Effet de la thérapie parodontale non chirurgicale sur les niveaux d'interleukine-21 du liquide créviculaire gingival

Introduction

La maladie parodontale est une maladie polymicrobienne qui affecte les tissus de soutien des dents. La partie intégrante de la maladie parodontale implique la destruction des tissus parodontaux qui résulte de la stimulation de la provocation bactérienne pour héberger la réponse immuno-inflammatoire. La parodontite chronique est la forme la plus courante de maladie parodontale dans la population adulte. Le biofilm de la plaque bactérienne est le facteur primitif de la parodontite, mais la majorité de la destruction des tissus parodontaux résulterait finalement d'une séquence de réactions immuno-inflammatoires. En raison de l'activation cellulaire, les médiateurs inflammatoires comprennent les cytokines, les chimiokines, etc. contribuent collectivement à la destruction des tissus et à la résorption osseuse. Les cytokines peuvent être regroupées en Th1, Th2, Th17 et T régulateur (Treg) en fonction de leur mode d'expression et de leurs effets sur les cellules ou les tissus cibles.5 Classiquement, la maladie parodontale a été expliquée par la voie Th1/Th2. Les cellules Th1 sont plus fréquemment détectées au stade précoce des lésions parodontales suggérant que les cellules Th1 sont associées à une réponse protectrice contre l'infection bactérienne alors que les cellules Th2 prédominent dans la période tardive et avancée de la maladie, jouant un rôle dans la destruction et la progression des lésions parodontales. lésions. Un type alternatif de réponse de l'hôte aux bactéries pathogènes a été décrit par la voie IL-23/IL-17. Cette voie alternative se produit lorsque les bactéries induisent la synthèse d'IL-23/17 plutôt que d'IL-12, qui joue un rôle central dans l'initiation et le maintien de la réponse inflammatoire. La voie IL-23/17, par rapport à la voie Th1/Th2 classique, est une réponse immunitaire cellulaire bien réglée qui a une multitude de fonctions qui relient le bras inné et adaptatif de la réponse immunitaire.9 Les cytokines Th17 (IL-17, IL-21, IL-22, IL-6, facteur de nécrose tumorale {TNF}-a, etc.)8 participent à la maladie parodontale, mais on peut se demander si leur rôle dominant est protecteur ou destructeur de l'hôte. . Ces cytokines n'ont pas été élucidées à différents statuts inflammatoires dans la parodontite.

L'IL-21 est une cytokine de type I, elle semble structurellement similaire aux protéines IL-2, IL-4 et IL-15. L'IL-21 est principalement composée de cellules T activées, mais elle dirige un vaste spectre de cellules myéloïdes et lymphoïdes du système immunitaire, qui facilitent la modulation de l'immunité acquise et innée par l'IL-21.10 L'IL-21 entre en compétition dans l'immunité contre les cellules tumorales11 et les infections virales chroniques,12 cependant, l'énorme accomplissement de l'IL-21 a été corrélé avec l'avancement des maladies inflammatoires immunitaires dans divers organes.13 L'IL-21 est accrue dans des conditions dermatologiques telles que les biopsies cutanées14 de patients atteints de lupus érythémateux disséminé, de psoriasis et de dermatite atopique. De plus, l'interprétation de l'IL-21 correspond à la présence de cellules Th17 dans le liquide synovial et le sang périphérique des patients atteints de polyarthrite rhumatoïde.

Le rôle de l'IL-21 dans l'inflammation a été largement étudié ; l'aspect thérapeutique à ses niveaux dans les maladies parodontales doit être davantage exploré. Par conséquent, à la lumière des résultats ci-dessus, les chercheurs déterminent les niveaux d'interleukine-21 (IL-21) dans le GCF de la gingivite chronique, de la parodontite chronique et des patients témoins avant et après la thérapie parodontale non chirurgicale ainsi que la co-relation de paramètres cliniques de la destruction des tissus parodontaux.

MATÉRIEL ET MÉTHODES:

LES PATIENTS:

Trente-quatre patients (19 hommes et 15 femmes, âgés de 20 à 60 ans) ont été inscrits consécutivement sur une période de six mois (avril 2014 à septembre 2014) dans le service ambulatoire de parodontologie, Krishnadevaraya College of Dental Sciences, Bangalore et Karnataka. L'autorisation éthique pour l'étude a été obtenue auprès du comité d'éthique institutionnel (02-D012-36773). L'étude a été menée conformément aux principes éthiques décrits dans la Déclaration d'Helsinki 2008. La procédure de l'étude a été expliquée et un consentement écrit éclairé a été obtenu de tous les participants avant leur inclusion dans l'étude. Parmi eux, 24 patients ayant un parodonte malade ont été regroupés en 12 patients atteints de gingivite chronique et 12 patients atteints de parodontite chronique tandis que 10 individus sains ont été inclus comme témoins. Les critères d'inclusion étaient : les patients ayant plus de 14 dents fonctionnelles, les patients en bonne santé systémique qui n'avaient reçu aucune forme de traitement parodontal chirurgical et non chirurgical ou reçu des antibiotiques ou un traitement anti-inflammatoire non stéroïdien au cours des 6 derniers mois de l'étude. . La gingivite chronique a été définie comme ayant une profondeur de sondage (PD) inférieure ou égale à 4 mm et plus de 25 % de sites présentant des saignements gingivaux (BOP).15 La parodontite chronique a été définie comme ayant une profondeur de sondage supérieure ou égale à 5 mm, un RAL supérieur ou égal à 8 mm, avec plus de ou égal à 10 % de sites avec un BOP positif et des signes de perte osseuse déterminés par radiographie.16 Les patients qui se sont portés volontaires sans aucun signe de maladie parodontale déterminée par l'absence d'augmentation de la PD ou de l'AL ont été considérés comme un groupe témoin sain.

Mesures cliniques :

Les paramètres cliniques ont été mesurés et évalués pour toutes les dents à l'exception des 3èmes molaires, au niveau des six sites pour chaque dent (mésio-buccal, disto-buccal, disto-lingual, médio-lingual et mésiolingual). Ces paramètres comprenaient la profondeur de la poche (PD), l'évaluation du saignement gingival, c'est-à-dire l'indice gingival (IG), la mesure dichotomique de l'accumulation de plaque supragingivale, c'est-à-dire l'indice de plaque (PI) et le saignement au sondage (BOP) à la base de la crevasse. Un examinateur calibré (MN) a effectué toutes les évaluations et mesures des patients.

Collecte et analyse d'échantillons GCF :

Dans les trois groupes, des échantillons de GCF ont été prélevés au départ et 6 semaines après le traitement. La sélection du site était basée sur le score le plus élevé enregistré pour un seul site dans la cavité buccale. Un seul site chez chaque sujet qui présentait les pires manifestations inflammatoires (gingivite chronique) et le niveau RAL le plus élevé (parodontite chronique) a été sélectionné pour la collecte de liquide créviculaire gingival. Dans notre étude, nous avons sélectionné un seul site chez chaque sujet pour éviter le regroupement d'échantillons provenant de plusieurs sites, car la parodontite est une maladie spécifique au site. Avant la collecte des échantillons de GCF, la plaque supragingivale a été éliminée avec des boulettes de coton en évitant tout contact avec la gencive marginale. Des bandes de papier standard ont été soigneusement insérées à une profondeur d'environ 2 mm, dans le sulcus/poche pendant 30 secondes pour la collecte de GCF. Les bandelettes contaminées par du sang ont été jetées et un autre site a été utilisé pour obtenir des échantillons de remplacement. Chez les patients atteints de gingivite chronique, un échantillon alternatif a été prélevé avec les scores GI les plus élevés suivants et chez les patients atteints de parodontite chronique, la profondeur de poche de sondage {PPD} la plus profonde suivante a été sélectionnée pour le site d'échantillonnage alternatif. Un appareil calibré a été utilisé pour quantifier le volume d'échantillon GCF et la lecture a été convertie en volume réel (μL) par référence à une courbe standard, préparée à l'aide de la lecture periotron du volume d'eau distillée fluide (μL) dans des bandes perio-col. Une bande vierge de collecte de liquide gingival (pério-col) a été placée entre les méta-capteurs de liquide périotron et l'instrument a été ajusté pour afficher une lecture de zéro. Une seringue de microlitre a été utilisée pour délivrer avec précision 0,25 à 1,25 μL de liquide (eau distillée) sur la bandelette periocol. Les bandelettes ont été immédiatement placées entre les capteurs périotron. Le volume du score periotron affichait le volume connu de fluide enregistré. Cette étape a été répétée trois fois de plus avec 0,25 μL de liquide d'essai et le score moyen a été enregistré. L'étape ci-dessus a été répétée en utilisant un volume de 0,5, 0,75, 1,0, 1,25 μL et, dans chaque cas, la valeur moyenne du périotron calculée et enregistrée. Une fois tous les scores obtenus, une courbe standard a été calculée avec un volume de liquide connu (axe X) et un score périotron (axe Y). De la même manière, les volumes de GCF (de la santé, de la gingivite chronique, de la parodontite chronique) des patients de l'étude ont été obtenus automatiquement avec le score periotron. L'interpolation à partir du graphique d'étalonnage standard a donné le volume de fluide. Après mesure du volume, les bandelettes des sites sélectionnés ont été placées immédiatement dans des microtubes individuels contenant 200 μL de solution tampon phosphate. Les échantillons ont été conservés à -80 °C jusqu'à une analyse plus approfondie.

ELISA

Les niveaux d'IL-21 dans le GCF ont été déterminés par ELISA conformément aux instructions du fabricant. Pour éluer les protéines, le tube contenant les bandes de papier pério a été vortexé et homogénéisé pendant 30 secondes puis centrifugé à 12 500 tr/min à 4°C pendant 5 minutes. Le kit utilisait l'anticorps monoclonal MT 21.3 biotine et l'étalon humain recombinant IL-21 (anticorps capturé). Les échantillons ont été analysés en triple pour authentifier la sensibilité de l'ELISA et tous les échantillons se sont avérés être dans la limite de détection de l'ELISA. Un lecteur ELISA (lecteur de microplaques Spectramax 190 Absorbance ; dispositifs moléculaires ; Sunnyvale, CA, USA) avec 450 nm comme longueur d'onde élémentaire a été utilisé pour mesurer l'absorbance du substrat. La conversion des lectures d'absorbance obtenues en volume défini (pg/mL) a été effectuée à l'aide de la courbe de référence standard. La concentration de protéines sur chaque site (pg/mL) a été déterminée en divisant la quantité totale d'IL-21 (pg) par le volume de liquide créviculaire gingival (μL) et ensuite les valeurs (pg/μL) ont été converties en (pg/mL) .

Protocoles de traitement parodontal :

Au départ, les paramètres cliniques et la collecte d'échantillons de GCF pour tous les patients ont été effectués. Tous les patients ont reçu des instructions d'hygiène buccale approfondies, un détartrage sous-gingival supragingival de la bouche complète ainsi qu'un surfaçage radiculaire. La thérapie parodontale non chirurgicale pour le groupe III a été réalisée en 2-3 rendez-vous. Un seul examinateur calibré (MN) a fourni un traitement à tous les patients de l'étude.

ANALYSES STATISTIQUES:

La puissance de l'étude et le calcul de la taille de l'échantillon ont été déterminés sur la base du changement du niveau d'IL-21 du GCF. Estimations actuelles en tant qu'étude pilote qui comprenait 12 patients dans chaque groupe de test et 10 dans le groupe témoin avec un échantillon total de 34 patients. Un niveau d'erreur de type II de β = 0,20 (puissance de 80 %) et un niveau d'erreur de type I de α = 0,05 (probabilité de 5 %) ont été calculés. La distribution des échantillons avec les valeurs respectives des niveaux de PI, GI, BOP, PD, RAL et IL-21 en pré-opératoire et en post-opératoire a été analysée statistiquement. Les données ont été saisies dans Microsoft Excel et analysées à l'aide du package SPSS {statistical package for social science}, ver.10.05). Les proportions ont été comparées à l'aide du test de signification du test Chi-carré (χ2). La normalité des données a été testée à l'aide du test de Shapiro-Wilk. Un test t de Student a été effectué pour déterminer les valeurs de différence avant et après le traitement. Une analyse de variance à un facteur (ANOVA) a été utilisée pour tester la différence entre les groupes. La comparaison des paramètres biochimiques et cliniques a été effectuée à l'aide du test non paramétrique de Kruskal-Wallis. P<0,05 a été considéré comme statistiquement significatif.