비수술적 치주치료가 치은열구액 Interleukin-21 수치에 미치는 영향

소개

치주질환은 치아를 지지하는 조직에 영향을 미치는 복합 미생물 질환입니다. 치주 질환의 필수적인 부분은 숙주 면역-염증 반응에 대한 박테리아 도전의 자극으로 인한 치주 조직의 파괴를 포함합니다. 만성 치주염은 성인 인구에서 치주 질환의 가장 흔한 형태입니다. 박테리아 플라크 생물막은 치주염의 기본 요인이지만 치주 조직 파괴의 대부분은 결국 일련의 면역 염증 반응에서 비롯됩니다. 세포 활성화의 결과, 사이토카인, 케모카인 등의 염증 매개체가 조직 파괴 및 골 흡수에 총체적으로 기여합니다. 사이토카인은 발현 패턴과 표적 세포 또는 조직에 미치는 영향에 따라 Th1, Th2, Th17 및 T 조절(Treg)로 분류할 수 있습니다.5 고전적으로 치주 질환은 Th1/Th2 경로로 설명되었습니다. Th1 세포는 치주 병변의 초기 단계에서 더 자주 검출되는데 이는 Th1 세포가 박테리아 감염에 대한 보호 반응과 관련이 있는 반면 Th2 세포는 질병의 후기 및 진행기에 우세하여 치주 조직의 파괴 및 진행에 역할을 함을 시사합니다. 병변. 병원성 박테리아에 대한 대체 유형의 숙주 반응은 IL-23/IL-17 경로에 의해 설명되었습니다. 이 대체 경로는 박테리아가 염증 반응의 시작 및 유지에 중추적인 역할을 하는 IL-12가 아닌 IL-23/17의 합성을 유도할 때 발생합니다. 고전적인 Th1/Th2 경로와 비교하여 IL-23/17 경로는 면역 반응의 타고난 부분과 적응 부분을 연결하는 다양한 기능을 가진 훨씬 미세 조정된 세포 면역 반응입니다.9 Th17 사이토카인(IL-17, IL-21, IL-22, IL-6, 종양괴사인자(TNF}-a 등)8)8은 치주질환에 관여하지만 그 주된 역할이 숙주를 보호하는 것인지 파괴적인 것인지는 의문이다. . 이러한 사이토카인은 치주염에서 다른 염증 상태에서 밝혀지지 않았습니다.

IL-21은 I형 사이토카인이며 구조적으로 IL-2, IL-4 및 IL-15 단백질과 유사합니다. IL-21은 주로 활성화된 T 세포로 구성되지만 IL-21이 후천 면역과 선천 면역을 조절하는 것을 촉진하는 면역 체계의 광범위한 골수 및 림프 세포를 지시합니다.10 IL-21은 종양 세포11 및 만성 바이러스 감염12에 대한 면역에서 경쟁하지만 IL-21의 엄청난 성취는 다양한 기관에서 면역 염증성 질환의 진행과 관련이 있습니다.13 IL-21은 전신성 홍반성 루푸스, 건선 및 아토피성 피부염 환자의 피부 생검14과 같은 피부 상태에서 증가합니다. 또한, IL-21 해석은 류마티스 관절염 환자의 활액 및 말초 혈액에 Th17 세포가 존재하는 것과 일치합니다.

염증에서 IL-21의 역할은 광범위하게 연구되었습니다. 치주 질환의 수준에 대한 치료 측면은 더 탐구할 필요가 있습니다. 따라서 위의 결과에 비추어 연구자들은 만성 치은염, 만성 치주염 및 비수술 치주 치료 전후의 대조군 환자에서 GCF의 인터루킨-21(IL-21) 수준을 결정하고 치주 조직 파괴의 임상 매개변수.

재료 및 방법:

환자:

Krishnadevaraya College of Dental Sciences, Bangalore 및 Karnataka 외래 치주과에서 6개월 동안(2014년 4월부터 2014년 9월까지) 34명의 환자(남성 19명, 여성 15명, 20-60세)가 연속적으로 등록되었습니다. 연구에 대한 윤리적 승인은 기관 윤리 위원회(02-D012-36773)에서 획득했습니다. 이 연구는 2008년 헬싱키 선언에 기술된 윤리 원칙에 따라 수행되었습니다. 연구 절차를 설명하고 연구에 포함시키기 전에 모든 참가자로부터 사전 서면 동의를 얻었습니다. 그 중 치주질환이 있는 24명의 환자를 만성 치은염 12명과 만성 치주염 환자 12명으로 분류하고 건강한 10명을 대조군으로 포함시켰다. 포함 기준은 다음과 같습니다: 14개 이상의 기능적 치아를 가진 환자, 연구의 지난 6개월 이내에 어떤 형태의 외과적 및 비외과적 치주 치료를 받지 않았거나 항생제 또는 비스테로이드성 항염증 치료를 받은 전신적으로 건강한 환자 . 만성 치은염은 탐침 깊이(PD)가 4mm 이하이고 치은 출혈(BOP)이 있는 부위가 25% 이상인 것으로 정의되었습니다.15 만성 치주염은 탐침 깊이가 5mm 이상, RAL이 8mm 이상, BOP 양성 부위가 10% 이상이고 방사선학적으로 뼈 손실의 증거가 확인된 것으로 정의되었습니다.16 증가된 PD 또는 AL의 부재로 결정된 치주 질환의 증거가 없는 자원 봉사 환자는 건강한 대조군으로 간주되었습니다.

임상 측정:

제3대구치를 제외한 모든 치아에 대해 각 치아의 6개 부위(mesio-buccal, disto-buccal, disto-lingual, mid-lingual, mesiolingual)에서 임상변수를 측정하고 평가하였다. 이러한 매개변수는 포켓 깊이(PD), 치은 출혈의 평가, 즉 치은 지수(GI), 치은 상부 플라크 축적의 이분법적 측정, 즉 플라크 지수(PI) 및 틈새 바닥에 대한 프로빙 시 출혈(BOP)로 구성되었습니다. 보정된 검사자(MN) 한 명이 모든 환자 평가 및 측정을 수행했습니다.

GCF 샘플 수집 및 분석:

세 그룹 모두에서 GCF 샘플은 기준선과 치료 후 6주에 수집되었습니다. 부위 선택은 구강 내 단일 부위에 대해 기록된 최고 점수를 기준으로 했습니다. 최악의 염증 증상(만성 치은염)과 가장 높은 RAL 수준(만성 치주염)을 보인 각 피험자의 단일 부위를 치은 열구액 수집을 위해 선택했습니다. 우리의 연구에서는 치주염이 부위 특정 질병이기 때문에 여러 부위의 샘플을 모으는 것을 피하기 위해 각 피험자에서 단일 부위를 선택했습니다. GCF 샘플을 수집하기 전에 변연 치은과의 접촉을 피하면서 면봉으로 치은연상 플라크를 제거했습니다. GCF 수집을 위해 표준 종이 스트립을 약 2mm 깊이로 고랑/주머니에 30초 동안 조심스럽게 삽입했습니다. 혈액 오염된 스트립을 폐기하고 교체 샘플을 얻기 위해 대체 부위를 사용했습니다. 만성 치은염 환자에서 다음으로 가장 높은 GI 점수로 수집된 대체 샘플과 만성 치주염 환자에서 다음으로 가장 깊은 프로브 포켓 깊이 {PPD}가 대체 샘플 사이트로 선택되었습니다. 보정된 기기를 사용하여 GCF 샘플 부피를 정량화하고 판독값을 표준 곡선을 참조하여 실제 부피(μL)로 변환했으며, 이는 perio-col 스트립에서 증류수 부피(μL)의 페리오트론 판독값을 사용하여 준비했습니다. 블랭크 치은 유체 수집(perio-col) 스트립을 페리오트론 유체 메타 센서 사이에 배치하고 기기를 조정하여 판독값이 0이 되도록 조정했습니다. 마이크로리터 주사기를 사용하여 0.25-1.25 μL 유체(증류수)를 perio-col 스트립에 정확하게 전달했습니다. 스트립은 페리오트론 센서 사이에 즉시 배치되었습니다. 페리오트론 점수 부피는 기록된 유체의 알려진 부피를 표시했습니다. 이 단계는 0.25 μL의 시험액으로 세 번 더 반복되었고 평균 점수가 기록되었습니다. 0.5, 0.75, 1.0, 1.25 μL의 부피를 사용하여 위의 단계를 반복하고 모든 경우에 평균 페리오트론 값을 계산하고 기록했습니다. 모든 점수가 얻어지면 알려진 유체 부피(X축)와 페리오트론 점수(Y축)로 표준 곡선을 계산했습니다. 비슷한 방식으로 연구 환자의 GCF 부피(건강, 만성 치은염, 만성 치주염)를 페리오트론 점수로 자동으로 얻었습니다. 표준 보정 그래프의 보간은 유체의 부피를 나타냅니다. 부피를 측정한 후, 선택한 부위의 스트립을 200μL의 인산염 완충액이 들어 있는 개별 마이크로원심분리기 튜브에 즉시 넣었습니다. 샘플은 추가 분석까지 -80°C에서 보관되었습니다.

엘리사

GCF에서 IL-21의 수준은 제조업체의 지침에 따라 ELISA를 사용하여 결정되었습니다. 단백질을 용출하기 위해 periopaper 스트립을 포함하는 튜브를 vortexing하고 30초 동안 균질화한 다음 4°C에서 5분 동안 12,500 rpm으로 원심 분리했습니다. 키트는 단일 클론 항체 MT 21.3 비오틴과 인간 재조합 IL-21 표준(포획 항체)을 사용했습니다. 샘플은 ELISA의 민감도를 인증하기 위해 3중으로 실행되었으며 모든 샘플은 ELISA의 검출 한계 내에 있는 것으로 나타났습니다. 기본 파장이 450 nm인 ELISA 판독기(spectramax 190 Ab sorbance microplate reader; 분자 장치; Sunnyvale, CA, USA)를 사용하여 기질의 흡광도를 측정했습니다. 표준 참조 곡선을 사용하여 얻은 흡광도 판독값을 명확한 부피(pg/mL)로 변환했습니다. 각 부위의 단백질 농도(pg/mL)는 IL-21의 총량(pg)을 치은열구체적(μL)으로 나눈 다음 (pg/μL) 값을 (pg/mL)로 변환하여 결정했습니다. .

치주 치료 프로토콜:

기준선에서 모든 환자에 대한 임상 매개변수 및 GCF 샘플 수집이 완료되었습니다. 모든 환자는 철저한 구강 위생 지침, 치근 활택과 함께 전체 구강 치은연하 스케일링을 받았습니다. III군에 대한 비수술적 치주치료를 2-3회의 약속으로 시행하였다. 단일 보정 검사관(MN)이 모든 연구 환자에게 치료를 제공했습니다.

통계 분석:

GCF IL-21 수준의 변화에 ​​기초하여 연구의 검정력 및 표본 크기 계산을 결정하였다. 총 표본 크기가 34명인 각 테스트 그룹에 12명의 환자와 대조군에 10명의 환자가 포함된 파일럿 연구로서의 현재 추정치. 제2종 오류 수준 β = 0.20(80% 검정력) 및 제1종 오류 수준 α=0.05(확률 5%)를 계산했습니다. PI, GI, BOP, PD, RAL 및 IL-21 수준의 수술 전 및 수술 후 샘플 분포를 통계적으로 분석했습니다. 데이터는 마이크로소프트 엑셀에 입력하고 SPSS {statistical package for social science}, ver.10.05) 패키지를 이용하여 분석하였다. 카이 제곱 검정(χ2) 유의성 검정을 사용하여 비율을 비교했습니다. 데이터의 정규성은 Shapiro-Wilk 테스트를 사용하여 테스트되었습니다. 치료 전후 차이 값을 결정하기 위해 학생 t-테스트를 ​​수행했습니다. 일원 분산 분석(ANOVA)을 사용하여 그룹 간의 차이를 테스트했습니다. Kruskal-Wallis 비모수 검정을 사용하여 생화학적 및 임상적 매개변수의 비교를 수행했습니다. P<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.