A Mycobacterium Tuberculosis sejtmentes DNS diagnosztikai hasznossága Hongkongban (MYDNITE-3)

A tuberkulózis (TB) továbbra is a fertőző betegségek egyik fő terhe világszerte. Az Egészségügyi Világszervezet (WHO) 2023-as Globális TBC-jelentése szerint 2022-ben több mint hétmillió ember fertőződött meg tbc-vel, és 1,3 millióan haltak bele a betegségbe. Kína a legnagyobb tbc-terhekkel küzdő országok között van az első három ország között, míg Hongkongban a tbc-s köztes terhelés, évente átlagosan 4000 új esettel.

A tbc-fertőzés a betegek körülbelül 25%-ában okozhat különböző megnyilvánulásokat a tüdő parenchymáján kívül (extrapulmonális tbc, EPTB), és rosszabb kezelési eredménnyel jár, mint a pulmonalis tbc. A tuberkulózisos mellhártyagyulladás (TBP) a legelterjedtebb formája Hongkongban és Kínában (az összes EPTB 41-50%-a). Bár a TBP megjelenhet akuttól szubakutig terjedő egyoldalú pleurális folyadékgyülem, légszomj és láz formájában, megjelenése gyakran nem specifikus. Klinikai és epidemiológiai jelentősége miatt a TBP pontos megkülönböztetése más típusú pleurális folyadékgyülemektől kulcsfontosságú a diagnosztikai folyamat lerövidítéséhez és az eredmények optimalizálásához ezeknél a betegeknél.

Laboratóriumi kihívások a TBP diagnosztizálásában A TBP diagnosztizálása kihívást jelent, mivel a betegséget a pleurális térben található kisszámú baktérium okozza (paucibaciláris természet), ami korlátozza a különböző hagyományos diagnosztikai módszerek diagnosztikai teljesítményét. E korlátozások közé tartozik a mellhártyafolyadék mikrobiológiai tesztjeinek alacsony érzékenysége (saválló bacillus [AFB] festés, Mycobacterium tuberculosis [MTB] tenyészet és MTB polimeráz láncreakció [PCR]), valamint a pleurális folyadék biomarkereinek (adenozin-deamináz [ADA]) specifikusságának hiánya. különösen az alacsony TB prevalenciájú régiókban. Bár az MTB tenyészet és a PCR hozama a pleurális szöveten magasabb, a pleurális biopszia (ágy melletti eljárással vagy pleuroszkópiával) invazivitást hordoz, és további eljárást igényel. Jelenleg egyetlen ideális teszt sem tud egyszerre több diagnosztikai célt elérni, beleértve a magas kimutatási érzékenységet, a magas specifitást más betegségek kizárására, a rövid átfutási időt, az alacsony invazivitást és a gyógyszerrezisztencia kimutatását. A TBP diagnózisa gyakorlatilag klinikai, radiológiai és laboratóriumi végpontok összesítésén alapul. A diagnózis esetenként klinikailag is felállítható mikrobiológiai vagy szövettani bizonyíték (valószínű TBP) nélkül.

A késleltetett TBP-diagnózis következményei A TBP diagnosztizálásának nehézségeinek fő klinikai hátrányai közé tartozik a szükségtelen invazív pleurális beavatkozás és a gyógyító kezelés késleltetett megkezdése. Belső ellenőrzésünk a közelmúltban feltárta, hogy a kezelés megkezdése a megerősítő vizsgálati eredményekre várva késett, és a betegeknek átlagosan egy további eljárásra volt szükségük a diagnózis felállításához, amely magában foglalta az invazívabb jellegű pleurális biopsziát is. Ezek a betegek hosszú ideig kórházi kezelésben részesültek, és több antibiotikumot is kipróbáltak a megoldatlan láz miatt. Egyes betegek ehelyett empirikus anti-TB kezelést kaphatnak kompatibilis klinikai képen alapuló megerősítő diagnosztikai vizsgálati eredmények nélkül. Ez azonban nem veszélytelen (pl. hepatotoxicitás), különösen időseknél, akik érzékenyebbek a TBP-re. A TBP jobb diagnosztikai eszköze mérsékelné ezeket a klinikai kihívásokat.

Folyékony biopszia pleurális folyadékgyülemben: csoportunk legújabb fejlesztése A folyékony biopszia a testnedvekben található sejtmentes DNS (cfDNS) kimutatásával lehetséges megoldás. Amikor a TB-baktériumok elpusztulnak vagy lebomlanak, a DNS-fragmensek a pleurális térbe kerülnek, és Mycobacterium tuberculosis cfDNS-t (MTB cfDNS) hoznak létre. Az MTB cfDNS kimutatása a pleurális folyadékban közvetlenül igazolhatja a TB bacilusok vagy alegységeik jelenlétét a pleurális térben, ami vonzó lehetőség. A korábbi vizsgálatok MTB cfDNS-t használtak a TBP diagnosztizálására, de a teljesítmény változó volt. Che és munkatársai először MTB cfDNS-t mértek az IS6110 inszerciós szekvencia kimutatásával. A TBP diagnosztizálásának érzékenysége 75,0% volt (95%-os konfidencia intervallumok [CI] 63,7-86,3%) 100,0%-os specificitással (95% CI 100,0-100,0%), és a pleurális folyadék MTB tenyészet-negatív esetei kerültek a TBP csoportba. Az MTB cfDNS diagnosztikai érzékenysége jobb volt, mint a pleurális folyadék ADA, MTB kultúra és MTB PCR Xpert MTB/RIF segítségével. Yang és munkatársai ugyanazt a laboratóriumi technikát alkalmazták, és magas diagnosztikai érzékenységet találtak 96,6%-ban (95% CI 92,0-100,0%) a pleurális folyadék MTB vagy PCR pozitív státuszával meghatározott TBP esetekben. A diagnosztikai érzékenység azonban 79,5%-ra csökkent (95% CI 72,4-86,7%) ha pleurális folyadék MTB tenyészet vagy PCR-negatív esetek szerepeltek a TBP csoportban. Hasonló eredményekről számoltak be Sharma és munkatársai is. Mindezek a vizsgálati eredmények az MTB cfDNS heterogén diagnosztikai teljesítményét tükrözték. Az alacsony bakteriális terhelést jelző negatív pleurális folyadék MTB kultúra vagy PCR státusz ronthatja az MTB cfDNS klinikai használhatóságát.

Csoportunk a közelmúltban kifejlesztett egy új laboratóriumi vizsgálatot, amely az MTB cfDNS szintjét méri, és célzott szekvenálást foglal magában egy befogó-próba rendszeren és új bioinformatikai algoritmuson keresztül. A diagnosztikai teljesítmény robusztus maradt annak ellenére, hogy a pleurális folyadék MTB tenyészet-negatív eseteit is figyelembe vettük, ami potenciálisan elkerülheti az újabb invazív diagnosztikai eljárást.

Validációs kohorsz szükségessége a klinikai gyakorlatba való bevezetés előtt Mivel a fejlesztési kohorsz csak korlátozott számú pleurális folyadékmintát tartalmaz végleges diagnózissal, az új MTB cfDNS vizsgálat valódi diagnosztikai pontossága csak egy prospektív, nem szelektív kohorszban határozható meg. a valós helyzetet, amely reális diagnosztikai teljesítményt nyújt. Ez megerősíti az MTB cfDNS vizsgálat klinikai hasznosságát, mielőtt a klinikai gyakorlatba bevezetnék. Feltételezzük, hogy az új MTB cfDNS vizsgálat robusztus marad egy leendő kohorszban, és felülmúlja a korábban bejelentett módszereket a TBP és a nem TBP miatti pleurális folyadékgyülem megkülönböztetésében.