胎児篩骨上皮内の嗅細胞の検索 (COEF)

この研究プロジェクトは、胎児の器官形成期の初めの嗅裂と同様に、外側篩骨塊の粘膜内に嗅上皮が存在し、外側篩骨塊の妊娠初期の終わりまでに徐々に消失するという仮説に基づいています。形成されるにつれて。

この研究は、この胎児嗅上皮を同定し、胎児年齢の進行に伴う篩骨粘膜内でのその分布の変化を評価することを目的として、記述的であることを目的としています。

この研究を実施するために選択された方法は、胎児篩骨（サンプルサイズに応じて全身または頭側の四肢のみ）の標準的な光学顕微鏡を使用して、その構造を保存する組織学的分析に依存しています。 顕微鏡分析を免疫組織化学または免疫蛍光技術と組み合わせて、対象の細胞である一次嗅覚ニューロンの特徴を明らかにします。

サンプル収集は前向きに行われ、18～24か月にわたる研究期間にわたって胎児の募集が行われます。 予想される最小サンプルサイズは 20 ケースです。 中間分析は、サンプルが提供されない場合、または一次および二次目的を達成するのに十分な数のサンプルがある場合に計画されます。

サンプルは、医学的または外科的人工中絶処置により得られた胎児生成物であり、在胎週数は最低 7 週無月経、最長 14 週 + 6 日です。

サンプルの募集は、ナンシー大学病院産科のオルソジェニーサービス内で、既存のサービスプロトコル（医学的または外科的中絶）に統合され、明確で公平な情報を提供し、研究者が患者から書面によるインフォームドコンセントを取得した後に行われる予定です。 関連する医療チームには進行中の研究について通知されます。 患者の治療プロセスや実施されている医療処置の中断を避けるために、研究が患者ケアに与える影響は可能な限り最小限に抑える必要があります。 治療プロトコルは、このプロトコルによって、または必要に応じて現場の研究者によって変更または妨害されるべきではありません。

フランス国家保健局 (HAS) が提供し、フランス国立産婦人科産科大学 (CNGOF) によって検証されたグッドプラクティス推奨事項の 2021 年最新版によると、すべての中絶処置には、中絶後 5 日以内に行われる事前の医療相談が含まれています。女性のリクエスト。 この相談は手術の数日前に行われ、手術そのものに関する情報を患者に提供し、手術を成功させるために必要な臨床的および準臨床的な医学的前提条件に対処することを目的としています。 この間、医療処置の適切な実施を尊重するための研究者による介入はなく、重要な情報提供期間が必要であり、この間は干渉を避けることが望ましい。

実施された研究に関する患者への情報提供と書面による同意の取得は、患者が産婦人科外来に入院する際に行われる予定です。 この段階は、医療チームおよび救急医療チームによる入院後の簡単な口頭面接の形で行われ、調査員の責任です。 これは、法的施設の指令に準拠した紙文書に文書化されており、2 部作成され、1 部は DRCI (臨床研究イノベーション部門) の研究者が保管し、2 部は患者が保管します。

最終月経の日付は、面接後に調査員によって記録されます。 これは、入院患者から収集される唯一の個人データまたは医療データです。 Orthogeny Service の医師によって確立された医療プロトコルに従って手順 (医学的または外科的) が完了すると、排出物または吸引物が収集され、新鮮なうちに密封された生体病理学的収集容器に直ちに置かれます。

各サンプルには、包含番号 COEF#N° と、最終月経の日付から計算された在胎週数 (週数) がマークされています。 これらのデータは、病院施設内の安全なコンピューター上の Excel® スプレッドシートに体系的にインデックス付けされます。 サンプルは研究者によって直ちにナンシー大学病院産科の胎児病理学研究室に運ばれ、-80℃で急速冷凍されます。 双眼顕微鏡による製品の予備検査は、対象となる胎児の物質（無傷の顔面質量を含む、全身、完全または断片化した頭側四肢）を分離するために実行されます。

各サンプルのコンディショニングは標準化される予定です。 10 件の症例を募集した後、凍結サンプルに特定の Cryocut® ミクロトームを使用した凍結切片手順が適用されます。 このステップにより、厚さ約 5 マイクロメートルの連続切片を作成し、スライドガラスにマウントできます。 標準的な HES 染色による最初の即時検査段階により、篩骨ブロックを正確に特定し、続いて一連の冠状切片を作成することができます。 発生のこの段階では、骨格構造は骨化しておらず、脱灰段階を回避しています。 作成された各スライドには、コンピューターによって割り当てられ、研究室で使用されている組織学的分析ソフトウェアである Ariane SX® によって自動的に付与される「研究番号」が付けられます。 これらの数値は、サンプル データ (COEF#N° および在胎週数) に関連して電子的にインデックス付けされます。

このようにして作成された一連のスライドは、免疫組織化学または免疫蛍光技術で処理されます。

計画されている免疫組織学的マーカーには、シナプトフィジン (SP)、神経特異的エノラーゼ (NSE)、神経細胞接着分子 (NCAM)、希突起膠細胞転写因子 (OLIG2) が含まれます。 これらのマーカーは、成熟および未熟な一次嗅覚ニューロンを識別するために文献で参照されている既知のモノクローナル抗体です。

スライドにラベルを付けた後、スライドを写真スキャナーに通し、各サンプルで得られたすべての画像を含むデジタル ファイルを生成します。 各ファイルには、各サンプルのインデックス番号 (COEF#N°) に従ってタイトルが付けられます。 記録された画像ファイルには、対応するスライド「研究」番号が付けられます。

この研究の純粋に記述的な性質を考慮して、記述統計が計画されています。

分析後、各シリーズのスライドは研究者の責任の下、胎児病理学研究室で 4°C で物理的に保管されます。 研究の終わりに、これらのスライドはロレーヌ生物資源センターの専用コレクション内に保存するためにグループ化されます。