健康なボランティアにおけるビタミン K 補給研究 (目的 2B)

研究者らは、定義された CYP4F2*3 遺伝子型を持つグループの肝臓ビタミン K 濃度の 2 つのバイオマーカーに対するビタミン K 補給の効果を研究します。 具体的には、研究者は、10 日間のビタミン投与後の長期 (血漿因子 II プロテオフォーム) および短期 (尿中 K-酸カタボライト) 肝臓ビタミン K 濃度と CYP4F2*3 の新規バイオマーカー間の関連性をテストします。健康なボランティアにおけるK補給。

調査員は、UWMC に掲示される広告によって、男性および女性の健康なボランティアを募集します。 2段階の選択プロセスが採用されます。 被験者はチラシに応じて自己選択し、研究コーディネーターに連絡します。 研究コーディネーターは、電話で適格性を審査し、適格な場合は、最初の研究訪問の予約をします。 第 1 段階では、研究コーディネーターが 200 人程度の適格な候補者から口腔スワブの DNA を採取します。 DNA は、CYP4F2*3 バリアント対立遺伝子の有無についてテストされます。 PI と研究コーディネーターは、ジェノタイピングの結果を確認し、ホモ接合型 CYP4F2*3 遺伝子型またはヘテロ接合型 CYP4F2*1/*3 遺伝子型のいずれかを持つ 14 人の個人、およびホモ接合型 CYP4F2*1 遺伝子型を持つ 14 人の人口統計学的に一致したグループを選択します。研究の補充段階の診断遺伝子座。 その後、研究コーディネーターは、これらの対象者に電話でフェーズ II への参加について連絡します。

手順 - フェーズ I、DNA 分離のための口腔スワブ コレクション。

人口統計学的アンケート: 自己報告された遺産、年齢、および性別は、簡単な人口学的アンケートを通じて収集されます。

口腔スワブ: 頬細胞を綿棒で採取し、DNA を分離して、CYP4F2*1 および CYP4F2*3 アレルをテストします。

ジェノタイピング: CYP4F2 遺伝子型は、検証済みの TaqMan アッセイ (ABI/ThermoFisher Scientific) によって決定され、市販の DNA ハイブリダイゼーション プローブを使用して CYP4F2*3 対立遺伝子の有無をテストします。 CYP4F2*3 遺伝子型がホモ接合型または CYP4F2*1/*3 遺伝子型がヘテロ接合型であり、CYP4F2*3 対立遺伝子である被験者は、フェーズ II の対象となります。

手順 - フェーズ II、ビタミン K 補給。

ビタミン K 補給: CYP4F2 遺伝子型に基づいて補給研究のために選ばれた研究参加者は、1 mg/日のフィロキノン (Vitacost; Natures Life K-1 Phylloquinone) を 10 日間連続して与えられます。 各用量は、吸収を促進するために 2% 牛乳 0.5 パイントと一緒に朝 (午前 8 時まで) に服用されます。

サンプル収集: 補充研究では、静脈血サンプル (10 mL EDTA チューブ) とスポット尿サンプルを、d1 から d5 までの一晩の絶食後、および d8 と d10 にビタミン K を 10 日間補充した後に収集します。 血漿を分離し、両方のサンプルを分析まで-70°Cで保存します。 出産の可能性のある女性は、d1の尿妊娠検査を受け、陽性の場合は研究から除外され、すべてのサンプルとデータが破棄されます。

血漿第II因子プロテオフォームの測定：第II因子の11個の個々のプロテオフォームの血漿濃度をLC-MS/MSによって測定する。 このデータは、長期的なビタミン K の状態、unFII、ucFII:iFII、inFII:aFII の 3 つの指標を計算するために使用されます。 これらは、第II因子低カルボキシル化の程度の異なる数学的尺度を表しています。 血漿ビタミン K1、PIVKA II、および ucOC の前向き分析は計画されていませんが、そのデータが必要になった場合に備えて保管されます。

尿中の K-Acid I および II の測定: スポット尿サンプル中の K-Acid I および II、およびクレアチニン (Cr) の定量化は、研究者が最近開発した検証済みの LC-MS/MS アッセイを使用して実行されます。 合計および個々の尿中 K-Acid/Cr 比が計算されます。

統計分析計画: 研究者は対応のない t 検定を実施して、2 つの CYP4F2 遺伝子型グループにおけるビタミン K 補給に対する平均反応を比較します。 応答は、10 日間の介入期間の、ベースラインに対して補正された、ビタミン K ステータス値 x 時間曲線の下の領域として定義されます。 2 番目の指標は、ビタミン K ステータス比の絶対ピーク変化です。 短期 (尿中 K-Acid/Cr 比) および長期 (ucFII:iFII および inFII:aFII) バイオマーカーの両方が別々にテストされます。 パイロット データに基づくと、各遺伝子型グループのサンプル サイズが 14 の場合、補給に対する反応に 2 倍の差がある場合、有意水準 0.05 で有意な効果を検出する検出力が少なくとも 80% になります。