Диагностическая ценность бесклеточной ДНК микобактерий туберкулеза в Гонконге (MYDNITE-3)

Туберкулез (ТБ) остается ключевым бременем инфекционных заболеваний во всем мире. Согласно Глобальному докладу Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) по туберкулезу за 2023 год, в 2022 году более семи миллионов человек были инфицированы туберкулезом, а 1,3 миллиона умерли от этой болезни. Китай входит в тройку стран с самым высоким бременем туберкулеза, в то время как Гонконг имеет промежуточное бремя туберкулеза, где в среднем регистрируется 4000 новых случаев в год.

Туберкулезная инфекция может вызывать заболевание различных проявлений вне паренхимы легких примерно у 25% больных (внелегочный туберкулез, ВЛТБ) и связана с худшими результатами лечения, чем туберкулез легких. Туберкулезный плеврит (ТБП) является наиболее распространенной формой в Гонконге и Китае (41–50% всех ВЛТБ). Хотя ТБП может проявляться острым или подострым возникновением одностороннего плеврального выпота, одышки и лихорадки, его проявления часто неспецифичны. Из-за своей клинической и эпидемиологической важности точное отличие ТБП от других типов плеврального выпота имеет решающее значение для сокращения диагностического процесса и оптимизации результатов для этих пациентов.

Лабораторные проблемы диагностики ТБП Диагностика ТБП является сложной задачей, поскольку заболевание вызывается небольшим количеством бактерий (олигобациллярной природы) в плевральной полости, что ограничивает диагностическую эффективность различных традиционных диагностических методов. Эти ограничения включают низкую чувствительность микробиологических тестов плевральной жидкости (окрашивание кислотоустойчивыми бациллами [AFB], культура микобактерий туберкулеза [MTB] и полимеразная цепная реакция MTB [PCR]) и отсутствие специфичности для биомаркеров плевральной жидкости (аденозиндезаминаза [ADA]). особенно в регионах с низкой распространенностью туберкулеза. Хотя урожайность культуры MTB и ПЦР на плевральной ткани выше, биопсия плевры (прикроватная процедура или плевроскопия) является инвазивной и требует дополнительной процедуры. В настоящее время ни один идеальный тест не может одновременно достичь нескольких диагностических целей, включая высокую чувствительность обнаружения, высокую специфичность для исключения других заболеваний, короткое время выполнения, низкую инвазивность и выявление лекарственной устойчивости. Диагноз ТБП практически основан на совокупности клинических, радиологических и лабораторных показателей. Иногда диагноз может быть установлен клинически без какого-либо микробиологического или гистологического подтверждения (вероятно ТБП).

Последствия поздней диагностики ТБП Ключевые клинические недостатки диагностики ТБП включают ненужные инвазивные плевральные вмешательства и позднее начало радикального лечения. Наш внутренний аудит недавно показал, что начало лечения было отложено в ожидании подтверждающих результатов тестов, и пациентам требовалась в среднем одна дополнительная процедура для установления диагноза, которая включала биопсию плевры с более инвазивным характером. Этим пациентам пришлось провести длительное пребывание в больнице для обследований и испытаний нескольких антибиотиков при неразрешенной лихорадке. Вместо этого некоторые пациенты могут получать эмпирическое противотуберкулезное лечение на основании совместимых клинических проявлений без подтверждающих результатов диагностических исследований. Однако это небезопасно (например, гепатотоксичность), особенно у пожилых людей, которые более восприимчивы к ТБФ. Более эффективный инструмент диагностики ТБП мог бы смягчить эти клинические проблемы.

Жидкая биопсия при плевральном выпоте: новейшая разработка нашей группы. Потенциальным решением является жидкая биопсия путем обнаружения внеклеточной ДНК (вкДНК) в жидкостях организма. Когда туберкулезные бактерии умирают или разрушаются, фрагменты ДНК попадают в плевральную полость, образуя вкДНК Mycobacterium Tuberculosis (вкДНК МТБ). Обнаружение вкДНК МТБ в плевральной жидкости может напрямую доказать наличие туберкулезных бацилл или их субъединиц в плевральной полости, что является привлекательным вариантом. В предыдущих исследованиях для диагностики ТБП использовалась вкДНК MTB, но эффективность была различной. Че и др. впервые измерили вкДНК MTB, обнаружив вставочную последовательность IS6110. Чувствительность диагностики ТБП составила 75,0%. (95% доверительные интервалы [ДИ] 63,7–86,3%) со специфичностью 100,0% (95% ДИ 100,0-100,0%), и случаи с отрицательным результатом культуры МТБ в плевральной жидкости были включены в группу ТБП. Диагностическая чувствительность вкДНК МТБ была лучше, чем ADA плевральной жидкости, культуры МТБ и ПЦР МТБ по данным Xpert MTB/RIF. Yang и соавт. использовали тот же лабораторный метод и обнаружили высокую диагностическую чувствительность на уровне 96,6% (95% ДИ 92,0–100,0%) в случаях ТБП, определяемых по MTB плевральной жидкости или положительному статусу ПЦР. Однако диагностическая чувствительность снизилась до 79,5% (95% ДИ 72,4-86,7%). если культура плевральной жидкости МТБ или ПЦР-отрицательные случаи были включены в группу ТБП. Аналогичные результаты были также получены Sharma et al. Все эти результаты исследований отражают гетерогенную диагностическую эффективность вкДНК МТБ. Отрицательный результат посева МТБ плевральной жидкости или статус ПЦР, указывающий на низкую бактериальную нагрузку, может ухудшить клиническую ценность вкДНК МТБ.

Наша группа недавно разработала новый лабораторный метод измерения уровней вкДНК MTB, включающий целевое секвенирование с помощью системы захвата-зонда и новый биоинформатический алгоритм. Диагностическая эффективность оставалась высокой, даже несмотря на то, что были включены случаи с отрицательным результатом культуры МТБ в плевральной жидкости, что потенциально может избежать проведения другой инвазивной диагностической процедуры.

Необходимость в когорте проверки перед внедрением в клиническую практику. Поскольку группа разработки содержит только ограниченное количество образцов плевральной жидкости с окончательным диагнозом, истинная диагностическая точность нового анализа вкДНК МТБ может быть определена только в проспективной, неселективной когорте, отражающей реальную ситуацию, что даст реалистичные диагностические результаты. Это подтвердит клиническую полезность анализа вкДНК MTB до его внедрения в клиническую практику. Мы предполагаем, что новый анализ вкДНК MTB остается надежным в проспективной когорте и превосходит ранее опубликованные методы в различении плевральных выпотов, вызванных ТБФ, от не-ТБФ.