьте, может ли интеграция фракции dd-cfDNA через 2 недели после трансплантации с предтрансплантационными HLADR+TNFR2+ Treg предсказать будущие эпизоды острого отторжения и функцию трансплантата в течение 1 года.

Исследователи наберут 150 взрослых реципиентов трансплантата почки со страховым покрытием для измерения фракции dd-cfDNA.