Ei-kirurgisen periodontaalisen hoidon vaikutus ienreuman interleukiini-21-tasoihin

Johdanto

Parodontaali on monimikrobisairaus, joka vaikuttaa hammasta tukeviin kudoksiin. Olennainen osa parodontaalisairautta sisältää periodontaalisten kudosten tuhoutumisen, joka johtuu bakteerialtistuksen stimulaatiosta isännän immuuni-inflammatoriseen vasteeseen. Krooninen parodontiitti on aikuisväestön yleisin parodontiitin muoto. Bakteeriplakin biofilmi on periodontiitin primitiivinen tekijä, mutta suurin osa parodontaalikudosten tuhoutumisesta päättyy lopulta immuuni-inflammatoristen reaktioiden sarjasta. Soluaktivaation seurauksena tulehdusvälittäjiä ovat sytokiinit, kemokiinit jne., jotka yhdessä edistävät kudosten tuhoutumista ja luun resorptiota. Sytokiinit voidaan ryhmitellä Th1-, Th2-, Th17- ja T-säätelyyn (Treg) niiden ilmentymismallin ja kohdesoluihin tai kudoksiin kohdistuvien vaikutusten perusteella.5 Perinteisesti parodontaalisairaus on selitetty Th1/Th2-reitillä. Th1-soluja havaitaan useammin parodontaalivaurioiden varhaisessa vaiheessa, mikä viittaa siihen, että Th1-solut liittyvät suojaavaan vasteeseen bakteeri-infektiota vastaan, kun taas Th2-solut ovat vallitsevia taudin myöhemmässä ja pitkälle edenneessä vaiheessa, ja niillä on rooli parodontaalin tuhoutumisessa ja etenemisessä. vaurioita. Vaihtoehtoinen isännän vaste patogeenisille bakteereille on kuvattu IL-23/IL-17-reitillä. Tämä vaihtoehtoinen reitti tapahtuu, kun bakteerit indusoivat IL-23/17:n synteesin IL-12:n sijaan, jolla on keskeinen rooli tulehdusvasteen alkamisessa ja ylläpitämisessä. IL-23/17-reitti verrattuna klassiseen Th1/Th2-reittiin on paljon hienosäädetty solujen immuunivaste, jolla on monia toimintoja, jotka muodostavat sillan immuunivasteen synnynnäisen ja mukautuvan haaran kanssa. Th17-sytokiinit (IL-17, IL-21, IL-22, IL-6, tuumorinekroositekijä {TNF}-a jne.)8 osallistuvat parodontaalisairauteen, mutta on kyseenalaista, onko niiden hallitseva rooli isäntäsuojaava vai tuhoava. . Näitä sytokiinejä ei ole selvitetty parodontiitin erilaisessa tulehdustilassa.

IL-21 on tyypin I sytokiini, rakenteellisesti se näyttää samanlaiselta kuin IL-2-, IL-4- ja IL-15-proteiinit. IL-21 koostuu pääosin aktivoiduista T-soluista, mutta se ohjaa laajaa immuunijärjestelmän myeloidi- ja lymfoidisolujen kirjoa, mikä helpottaa IL-21:n moduloimaan hankittua ja synnynnäistä immuniteettia. IL-21 kilpailee immuniteetissa kasvainsoluja11 ja kroonisia virusinfektioita vastaan12, mutta IL-21:n valtava saavutus on korreloinut immuunitulehduksellisten sairauksien etenemisen kanssa eri elimissä.13 IL-21 on kohonnut dermatologisissa tiloissa, kuten ihobiopsioissa14 potilailla, joilla on systeeminen lupus erythematosus, psoriasis ja atooppinen ihottuma. Lisäksi IL-21-tulkinta vastaa Th17-solujen läsnäoloa nivelreumapotilaiden nivelnesteessä ja ääreisveressä.

IL-21:n roolia tulehduksessa on tutkittu laajasti; sen hoitonäkökohtaa parodontaalisairauksissa on tutkittava edelleen. Tästä syystä tutkijat määrittävät edellä olevien havaintojen valossa interleukiini-21:n (IL-21) tasot kroonisesta ientulehduksesta, kroonisesta parodontiittista ja vertailupotilaista ennen ei-kirurgista parodontaalihoitoa ja sen jälkeen sekä yhteissuhteen periodontaalisten kudosten tuhoutumisen kliiniset parametrit.

MATERIAALI JA METODIT:

POTILAS:

Kolmekymmentäneljä potilasta (19 miestä ja 15 naista, iältään 20–60 vuotta) rekisteröitiin peräkkäin kuuden kuukauden aikana (huhtikuusta 2014 syyskuuhun 2014) periodontologian avohoitoosastolta, Krishnadevaraya College of Dental Sciences, Bangalore ja Karnataka. Eettinen hyväksyntä tutkimukselle saatiin instituution eettiseltä komitealta (02-D012-36773). Tutkimus toteutettiin Helsingin julistuksessa 2008 kuvattujen eettisten periaatteiden mukaisesti. Tutkimuksen menettely selitettiin ja kaikilta osallistujilta hankittiin tietoinen kirjallinen suostumus ennen heidän ottamista tutkimukseen. Heistä 24 potilasta, joilla oli sairas parodontiitti, ryhmiteltiin 12 kroonista ientulehduspotilaaseen ja 12 krooniseen parodontiittipotilaaseen, kun taas kontrollina 10 tervettä henkilöä. Osallistumiskriteerit olivat: potilaat, joilla oli vähintään 14 toimivaa hammasta, systeemisesti terveet potilaat, jotka eivät olleet saaneet minkäänlaista kirurgista tai ei-kirurgista parodontaalihoitoa tai jotka eivät olleet saaneet antibiootteja tai ei-steroidista anti-inflammatorista hoitoa tutkimuksen viimeisten 6 kuukauden aikana . Krooninen ientulehdus määriteltiin siten, että sen koetussyvyys (PD) oli enintään 4 mm ja yli 25 % kohdista, joissa oli ienverenvuotoa (BOP).15 Krooninen parodontiitti määriteltiin siten, että koetussyvyys oli vähintään 5 mm, RAL suurempi tai yhtä suuri kuin 8 mm, yli 10 %:lla kohdista BOP-positiivinen ja todisteita luukadosta, joka määritettiin radiografisesti.16 Potilaat, jotka osallistuivat vapaaehtoisesti ilman merkkejä parodontaalisairaudesta, joka määritettiin lisääntyneen PD:n tai AL:n puuttumisen perusteella, pidettiin terveenä kontrolliryhmänä.

Kliiniset mittaukset:

Kliiniset parametrit mitattiin ja arvioitiin kaikille hampaille, lukuun ottamatta 3. poskihampaat, jokaisessa kuudessa kohdassa kunkin hampaan (mesio-bukkaalinen, disto-bukkaalinen, disto-linguaalinen, lingvaalinen ja mesiolinguaalinen). Nämä parametrit koostuivat taskun syvyydestä (PD), ienverenvuodon arvioinnista eli ienindeksistä (GI), supragingivaalisen plakin kertymisen dikotomisesta mittauksesta eli plakkiindeksistä (PI) ja verenvuodosta koetuksella (BOP) rakon tyveen. Yksi kalibroitu tutkija (MN) suoritti kaikki potilasarvioinnit ja mittaukset.

GCF-näytteiden kerääminen ja analysointi:

Kaikissa kolmessa ryhmässä GCF-näytteet kerättiin lähtötilanteessa ja 6 viikkoa hoidon jälkeen. Paikan valinta perustui korkeimpaan suuontelon yksittäisen kohdan pistemäärään. Jokaisesta koehenkilöstä valittiin yksi paikka, joka osoitti pahimpia tulehduksia (krooninen ientulehdus) ja korkein RAL-taso (krooninen parodontiitti). Tutkimuksessamme valitsimme jokaisesta koehenkilöstä yhden paikan, jotta vältetään näytteiden yhdistäminen useista kohdista, koska parodontiitti on paikkaspesifinen sairaus. Ennen GCF-näytteiden keräämistä supragingivaalinen plakki poistettiin puuvillapelleteillä välttäen kosketusta marginaalisen ikenen kanssa. Standardipaperinauhat työnnettiin varovasti noin 2 mm:n syvyyteen uurteeseen/taskuun 30 sekunniksi GCF:n keräämiseksi. Veren saastuttamat liuskat heitettiin pois ja korvaavien näytteiden saamiseksi käytettiin vaihtoehtoista paikkaa. Kroonisen ientulehduspotilailla vaihtoehtoinen näyte kerättiin seuraavaksi korkeimmalla GI-pisteellä ja kroonisilla parodontiittipotilailla vaihtoehtoiseksi näytepaikaksi valittiin seuraavaksi syvin koetustaskun syvyys {PPD}. Kalibroitua laitetta käytettiin kvantifioimaan GCF-näytteen tilavuus ja lukemat muutettiin todelliseksi tilavuudeksi (μL) viittaamalla standardikäyrään, joka valmistettiin käyttämällä periotronilukemaa nesteen (μL) tislatun veden tilavuudesta periocol-liuskoissa. Tyhjä iennesteen keräysliuska (perio-col) asetettiin periotroninesteen meta-anturien väliin ja instrumentti säädettiin näyttämään lukema nolla. Mikrolitran ruiskua käytettiin annostelemaan tarkasti 0,25-1,25 µl nestettä (tislattua vettä) perio-col-liuskaan. Nauhat asetettiin välittömästi periotroniantureiden väliin. Periotronipistemäärä osoitti tunnetun tallennetun nestemäärän. Tämä vaihe toistettiin vielä kolme kertaa 0,25 µl:lla testinestettä ja keskimääräinen pistemäärä kirjattiin. Yllä oleva vaihe toistettiin käyttämällä tilavuutta 0,5, 0,75, 1,0, 1,25 µl, ja jokaisessa tapauksessa keskimääräinen periotronin arvo laskettiin ja kirjattiin. Kun kaikki pisteet oli saatu, laskettiin standardikäyrä tunnetulla nestetilavuudella (X-akseli) ja periotronipisteillä (Y-akseli). Samalla tavalla GCF-tilavuudet (terveydestä, krooninen ientulehdus, krooninen parodontiitti) tutkimuspotilailta saatiin automaattisesti periotronipisteillä. Interpolaatio standardikalibrointikäyrästä antoi nesteen tilavuuden. Tilavuuden mittaamisen jälkeen liuskat valituista kohdista laitettiin välittömästi yksittäisiin mikrosentrifugiputkiin, jotka sisälsivät 200 µl fosfaattipuskuriliuosta. Näytteitä säilytettiin -80 °C:ssa jatkoanalyysiin asti.

ELISA

IL-21:n tasot GCF:ssä määritettiin käyttämällä ELISA:ta valmistajan ohjeiden mukaisesti. Proteiinien eluoimiseksi periopaperiliuskat sisältävää putkea vorteksoitiin ja homogenisoitiin 30 sekuntia ja sitten sentrifugoitiin nopeudella 12 500 rpm 4 °C:ssa 5 minuuttia. Kitissä käytettiin monoklonaalista vasta-ainetta MT 21.3 biotiinia ja ihmisen rekombinantti-IL-21-standardia (siepattu vasta-aine). Näytteet ajettiin kolmena rinnakkaisena ELISA-herkkyyden todentamiseksi, ja kaikkien näytteiden havaittiin olevan ELISA:n havainnointirajojen sisällä. Substraatin absorbanssin mittaamiseen käytettiin ELISA-lukijaa (spektramax 190 Ab sorbanssi mikrolevylukija; molekyylilaitteet; Sunnyvale, CA, USA), jonka perusaallonpituus oli 450 nm. Saatujen absorbanssilukemien muuntaminen määrätyksi tilavuudeksi (pg/ml) suoritettiin käyttämällä standardia vertailukäyrää. Proteiinikonsentraatio kussakin kohdassa (pg/ml) määritettiin jakamalla IL-21:n kokonaismäärä (pg) ienhapon nestetilavuudella (μL) ja sen jälkeen arvot (pg/μL) muutettiin arvoiksi (pg/ml). .

Parodontaalihoidon protokollat:

Lähtötilanteessa kliiniset parametrit ja GCF-näytteiden keräys tehtiin kaikille potilaille. Kaikki potilaat saivat perusteelliset suuhygieniaohjeet, koko suun supragingivaalisen subgingivaalisen hilseilyn sekä juurien höyläyksen. Ryhmän III ei-kirurgista parodontaalihoitoa suoritettiin 2-3 tapaamisessa. Yksi kalibroitu tutkija (MN) tarjosi hoidon kaikille tutkimuspotilaille.

TILASTOLLINEN ANALYYSI:

Tutkimuksen teho ja näytteen koon laskeminen määritettiin GCF IL-21 -tason muutoksen perusteella. Nykyiset arviot pilottitutkimuksena, joka sisälsi 12 potilasta kustakin testiryhmästä ja 10 kontrolliryhmästä, joiden kokonaisotoskoko oli 34 potilasta. Tyypin II virhetaso β = 0,20 (80 % teho) ja tyypin I virhetaso α = 0,05 (5 % todennäköisyys). Näytteiden jakautuminen vastaavilla PI-, GI-, BOP-, PD-, RAL- ja IL-21-arvoilla ennen leikkausta ja sen jälkeen analysoitiin tilastollisesti. Tiedot syötettiin Microsoft exceliin ja analysoitiin käyttämällä SPSS {tilastollinen paketti yhteiskuntatieteille}, ver.10.05) pakettia. Suhteita verrattiin käyttämällä Chi-neliötestin (χ2) merkitsevyystestiä. Tietojen normaalius testattiin Shapiro-Wilk-testillä. Opiskelijan t-testi suoritettiin ennen ja jälkeen hoitoa koskevien eroarvojen määrittämiseksi. Ryhmien välisen eron testaamiseen käytettiin yksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA). Biokemiallisten ja kliinisten parametrien vertailu suoritettiin Kruskal-Wallis ei-parametrisella testillä. P < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitseväksi.