L-PRFプラス非外科的歯周治療

材料と方法 研究のデザインと患者の選択 13 人の患者 (男性 8 人、女性 5 人、平均年齢 52.3 ± 9.4 歳) を登録するスプリットマウス無作為対照臨床試験が設定されました。 患者は研究の利点とリスクについて知らされ、各参加者はインフォームド コンセントに署名しました。

非外科的歯周治療 1 人の歯周病専門医 (L.C.) がすべての歯周治療を行いました。 NSPT は、超音波と手動器具を使用した局所麻酔下で、48 時間以内にスケーリングとルート プレーニング (SRP) の 2 つのセッションで構成されました。 さらに、テスト グループに割り当てられた象限の PPD ≧ 6 mm に関連する部位は、L-PRF 浸出液で洗浄され、L-PRF 膜の縦方向の部分で満たされました。 患者は、L-PRF の除去を避けるために、柔らかい食事、0.12% クロルヘキシジンによる慎重かつ柔らかい口内洗浄、および 7 日間の歯磨き禁止についての指示を受けました。 この期間の後、次の指示が与えられました: 変更されたバス ブラッシング テクニック、デンタル フロス、および歯間ブラシ、さらに 7 日間のクロルヘキシジン 0.12% 洗口液。 また、診療ごとに医師による徹底した衛生管理を行っております。

L-PRF 膜の調製 静脈血の 2 つのサンプルを、抗凝固剤を含まない 10 ml の 2 つのバキュテナーチューブ (赤いカップ) に採取しました。 Temmerman et al.18 によって記述されたプロトコルに従って、卓上遠心分離機 (IntraSpinTM、Intralock®、フロリダ州、米国) を使用して、408 g で 12 分間遠心分離しました。 L-PRFクロットをチューブから取り出し、赤血球から分離し、Xpressionボックス（IntraSpinTM、Intralock®、フロリダ州、米国）に入れて膜に静かに圧縮しました。 歯周ポケットを6mm以上満たすために、メンブレンを縦方向に切り刻んだ。 L-PRF浸出液と呼ばれる圧縮中に放出された浸出液を吸引して、治療されたポケットをすすぎました。 （図1）

臨床測定 すべての臨床測定は、基本的な検査器具キットとノースカロライナ大学 no. 15色の歯周プローブ。 次の臨床パラメーターは、ベースライン時、および治療後 6 週間、3 か月、6 か月で測定されました: プロービング ポケット深度 (PPD)、クリニカル アタッチメント レベル (CAL)、歯肉退縮 (GR)、プロービング時の出血 (BOP)、および O´リアリープラーク指数 (PI).19 さらに、24 時間、6 週間、3 か月、および治療後6ヶ月。 PPD、CAL、GR、BOP、PI、および RS の変化 (ベースライン測定値と 1、3、および 6 か月間の差) が計算されました。

GCF コレクション GCF サンプルは、ポルフィロモナ ジンジバリス (P.g)、Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a)、 Prevotella intermedia (P.i) および Fusobacterium nucleatum (F.n)。 サンプル領域はコットンロールで隔離され、適切な吸引とエアスプレーを使用して唾液による汚染が回避されました。 次に、根管治療用 #35 ペーパーポイントをわずかな抵抗が感じられるまで挿入し、30 秒間保持しました。 ペーパーポイントはすぐにエッペンドルフチューブに挿入され、将来の分析のために-80ºCで保存されました。

微生物学的処理 サンプルを解凍した後、リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) 1ml を加えてホモジナイズしました。 次に、各サンプル 400 μl を 13200 rpm で 3 分間遠心分離しました。 得られたペレットを２００μｌのＩｎｓｔａＧｅｎｅに分散させた。 製造元の指示に従って、DNAをInstaGeneマトリックス（Bio-Rad Life Science Research、Hercules、CA、USA）で抽出しました。 精製された DNA の 5 マイクロリットルは、Porphyromonas gingivalis、Aggregatibacter actinomycetemcomitans、Fusobacterium nucleatum、および Prevotella intermedia の定量に使用されました。 定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）アッセイは、細菌DNAの検出および定量化のためのTaqman 5 'ヌクレアーゼアッセイPCR法を使用して、CFX96 Real-Time System（Biorad、Hercules、CA、USA）で実行されました。 Taqman 反応には、12.5 μl の Mastermix (Eurogentec、Seraing、ベルギー)、4.5 μl の滅菌蒸留水、1 μl の種特異的プライマーとプローブの両方 (表 1)、および 5 μl のテンプレート DNA が含まれていました。 すべてのプライマー/プローブ セットのアッセイ条件は、最初に 50°C で 2 分間、続いて 95°C で 10 分間の変性ステップ、続いて 95°C で 15 秒間および 60°C で 60 秒間の 45 サイクルで構成されていました。 . 定量化は、プラスミド標準曲線に基づいていました。 6 週、3 および 6 か月の細菌濃度のデルタ (ベースライン測定値と 6 週、3 および 6 か月の差) を計算しました。

無作為化、割り当ての隠蔽、およびキャリブレーション コイントス法を使用して、患者の象限を 2 つの治療グループ (SRP + L-PRF) またはコントロール (SRP のみ) に割り当てました。

研究を開始する前に、検査者内の精度を検証するために、最初の記録と 2 番目の記録の間に 24 時間の間隔を置いて、5 人の患者の PPD、GR、および CAL のパラメーターの 2 つの記録が行われました。 第 3 大臼歯を除くすべての歯は、6 つの部位 (近頬側、中頬側、遠心頬側、近舌/口蓋、中舌/口蓋、および離舌/口蓋) で歯周プロービングによって測定されました。 ベースライン時と 24 時間後の測定値が 95% レベルで 1 mm 以内であれば、キャリブレーションが受け入れられました (2 回の測定値間の相関係数; r = 0.95)。

統計分析 0.05 の α レベルと 0.10 の β レベル (検出力 = 0.9) で 1.0 の標準偏差で 1.2 mm の PPD の平均差を検出するには、10 人の患者のサンプルサイズが必要でした。 結果にもかかわらず、研究中の脱落の可能性を予測するために、サンプルサイズ n = 16 の患者が考慮されました。

細菌数は対数変換されました。 可変患者をランダム因子として、時間と治療を2つの交差固定因子として、線形混合モデルを適用した。 喫煙とPIは共変数と見なされました。 対照は、治療間の異なる時点および各治療ごとのベースラインからの変化を計算するために設定されました。 Sidak による同時仮説検定の補正が適用されました。 通常の分位点プロットと残差値の残差ドット プロットが作成され、統計モデルの基礎となる仮定を作成できることが示されました。