口腔液収集装置の評価

VioOne 口腔液サンプル収集デバイス (以下、VioOne デバイスと呼びます) を評価するための研究は、以下に説明するいくつかのサブ研究で構成されます。

A. 回復研究

この研究では、VioOne Sample Collection Device で収集された非喫煙者の口腔液にスパイクされたコチニンの回収率を決定します。

1. サンプルコレクション

   VioOne の添付文書に従って、非喫煙者であると自己申告した 5 人の個人から口腔液が収集されます。 収集されたサンプルは、0、5、10、15、または 25 ng/mL の濃度にコチニンで個別にスパイクされます。 各濃度2セット用意します。 1 セットはテスト前に 2 ～ 8°C で保管され、1 セットは通常の出荷条件に従って出荷され、返送時にテストされます。

2. テスト

   次に、各サンプルを Calbiotech Cotinine ELISA アッセイで 2 回ずつテストし、検出された濃度をスパイクした濃度と比較することにより、各レベルの回収率を計算します。

3. データ分析 回収率は、検出された濃度をスパイクされた濃度と比較することにより、各レベルについて計算されます。

B. 感度/精度調査 調査の目的は、VioOne Sample Collection Device で採取した口腔液サンプルを使用した場合、Calbiotech Cotinine ELISA が喫煙者と非喫煙者を区別できることを示すことです。

1. サンプル収集 最低 2 つの研究サイトがこの研究に参加します。 約218人がこの研究に登録されます。 少なくとも 58 の収集されたサンプルは、自己宣言された喫煙者からのものでなければなりません。 口腔液サンプルは個人から収集され、インフォームド コンセントが与えられ、個人が喫煙者であるかどうか、および 1 日あたりの平均喫煙本数にかかわらず、匿名で自己報告されます。 この研究では、各個人から 2 つのサンプルが収集されます。 1 つのサンプルは VioOne Collection Device を使用して収集され、もう 1 つのサンプルは市販の唾液収集カップを使用して収集されます。

   患者を登録するための年齢、性別、または人種の基準はありません。

2. テスト VioOne Sample Collection Device で収集されたすべてのサンプルは Calbiotech Cotinine ELISA でテストされ、唾液収集カップで収集された純粋な唾液サンプルは GC/MS でテストされます。後者はゴールド スタンダード メソッドです。
3. データ分析 GC/MS の結果は、VioOne Oral Fluid Collection Device で収集された口腔液サンプルを使用してアッセイの臨床感度と特異性を評価するためのゴールド スタンダードとして使用されます。

C. アッセイ特異性研究 飲料および家庭用品は、口腔液中のコチニンの検出における干渉についてテストされます。

1. サンプル収集 口腔液サンプルは、非喫煙者として自己報告された個人から収集され、結果のサンプル/バッファーマトリックスがプールされます。

   プールは 15 のアリコートに分割され、次の 14 の化合物のそれぞれに個別にスパイクされます。 プールからの 1 つのアリコートは、スパイクされていないままになります。 スパイクされた各アリコートは、さらに 3 つのアリコートに分割されます。 1 つのアリコートには化合物のみをスパイクしたままにし、1 つのアリコートには 5 ng/mL のコチニンをさらにスパイクし、もう 1 つのアリコートには 15 ng/mL のコチニンをさらにスパイクします。

2. テスト 各サンプルは、二重にテストされます。

   特に明記しない限り、次の化合物はそれぞれ最終濃度 10% でスパイクされます。

   砂糖 水 アルコール（エタノール） 歯磨き粉 全血（10mg/mL） クランベリージュース 過酸化水素 重曹 重曹 塩化ナトリウム オレンジジュース コーラ せき止めシロップ 防腐剤 水 ヘモグロビン（10mg/mL）

3. データ分析結果は、精度調査で測定された期待されるパフォーマンスと比較されます。 (精密研究では、採取したヒトの口腔液を使用する必要はありません)

D. アッセイ特異性試験

潜在的な食物やその他の口腔汚染物質の影響は、時限試験で評価されます。

1. サンプルコレクション

   非喫煙者であると自己申告した 10 人の個人が、この研究のために募集されます。

   VioOne Sample Collection Device を使用して、研究開始直前に各個人から 1 つのサンプルを収集します。 その後、各個人には、消費するハードキャンディーが与えられます。 追加のサンプルは、消費後すぐに VioOne で収集され、消費後 10 分、その後 30 分ごとに最大 3 時間収集されます。

   すべてのサンプルが収集された後、各サンプルは 2 つのアリコートに分割されます。 1 つのアリコートには 5ng/mL のコチニンをスパイクし、もう 1 つのアリコートには 15ng/mL のコチニンをスパイクします。

2. テスト 各サンプル/スパイク/時点で3回テストされます
3. データ分析結果は、精度調査で測定された期待されるパフォーマンスと比較されます。 (精密研究では、採取したヒトの口腔液を使用する必要はありません)

Ｅ．サンプル収集緩衝液中のサンプルの安定性 様々な温度で経時的にサンプル収集緩衝液に保存されたサンプルの安定性を確立するために研究が行われる。

1. サンプルコレクション

   口腔液サンプルは、非喫煙者として自己申告された個人から収集され、結果のサンプル/バッファーマトリックスがプールされます。

   プールは 3 つのアリコートに分割されます。 1 つのアリコートには 7.5ng/mL のコチニンをスパイクし、もう 1 つのアリコートには 10ng/mL のコチニンをスパイクし、もう 1 つのアリコートにはスパイクを加えません。

   スパイクと非スパイクのそれぞれを 4 つのチューブに分注し、-20 oC、2 ～ 8 oC、室温、および 37 oC で保存します。

2. テスト

   各サンプルは、0、7、14、21、28、および 35 日目に 8 回反復してテストされます。

3. データ解析

サンプルは、サンプルの特定の日のコチニン濃度の 95% 信頼区間が 0 日目の信頼区間と重なる試験時点で安定していると見なされます。

F. ELISA とデバイスの安定性

Calbiotech Cotinine ELISA アッセイと VioOne Sample collection Device の安定性と有効期限を確立するために、長期安定性研究が実施されます。

1. サンプルコレクション

   各テスト時点で、3 人の個人からサンプルが収集されます。 各個人は 3 つのサンプルを提供します。1 つは VioOne サンプル コレクション デバイスの 3 つのロットのそれぞれです。

   VioOne Sample Collection Device の各ロットから得られた結果のサンプル/バッファー マトリックスがプールされます (プールごとに合計 3 つの個々のサンプルと合計 3 つのプール)。

   結果のプールは、2 つの因数に分割されます。 1 つのアリコートは、5 ng/mL のコチニンと 25 ng/mL のコチニンでスパイクされます。

2. テスト

   スパイクされた各サンプルは、21 か月にわたって 8 回の複製でテストされます。 テストの過程で、3 つの ELISA アッセイ ロットが使用されます。

3. データ解析

Calbiotech Cotinine ELISA アッセイと VioOne Sample Collection Device は、各時点でテストされたサンプルが 0 日目のコチニン濃度と重複する 95% 信頼区間内の結果を生成した場合、安定していると見なされます。