臓器提供者における肺 PGD バイオマーカー

原発性移植片機能障害 (PGD) は、肺移植患者の早期死亡率が高い原因です。

根拠

肺移植の進化は、虚血再灌流関連現象によって引き起こされる急性呼吸窮迫症候群の一種である原発性移植片機能障害 (PGD) によって複雑になる可能性があります。 PGD​​ は症例の 15 ～ 50% で発生し、死亡率、補助換気の期間、および集中治療室での滞在期間が大幅に増加する原因となります。 それはまた、移植片の生存を大幅に減少させる閉塞性細気管支炎症候群（BOS）の急性および長期拒絶の中期的発症の重要な危険因子でもあります。

クララ細胞の分泌タンパク質 (16-kd クララ細胞タンパク質-CC16) および界面活性タンパク質 -A (SP-A)、-B (SP-B)、および -D (SP-D) を含む界面活性タンパク質は、細胞のマーカーとして認識されます。肺胞毛細管バリアの透過性。

これらの発見に基づいて、CC16、SP-A、-B、および D の遺伝子発現は、肺移植後に原発性移植片機能障害を発症している患者のドナーで行われた肺生検では、肺移植を受けていない患者のドナーで行われたものと比較して変化していると仮定します。この症候群。

したがって、この研究は、移植前の肺の質の客観的評価の補完的な手段となる可能性があります。

目的と目的

1. 臓器提供者において、臓器回復中の循環血液および肺組織におけるクララ細胞タンパク質 (CC16)、サーファクタント関連タンパク質 (A、B、または D)、炎症誘発性および抗炎症性サイトカインの発現の変化について説明します。
2. 冷虚血期間後の生物学的および構造的変化を説明してください。
3. 臓器提供者のバイオマーカーと、肺移植患者の急性移植片機能不全の発生との相関関係を確立します。

材料と製法

包含基準

私たちのネットワークに紹介されたすべての肺臓器ドナー患者とそのレシピエントは、インフォームドコンセントを得た後に含まれます。

データ収集

ドナーでは、人口統計データ（年齢、性別）、病歴、死因、血液ガス測定、胸部X線プロトコル、血液生物学的パラメータ、適切な場合は脳死の期間、適切な場合は熱虚血時間、およびプロトコル細菌学的分析。

レシピエントでは、人口統計学的データ（年齢、性別）、移植の適応、移植前に行われた適切なカテーテル挿入の結果、標準的な術中データ、免疫抑制、血液ガス、胸部X線プロトコル、充填バランス、血液生物学的検査を記録します。 24、48、および 72h のパラメーター。 クランプ解除時間が記録されます。

患者は生涯にわたって自動的にフォローアップされます。 急性拒絶反応の可能性を検出するために、最初の年に反復生検が行われます。 データは私たちの研究に含まれます。

生体サンプル

ドナーでは、保存液の灌流前に、18 cc の末梢血を採取します (乾燥チューブ、9 cc)。 １本のチューブは－８０℃で保存し、もう１本は遠心分離（１５分間、１００００／分、２０℃）した後、血清を－８０℃で保存する。

肺が回復した直後に、下葉で肺生検 (6 cm2) が行われます。

フラグメントを直ちに液体窒素に入れ、-80 ° C で保存します。2 番目のフラグメントをホルマリンで 24 時間保存した後、パラフィン ブロックに保存します。

移植前、保存期間の終わりに、新しい肺生検が下葉で行われます。

生物学的分析

組織学的検査とグラデーション

ホルマリンで固定した肺組織をヘマトキシリン・エオジンで染色し、肺病変 [(1) 好中球浸潤、(2) 気道上皮細胞損傷、(3) 間質性浮腫、(4) ヒアリン膜、(5) 出血] を段階的に分類します。

炎症、アポトーシス、サーファクタントタンパク質

O 組織 mRNA 測定: リアルタイム定量 PCR (RTQ-PCR)

O 組織ペプチド測定: ウエスタンブロット - ELISA - MILLIPLEX

O 血液サンプルの処理と分析: ELISA - MILLIPLEX

タンパク質炎症性サイトカイン (TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1、IL33) (IL-10)、細胞間接着分子 (ICAM-1、VCAM-1)、アポトーシス (Bax、Bcl2、カスパーゼ)

アポトーシスの評価：TUNEL - 免疫組織化学