Влияние нехирургической пародонтальной терапии на уровень интерлейкина-21 в жидкости десневой борозды

Введение

Пародонтит – это полимикробное заболевание, поражающее ткани, поддерживающие зуб. Неотъемлемой частью заболевания пародонта является разрушение тканей пародонта в результате стимуляции бактериальной провокацией иммунно-воспалительного ответа хозяина. Хронический пародонтит является наиболее распространенной формой пародонтита у взрослого населения. Биопленка бактериального налета является первичным фактором пародонтита, но в большинстве случаев разрушение тканей пародонта в конечном итоге происходит в результате последовательности иммунно-воспалительных реакций. В результате клеточной активации медиаторы воспаления, включая цитокины, хемокины и т. д., в совокупности способствуют разрушению тканей и резорбции кости. Цитокины могут быть сгруппированы как Th1, Th2, Th17 и регуляторные T (Treg) на основе их характера экспрессии и воздействия на клетки-мишени или ткани. 5 Классически заболевание пародонта объяснялось путем Th1/Th2. Клетки Th1 чаще выявляются на ранней стадии поражений пародонта, что позволяет предположить, что клетки Th1 связаны с защитным ответом против бактериальной инфекции, тогда как клетки Th2 преобладают в более позднем и далеко зашедшем периоде заболевания, играя роль в разрушении и прогрессировании заболеваний пародонта. поражения. Альтернативный тип ответа хозяина на патогенные бактерии был описан посредством пути IL-23/IL-17. Этот альтернативный путь происходит, когда бактерии индуцируют синтез IL-23/17, а не IL-12, который играет ключевую роль в инициации и поддержании воспалительной реакции. Путь IL-23/17 по сравнению с классическим путем Th1/Th2 представляет собой гораздо более точно настроенный клеточный иммунный ответ, который имеет множество функций, соединяющих врожденную и адаптивную ветви иммунного ответа.9 Цитокины Th17 (IL-17, IL-21, IL-22, IL-6, фактор некроза опухоли {TNF}-a и т. д.)8 участвуют в заболеваниях пародонта, но остается под вопросом, является ли их доминирующая роль защитной или деструктивной. . Эти цитокины не выяснены при различном воспалительном статусе при пародонтите.

IL-21 представляет собой цитокин типа I, структурно он похож на белки IL-2, IL-4 и IL-15. IL-21 в основном состоит из активированных Т-клеток, но он управляет широким спектром миелоидных и лимфоидных клеток иммунной системы, которые помогают IL-21 модулировать приобретенный и врожденный иммунитет.10 IL-21 конкурирует в иммунитете против опухолевых клеток11 и хронических вирусных инфекций,12 однако огромные достижения IL-21 коррелируют с прогрессированием иммунных воспалительных заболеваний в различных органах.13 IL-21 повышается при дерматологических состояниях, таких как биопсия кожи14 у пациентов с системной красной волчанкой, псориазом и атопическим дерматитом. Кроме того, интерпретация IL-21 соответствует наличию клеток Th17 в синовиальной жидкости и периферической крови больных ревматоидным артритом.

Роль IL-21 в воспалении широко изучалась; аспект лечения на его уровнях при заболеваниях пародонта нуждается в дальнейшем изучении. Таким образом, в свете вышеизложенного исследователи определяют уровни интерлейкина-21 (IL-21) в GCF при хроническом гингивите, хроническом пародонтите и у контрольных пациентов до и после нехирургической пародонтальной терапии наряду с корреляцией клинические параметры деструкции тканей пародонта.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ:

ПАЦИЕНТЫ:

Тридцать четыре пациента (19 мужчин и 15 женщин в возрасте 20-60 лет) были последовательно зарегистрированы в течение шестимесячного периода (с апреля 2014 г. по сентябрь 2014 г.) из амбулаторного отделения пародонтологии Колледжа стоматологических наук Кришнадеварая, Бангалор и Карнатака. Этическое разрешение на исследование было получено от институционального этического комитета (02-D012-36773). Исследование проводилось в соответствии с этическими принципами, описанными в Хельсинкской декларации 2008 г. Процедура исследования была объяснена, и от всех участников было получено информированное письменное согласие до их включения в исследование. Среди них 24 пациента с заболеванием пародонта были сгруппированы в 12 пациентов с хроническим гингивитом и 12 пациентов с хроническим пародонтитом, а 10 здоровых лиц были включены в контрольную группу. Критериями включения были: пациенты, имеющие более или равное 14 функциональным зубам, системно здоровые пациенты, которые не получали какой-либо формы хирургического и нехирургического пародонтологического лечения или получали антибиотики или нестероидную противовоспалительную терапию в течение последних 6 месяцев исследования. . Хронический гингивит определялся как глубина зондирования (PD) менее или равная 4 мм и более 25% участков с наличием кровоточивости десен (BOP)15. Хронический периодонтит был определен как глубина зондирования более или равная 5 мм, RAL более или равная 8 мм, с более чем или равным 10% участков с положительным BOP и признаками потери костной ткани, определяемыми рентгенологически.16 Пациенты, которые вызвались добровольцами без признаков заболевания пародонта, определяемого отсутствием повышенного PD или AL, считались здоровой контрольной группой.

Клинические измерения:

Клинические параметры измеряли и оценивали для всех зубов, за исключением 3-х моляров, на всех шести участках для каждого зуба (мезио-щечном, дистально-щечном, дистально-язычном, среднеязычном и мезиолингвальном). Эти параметры включали глубину кармана (PD), оценку кровоточивости десен, т. е. десневой индекс (GI), дихотомическое измерение накопления наддесневого налета, т. е. индекс зубного налета (PI), и кровоточивость при зондировании (BOP) до основания борозды. Один калиброванный исследователь (MN) выполнял все оценки и измерения пациентов.

Сбор и анализ проб ГКМ:

Во всех трех группах образцы GCF были собраны на исходном уровне и через 6 недель после лечения. Выбор места был основан на наивысшем балле, зарегистрированном для одного места в ротовой полости. Для сбора жидкости из десневой борозды было выбрано одно место у каждого субъекта, которое демонстрировало наихудшие воспалительные проявления (хронический гингивит) и самый высокий уровень RAL (хронический периодонтит). В нашем исследовании мы выбрали одно место у каждого субъекта, чтобы избежать объединения образцов из нескольких мест, поскольку пародонтит является заболеванием, специфичным для места. Перед сбором образцов GCF наддесневой налет удаляли ватными тампонами, избегая контакта с маргинальной десной. Стандартные бумажные полоски осторожно вводили на глубину примерно 2 мм в борозду/карман на 30 секунд для сбора GCF. Полоски, загрязненные кровью, выбрасывали, а для получения образцов на замену использовали другое место. У пациентов с хроническим гингивитом был взят альтернативный образец со следующими по величине показателями желудочно-кишечного тракта, а у пациентов с хроническим периодонтитом в качестве альтернативного места взятия образца была выбрана следующая по величине глубина зондирующего кармана {PPD}. Калиброванное устройство использовалось для количественного определения объема образца GCF, и показания были преобразованы в фактический объем (мкл) в соответствии со стандартной кривой, полученной с использованием периотронных показаний объема жидкости (мкл) дистиллированной воды в перио-кол полосках. Чистая полоска для сбора десневой жидкости (perio-col) была помещена между мета-датчиками периотронной жидкости, и прибор был отрегулирован так, чтобы отображались нулевые показания. Микрошприц использовали для точного введения 0,25-1,25 мкл жидкости (дистиллированной воды) на перио-кол полоску. Полоски сразу помещались между датчиками периотрона. Объем оценки периотрона отображал известный зарегистрированный объем жидкости. Этот этап повторяли еще три раза с 0,25 мкл тестируемой жидкости и регистрировали средний балл. Описанный выше этап повторяли с использованием объемов 0,5, 0,75, 1,0, 1,25 мкл, и в каждом случае рассчитывали и записывали среднее значение периотрона. После того, как все показатели были получены, была рассчитана стандартная кривая с известным объемом жидкости (ось X) и периотронной оценкой (ось Y). Аналогичным образом объемы GCF (со здоровьем, хроническим гингивитом, хроническим периодонтитом) у исследуемых пациентов были получены автоматически с периотронной оценкой. Интерполяция из стандартного калибровочного графика дала объем жидкости. После измерения объема стрипы из выбранных участков сразу помещали в индивидуальные микроцентрифужные пробирки, содержащие 200 мкл фосфатного буферного раствора. Образцы хранили при температуре -80°C до дальнейшего анализа.

ИФА

Уровни IL-21 в GCF определяли с помощью ELISA в соответствии с инструкциями производителя. Для элюирования белков пробирку, содержащую периобумажные полоски, встряхивали и гомогенизировали в течение 30 секунд, а затем центрифугировали при 12 500 об/мин при 4°С в течение 5 минут. В наборе использовали моноклональное антитело МТ 21.3 биотин и рекомбинантный человеческий стандарт IL-21 (захваченное антитело). Образцы анализировали в трех повторностях для подтверждения чувствительности ELISA, и было обнаружено, что все образцы находятся в пределах предела обнаружения ELISA. Для измерения поглощения субстрата использовали считыватель ELISA (считыватель микропланшетов Spectramax 190 Ab sorbance; молекулярные устройства; Саннивейл, Калифорния, США) с элементарной длиной волны 450 нм. Преобразование полученных значений поглощения в определенный объем (пг/мл) выполняли с использованием стандартной эталонной кривой. Концентрацию белка в каждом участке (пг/мл) определяли путем деления общего количества IL-21 (пг) на объем жидкости десневой борозды (мкл), а затем значения (пг/мкл) преобразовывали в (пг/мл) .

Протоколы пародонтологического лечения:

На исходном уровне клинические параметры и сбор образцов GCF были выполнены для всех пациентов. Все пациенты получили подробные инструкции по гигиене полости рта, полный наддесневой поддесневой скейлинг вместе с полировкой корней. Нехирургическое пародонтологическое лечение в III группе проводилось в 2-3 приема. Один квалифицированный врач (MN) проводил лечение всех исследуемых пациентов.

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ:

Мощность исследования и расчет объема выборки определяли на основании изменения уровня IL-21 в GCF. Текущие оценки в качестве пилотного исследования, включавшего 12 пациентов в каждой тестовой группе и 10 в контрольной группе с общим размером выборки 34 пациента. Был рассчитан уровень ошибки II типа β = 0,20 (80% мощности) и уровень ошибки I типа α = 0,05 (вероятность 5%). Распределение образцов с соответствующими значениями уровней PI, GI, BOP, PD, RAL и IL-21 до операции и после операции было проанализировано статистически. Данные были введены в Microsoft Excel и проанализированы с использованием пакета SPSS {статистический пакет для социальных наук}, версия 10.05). Пропорции сравнивали с использованием критерия значимости критерия хи-квадрат (χ2). Нормальность данных проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Для определения значений различий до и после лечения был проведен t-критерий Стьюдента. Односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) использовали для проверки различий между группами. Сравнение биохимических и клинических показателей проводили с помощью непараметрического теста Крускала-Уоллиса. Р<0,05 считалось статистически значимым.