Confronti dello sviluppo embrionale umano utilizzando un singolo mezzo con e senza l'aggiunta di antiossidanti

Obiettivo dello studio: Studio che confronta lo sviluppo di blastocisti sulla stessa coorte di ovociti utilizzando due diversi mezzi, G-TL contro G-TL integrati con antiossidanti.

Endpoint primario: percentuale di blastocisti di buona qualità (GQB) per ovocita fecondato il giorno 5.

Endpoint secondari

• Sviluppo embrionale giorno 3, 5 e 6
• Qualità dell'embrione giorno 3, 5 e 6
• Formazione totale di blastocisti (giorno 5 e giorno 6)
• Tasso di utilizzo (embrioni disponibili per il trasferimento e la crioconservazione)
• Tasso di impianto
• Tasso di gravidanza clinica

Configurazione: potenziale fratello embrionale, studio di superiorità

MATERIALI E METODI Intervento Nuovo tipo di terreno di coltura embrionale utilizzato per la coltura in vitro di embrioni umani FIV.

Analisi di potenza La pianificazione e l'analisi di potenza sono state fatte insieme a uno statistico, Nils-Gunnar Pehrsson.

Dai dati retrospettivi che utilizzano la simulazione, la SD intra-individuale per la differenza in % GQB tra le due strategie multimediali è stata stimata al 32%. Per trovare una differenza dell'8% in GQB tra i due media con potenza dell'80% con T-test accoppiato saranno necessarie 128 coppie.

Randomizzazione Le coppie verranno arruolate nello studio dopo il controllo della fecondazione (giorno 1). Per la partecipazione è richiesto un minimo di 6 zigoti.

Verrà eseguita la randomizzazione stratificata degli zigoti per coppia. Per ogni coppia verranno numerati gli zigoti.

Questi zigoti per ogni coppia saranno quindi bloccati (per due) randomizzati ai due tipi di media; A (terreno di coltura tradizionale = controllo) e B (terreno antiossidante = intervento). In entrambi i gruppi verrà eseguita la cultura tradizionale. L'assegnazione sarà effettuata in rapporto 1:1 secondo una lista di randomizzazione univoca per ogni coppia.

Blinding Per minimizzare possibili bias per l'esito primario (GQE D5) l'embriologo che esegue la valutazione morfologica il giorno 5/6 non saprà a quale gruppo appartengono gli embrioni.

Sia il medico che la coppia saranno ciechi a quale gruppo sono stati assegnati.

Procedura di trattamento di fecondazione in vitro Verrà eseguito un trattamento di fecondazione in vitro tradizionale che include la stimolazione ovarica e il prelievo di ovociti utilizzando i metodi standard presso le cliniche.

Valutazione dell'embrione e tempistica della valutazione secondo i criteri di consenso Alpha/ESHRE.

Punteggio morfologico La morfologia della blastocisti sarà valutata secondo il sistema di punteggio di consenso per le blastocisti (laboratorio di consenso di Istanbul sulla valutazione dell'embrione) e la morfologia sarà documentata con foto individuali di ciascuna blastocisti. Il punteggio della blastocisti verrà eseguito al microscopio invertito il giorno 5 e il giorno 6. Una blastocisti di buona qualità è definita almeno di Grado 2:2:2 secondo il sistema di classificazione Istanbul Consensus. (Balaban et al., 2011).

DOCUMENTAZIONE Tutti i pazienti che partecipano allo studio saranno documentati su un CRF computerizzato. Questo documento sarà correlato alle cartelle cliniche dei pazienti con tutti i dati clinici e di laboratorio pertinenti dello specifico ciclo di fecondazione in vitro. Attraverso il sistema di journal (WinIVF) utilizzato a Fertilitetscentrum, sarà possibile generare un elenco completo di tutte le variabili incluse nello studio.

Verranno registrati anche i pazienti a cui è stato chiesto di partecipare allo studio ma che non soddisfano i criteri per la randomizzazione.

ANALISI STATISTICA Verranno definite sia una popolazione Intention-to-Treat (ITT) che una popolazione Per Protocol (PP). La variabile di efficacia primaria in questo studio di superiorità sarà la differenza in %GQB tra i due tipi di media per ogni coppia. L'analisi statistica primaria sarà un test T accoppiato a due code per quanto riguarda la media della differenza in% GQB tra terreni di coltura standard e terreni antiossidanti sulla popolazione ITT. Verrà calcolato un intervallo di confidenza bilaterale al 95% per la differenza media in %GOB tra i due mezzi. Tutti i test di significatività saranno bilaterali e condotti al livello di significatività del 5%.