歯肉溝液インターロイキン-21レベルに対する非外科的歯周治療の効果

序章

歯周病は、歯を支える組織に影響を与える多菌性疾患です。 歯周病の不可欠な部分には、宿主の免疫炎症反応に対する細菌攻撃の刺激から生じる歯周組織の破壊が含まれます。 慢性歯周炎は、成人人口における歯周病の最も一般的な形態です。 細菌性プラークのバイオフィルムは歯周炎の原始的な要因ですが、歯周組織の破壊の大部分は、最終的に一連の免疫炎症反応に起因します。 細胞の活性化の結果として、サイトカイン、ケモカインなどを含む炎症性メディエーターは、集合的に組織破壊と骨吸収に寄与します。 サイトカインは、その発現パターンと標的細胞または組織への影響に基づいて、Th1、Th2、Th17、および制御性 T (Treg) としてグループ化できます.5 古典的に、歯周病は Th1/Th2 経路によって説明されてきました。 Th1細胞は歯周病変の初期段階でより頻繁に検出され、Th1細胞が細菌感染に対する保護反応に関連しているのに対し、Th2細胞は疾患の後期および進行期に優勢であり、歯周の破壊と進行に役割を果たしていることを示唆しています病変。 病原性細菌に対する宿主応答の別のタイプは、IL-23/IL-17 経路によって説明されています。 この代替経路は、炎症反応の開始と維持において極めて重要な役割を果たす IL-12 ではなく、細菌が IL-23/17 の合成を誘導する場合に発生します。 IL-23/17 経路は、古典的な Th1/Th2 経路と比較して、非常に微調整された細胞性免疫応答であり、免疫応答の先天的および適応的な腕を橋渡しする多数の機能を持っています.9 Th17 サイトカイン (IL-17、IL-21、IL-22、IL-6、腫瘍壊死因子 {TNF}-a など)8 は歯周病に関与していますが、それらの優勢な役割が宿主保護であるのか破壊であるのかは疑問です. これらのサイトカインは、歯周炎のさまざまな炎症状態で解明されていません。

IL-21 は I 型サイトカインであり、構造的には IL-2、IL-4、および IL-15 タンパク質と類似しているように見えます。 IL-21 は主に活性化された T 細胞によって構成されますが、免疫系の膨大なスペクトルの骨髄細胞およびリンパ細胞に指示を与え、IL-21 が獲得免疫および自然免疫を調節するのを促進します.10 IL-21 は、腫瘍細胞 11 および慢性的なウイルス感染に対する免疫で競合しますが 12、IL-21 の多大な成果は、さまざまな臓器における免疫炎症性疾患の進行と相関しています.13 IL-21 は、全身性エリテマトーデス、乾癬、アトピー性皮膚炎の患者の皮膚生検 14 などの皮膚疾患で上昇します。 さらに、IL-21 の解釈は、関節リウマチ患者の滑液および末梢血における Th17 細胞の存在に対応しています。

炎症におけるIL-21の役割は広く研究されています。歯周病におけるそのレベルの治療面は、さらに調査する必要があります。 したがって、上記の調査結果に照らして、研究者は、非外科的歯周治療の前後の慢性歯肉炎、慢性歯周炎、および対照患者の GCF 中のインターロイキン-21 (IL-21) のレベルを、歯周組織破壊の臨床パラメーター。

材料と方法：

忍耐：

34 人の患者 (男性 19 人、女性 15 人、年齢 20 ～ 60 歳) が、6 か月間 (2014 年 4 月から 2014 年 9 月) にわたって、クリシュナデヴァラヤ歯科科学大学、バンガロール、およびカルナータカ州の外来歯周科から連続して登録されました。 研究のための倫理的クリアランスは、施設の倫理委員会 (02-D012-36773) から得られました。 この研究は、2008 年ヘルシンキ宣言に記載されている倫理原則に従って実施されました。 研究の手順が説明され、研究に参加する前に、すべての参加者から書面によるインフォームドコンセントが得られました。 このうち、歯周病患者２４人を慢性歯肉炎患者１２人と慢性歯周炎患者１２人に分類し、健常者１０人を対照とした。 包含基準は次のとおりでした：14本以上の機能的な歯を有する患者、全身的に健康な患者で、いかなる形態の外科的および非外科的歯周療法も受けていないか、研究の過去6か月以内に抗生物質または非ステロイド性抗炎症療法を受けていない患者. 慢性歯肉炎は、プロービング深度 (PD) が 4mm 以下で、歯肉出血が存在する部位 (BOP) が 25% 以上あるものと定義されました。 慢性歯周炎は、プロービング深度が 5mm 以上、RAL が 8mm 以上、BOP 陽性の部位が 10% 以上あり、X 線写真で骨量減少の証拠があると定義されました。 PDまたはALの増加がないことによって決定された歯周病の証拠がなく、志願した患者は、健康な対照群と見なされました。

臨床測定:

第 3 大臼歯を除くすべての歯について、各歯の 6 つの部位すべて (近頬側、遠心頬側、離舌側、中央舌側、および中舌側) の臨床パラメーターを測定および評価しました。 これらのパラメーターは、ポケットの深さ (PD)、歯肉出血の評価、すなわち歯肉指数 (GI)、歯肉縁上のプラーク蓄積の二値測定、すなわちプラーク指数 (PI)、およびプロービング時の出血 (BOP) で構成されていました。 1 人の校正された検査官 (MN) が、すべての患者の評価と測定を行いました。

GCF サンプルの収集と分析:

3つのグループすべてで、ベースライン時と治療後6週間でGCFサンプルが収集されました。 サイトの選択は、口腔内の単一のサイトで記録された最高スコアに基づいていました。 最悪の炎症症状 (慢性歯肉炎) と最高の RAL レベル (慢性歯周炎) を示した各被験者の 1 つの部位を、歯肉溝液収集用に選択しました。 私たちの研究では、歯周炎は部位特異的な疾患であるため、複数の部位からのサンプルのプールを避けるために、各被験者の単一の部位を選択しました。 GCF サンプルの収集前に、辺縁の歯肉との接触を避けて歯肉縁上のプラークを綿ペレットで除去しました。 GCFを収集するために、溝/ポケットに標準的な紙片を約2mmの深さまで30秒間慎重に挿入しました。 血液で汚染されたストリップは廃棄され、別の部位を使用して交換用サンプルが採取されました。 慢性歯肉炎患者では、次に高いGIスコアで代替サンプルが収集され、慢性歯周炎患者では、次に深いプロービングポケット深さ{PPD}が代替サンプル部位に選択されました。 キャリブレーションされた器具を使用してGCFサンプル量を定量化し、測定値を標準曲線を参照して実際の容量（μL）に変換しました。これは、ペリオコールストリップ内の蒸留水の容量（μL）のペリオトロン測定値を使用して作成されました。 空白の歯肉液収集（ペリオコル）ストリップをペリオトロン液メタセンサーの間に配置し、測定値がゼロになるように機器を調整しました。 マイクロリットルシリンジを使用して、0.25 ～ 1.25 μL の流体 (蒸留水) を perio-col ストリップに正確に送達しました。 ストリップはすぐにペリオトロンセンサーの間に置かれました。 ペリオトロン スコア ボリュームは、記録された液体の既知のボリュームを表示しました。 このステップを、0.25 μL の試験液でさらに 3 回繰り返し、平均スコアを記録しました。 ０．５、０．７５、１．０、１．２５μＬの容量を使用して上記のステップを繰り返し、すべての場合において、平均ペリオトロン値を計算して記録した。 すべてのスコアが得られたら、既知の流体量 (X 軸) とペリオトロン スコア (Y 軸) を使用して標準曲線を計算しました。 同様の方法で、研究患者からの GCF ボリューム (健康、慢性歯肉炎、慢性歯周炎から) は、ペリオトロン スコアで自動的に取得されました。 標準キャリブレーション グラフからの補間により、液体の体積が得られました。 体積を測定した後、選択した部位からのストリップを、200 μL のリン酸緩衝液を含む個々のマイクロ遠心チューブに直ちに入れました。 サンプルは、さらなる分析まで-80°Cで保存されました。

ELISA

ＧＣＦ中のＩＬ－２１のレベルは、製造者の指示に従ってＥＬＩＳＡを使用して決定された。 タンパク質を溶出するために、ペリオペーパーストリップを含むチューブを30秒間ボルテックスしてホモジナイズし、4℃で5分間、12,500 rpmで遠心分離しました。 このキットは、モノクローナル抗体 MT 21.3 ビオチンおよびヒト組換え IL-21 標準 (捕捉抗体) を使用しました。 ELISA の感度を確認するためにサンプルを 3 回実行し、すべてのサンプルが ELISA の検出限界内にあることがわかりました。 基本波長として 450 nm の ELISA リーダー (spectramax 190 Ab sorbance マイクロプレート リーダー; 分子デバイス; Sunnyvale, CA, USA) を使用して、基質の吸光度を測定しました。 得られた吸光度の読み取り値の一定容量 (pg/mL) への変換は、標準参照曲線を使用して実行されました。 各部位のタンパク質濃度 (pg/mL) は、IL-21 の総量 (pg) を歯肉溝液量 (μL) で割ることによって決定され、続いて (pg/μL) 値が (pg/mL) に変換されました。 .

歯周治療プロトコル:

ベースラインでは、すべての患者の臨床パラメーターと GCF サンプルの収集が行われました。 すべての患者は、徹底的な口腔衛生指導、歯肉縁上および歯肉縁下のスケーリングとルートプレーニングを受けました。 グループ III の非外科的歯周治療は 2 ～ 3 回の予約で行われました。 1 人の校正済み検査官 (MN) がすべての研究患者に治療を提供しました。

統計分析：

GCF IL-21レベルの変化に基づいて、調査力およびサンプルサイズの計算を決定した。 各試験グループに 12 人の患者、対照グループに 10 人の患者を含むパイロット研究としての現在の推定値は、合計サンプル サイズが 34 人の患者です。 タイプ II エラーレベル β = 0.20 (80% 電力) およびタイプ I エラーレベル α=0.05 (5% 確率) が計算されました。 術前および術後のPI、GI、BOP、PD、RALおよびIL-21レベルのそれぞれの値を有するサンプルの分布を統計的に分析した。 データは Microsoft Excel に入力され、SPSS {社会科学用統計パッケージ}、ver.10.05) パッケージを使用して分析されました。 カイ二乗検定 (χ2) 有意検定を使用して比率を比較しました。 データの正規性は、Shapiro-Wilk テストを使用してテストされました。 スチューデント t 検定を実行して、治療前後の差の値を決定しました。 一元配置分散分析 (ANOVA) を使用して、グループ間の違いをテストしました。 生化学的パラメータと臨床パラメータの比較は、クラスカル・ウォリスのノンパラメトリック検定を使用して実行されました。 P <0.05は統計的に有意と見なされました。