サルコペニア高齢者における乳酸菌カゼイ シロタ株含有発酵乳の効果

1.被験者の登録 サルコペニアの定義は、アジア ワーキング グループ フォー サルコペニア (AWGS) のアルゴリズムに基づいています。

1. 筋肉量：Inbody S10を使用して測定し、身長で標準化し、骨格筋指数[SMI=四肢の筋肉量(kg)/身長(m2)]で示します。 低筋肉量は次のように定義されました。

   • 男性: SMI <7.0 kg/m2
   • 女性: SMI <5.4 kg/m2

2. 握力：電子ハンドグリップダイナモメーターで測定。 低握力は次のように定義されました。

   • 男性：<28kg
   • 女性: <18 kg

3. 四肢筋力：椅子立法で5回Time測定。 下肢筋力は次のように定義されました。

   • 椅子に立って5回の時間：≧12秒 サルコペニアは(1)と(2)、または(3)のいずれかで定義された

     2. 試験介入 試験飲料には、Yakult Company (台北、台湾) から提供された L. カゼイ Shirota 株 YIT9029 (LCS) で発酵させた発酵乳が含まれていました。 飲料は、0～10℃の範囲の温度で配布および保管されました。 発酵乳には、100 ml ボトルあたり 3x10^8 CFU 以上の LCS が含まれていました。

参加者は 1 日 2 本 (104 Kcal/日) を摂取します。 研究介入は、ほぼ同じ時間に 1 日 2 回行う必要があります。 すべての牛乳は毎週参加者に送られます (14 本/週)。

3. 研究評価 3-1 人体計測と体組成評価 人体計測データは、メジャーと体重計を用いて、身長、体重、ウエスト周囲、腕の筋肉周囲、ヒップ周囲、ふくらはぎ周囲を測定した。

身体組成は、生体電気インピーダンス分析 (BIA) を非侵襲的な検査機器として使用して検出されました。

3-2 BIA 被験者は靴と靴下を履かずに立っています。 腕は胴体に触れず、胴体から 15 度の角度で自然に広げます。 手の電極は、親指が THUMB、中指が MIDDLE とマークされています。 足の電極は、被験者の足首と踵の間に配置する必要があります。 両足のかかとの先と両手の指先の電極から電流を供給した。

3-3 筋力 ハンドヘルドダイナモメーターの十分に研究されたモデルを使用して標準状態で測定された握力は、下腕または脚の筋力のより複雑な測定の信頼できる代用となる可能性があります。 測定は電子ハンドグリップダイナモメーターを使用しています。 低い握力は、男性で定義されています: <28 kg;女性：18kg未満。 椅子に立って 5 回の時間で測定された四肢の強さ。 被験者は座ったり立ったりを 5 回繰り返し、タイマーで時間を計算した。 下肢の筋力は、椅子に立って 5 回の時間：≧12 秒の時間で定義されます。

3-4 身体能力 身体能力は、通常の 6 メートルの歩行速度、TUG、および SPPB を使用して評価されました。

3-5 歩行速度 参加者は、立ち始めから通常の快適なペースで歩くか、参加者がマークされた経路の終わりに到達するまでできるだけ速く歩くように指示されました。 訓練を受けた試験官が参加者の後ろを歩き、歩行コースの終わりに参加者の足が床に触れたときに計時を止めました。 参加者には、テスト セッション中、必要に応じて休憩が提供されました。 低 物理的性能は 1 m/s 未満と定義されています。

3-6 TUG 参加者は椅子から立ち上がり、3 メートル前に歩き、椅子に座るように指示されました。 低物理的パフォーマンスは≧20sと定義されています。

3-7 SPPB 参加者は、テストを行うために SPPB に参加しました。 低身体能力は≦9スコアと定義される。

3-8 総菌数、腸内細菌叢組成、微生物叢由来代謝物分析

3-8-1 16S V1-V2 シーケンス CTAB/SDS 法を使用して糞便サンプルから全ゲノム DNA を抽出しました。 16S rRNA 遺伝子の V1-V2 領域をピロシーケンシング分析用に選択しました。

3-8-2 16S rRNA 遺伝子配列解析 16S rRNA 遺伝子配列データは、デフォルトのパラメーターを使用して QIIME v 1.8.0 で処理されました。 シーケンスは、97% の類似性で運用分類単位 (OTU) にクラスター化され、uclust コンセンサス分類分類子を使用して Greengenes 分類が割り当てられました。

3-8-3 糞便中の短鎖脂肪酸 糞便サンプルを脱イオン水で希釈し、ホモジナイズしました。 短鎖脂肪酸 (SCFA) 分析では、上清を使用しました。 アドルノらの方法を用いてジエチルエーテル抽出を行った。

3-8-4 IPA および TMAO の測定 調査員は、LC-MS/MS (4000 QTRAP、City、State、USA) を使用して IPA の血清および糞便レベルを分析しました。

血漿 TMAO 濃度は、安定同位体 (DLM4779-1、アンドーバー、マサチューセッツ州、米国) 希釈液体クロマトグラフィータンデム質量分析法によって検出されました (Ke et al., 2018)。

3-8-5 qPCRによる総菌数 総菌数は島らの方法に準じてqPCR解析により求めた。 (Beneficial Microbes, 2019) フォワード プライマー (UniF: GTGSTGCAYGGYYGTCGTCA) とリバース プライマー (UniR: ACGTCRTCCMCNCCTTCCTC) セットを使用します。 フェカリバクテリウム・プラウスニッツィーATCC27768Tを標準菌株として使用した。

3-9 血液生化学分析

3-9-1 採血 被験者から試験前および試験後に採血を行った。 血液サンプルは、抗凝固剤 EDTA とヘパリンを含むコレクション チューブに入れられました。

3-9-2 代謝パラメータ すべての代謝測定は、介入開始の 1 日前と介入終了時に実施されました。 CBC、TSH、遊離T4、Vit-D、総コレステロール、HDL-コレステロール、LDL-コレステロール、トリグリセリド、空腹時血糖、空腹時インスリン、血中尿素、窒素、血漿プレアルブミン、アルブミン、ALT、AST、HbA1c、HS-CRP、オステオカルシン、アディポネクチン、レプチン、セロトニン、およびクレアチニンは、少なくとも 8 時間の絶食後に測定されました。

3-9-3 血漿アミノ酸分析 治験責任医師は、日立 L-8900 アミノ酸分析装置 (場所) を使用して、アラニン、フェニルアラニン、システイン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシンを検出および定量しました。 、リジン、プロリン、アルギニン、セリン、スレオニン、バリン、トリプトファン、チロシン、血漿サンプル中のメチオニン。

3-9-4 炎症性サイトカイン分析 炎症関連の血清サイトカインである TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-17、および IL-10 を比色キット (Elabscience、中国) を使用して分析しました。 手順はキットの指示に従い、ELISA リーダー (Bio Tek、PowerWave XS2、City、State、USA) を使用して測定しました。

3-9-5 抗酸化マーカー分析 スーパーオキシドジスムターゼ (SOD) (Elabscience、中国)、グルタチオンペルオキシダーゼ (GPx) (biovision、City、State、USA)、カタラーゼ (CAT) など、人体の多くの抗酸化酵素) (バイオビジョン、市、州、米国)。 血清中の酵素活性はELISAキットで評価した。 手順はキットの説明書に従い、ELISA リーダー (Bio Tek、PowerWave XS2、City、State、USA) で測定しました。

3-9-6 微量元素 各全血サンプル約 1 mL を 3 mL の 65 % 硝酸 (Ultrapure Reagent、J.T. Baker) でマイクロ波消化しました。 続いて、調査員はマイクロ波チューブ内の残留物を 2 % 硝酸で洗浄し、消化液を 0.22 μm フィルターでろ過しました。 ろ過された全溶液は、15 mL 遠心管に保存されました。 Pb、Cd、As、Hg、Mn、Al、Tl、V、Na、K、Mg、Ca、Fe、Zn、Se のレベルは、誘導結合プラズマ質量分析 (ICP-MS; Agilent 7800) を使用して測定しました。

3-9-7 免疫機能解析 骨格筋に浸潤する T 細胞の中で、制御性 T 細胞 (Treg) は主要なサブセットです。 Treg は筋肉の炎症を調節し、筋肉の再生を促進します。しかし、炎症の異化効果は、老化した筋肉の機能不全のTregによって促進されました.[EbioMedicine. 2019 年 11 月;49:381-388.] 血液細胞をモノクローナル抗体 (抗 CD4、-CD25、および -FoxP3) で染色し、フローサイトメトリーで分析しました。