A nem sebészi periodontális terápia hatása a fogíny recvicularis folyadék interleukin-21 szintjére

Bevezetés

A parodontális betegség polimikrobiális betegség, amely a fogat tartó szöveteket érinti. A parodontális betegség szerves része a parodontális szövetek elpusztulása, amely a gazdaszervezet immungyulladásos válaszának bakteriális kihívásának stimulálása eredménye. A krónikus parodontitis a fogágybetegség leggyakoribb formája a felnőtt lakosság körében. A bakteriális plakk biofilm a periodontitis primitív faktora, de a parodontális szövetek pusztításának nagy része végül immun-gyulladásos reakciók sorozatából következik. A sejtaktiváció eredményeként a gyulladásos mediátorok közé tartoznak a citokinek, kemokinek stb., amelyek együttesen hozzájárulnak a szövetpusztuláshoz és a csontreszorpcióhoz. A citokinek a Th1, Th2, Th17 és T szabályozó (Treg) csoportba sorolhatók expressziós mintázataik és a célsejtekre vagy szövetekre gyakorolt ​​hatásuk alapján.5 Klasszikusan a periodontális betegséget a Th1/Th2 útvonallal magyarázzák. A Th1 sejteket gyakrabban mutatják ki a parodontális elváltozások korai stádiumában, ami arra utal, hogy a Th1 sejtek protektív válaszreakciót mutatnak a bakteriális fertőzésekkel szemben, míg a Th2 sejtek a betegség későbbi és előrehaladott szakaszában dominálnak, és szerepet játszanak a parodontális elpusztításában és progressziójában. elváltozások. A gazdaszervezet patogén baktériumokra adott válaszának alternatív típusát az IL-23/IL-17 útvonal írta le. Ez az alternatív útvonal akkor fordul elő, amikor a baktériumok az IL-12 helyett az IL-23/17 szintézisét indukálják, ami kulcsfontosságú szerepet játszik a gyulladásos válasz megindításában és fenntartásában. Az IL-23/17 útvonal a klasszikus Th1/Th2 útvonalhoz képest egy nagyon finoman hangolt sejtes immunválasz, amelynek számos olyan funkciója van, amelyek áthidalják az immunválasz veleszületett és adaptív ágát.9 A Th17 citokinek (IL-17, IL-21, IL-22, IL-6, Tumor necrosis faktor {TNF}-a stb.)8 részt vesznek a parodontális betegségben, de kérdéses, hogy domináns szerepük gazdavédő vagy destruktív. . Ezeket a citokineket a parodontitis eltérő gyulladásos státuszában nem vizsgálták.

Az IL-21 egy I-es típusú citokin, szerkezetileg hasonlónak tűnik az IL-2, IL-4 és IL-15 fehérjékhez. Az IL-21 főként aktivált T-sejtekből áll, de az immunrendszer mieloid és limfoid sejtjeinek széles spektrumát irányítja, amelyek elősegítik az IL-21-et a szerzett és veleszületett immunitás modulálásában. Az IL-21 verseng a daganatos sejtekkel11 és a krónikus vírusfertőzésekkel szembeni immunitásban,12 azonban az IL-21 óriási teljesítménye összefüggésbe hozható a különböző szervekben előforduló immungyulladásos betegségek előrehaladásával.13 Az IL-21 szintje megnövekedett dermatológiai állapotokban, például szisztémás lupus erythematosusban, pikkelysömörben és atópiás dermatitisben szenvedő betegek bőrbiopsziájában14. Ezenkívül az IL-21 értelmezése megfelel a Th17 sejtek jelenlétének az ízületi folyadékban és a rheumatoid arthritises betegek perifériás vérében.

Az IL-21 szerepét a gyulladásban alaposan tanulmányozták; a fogágybetegségek szintjének kezelési szempontját tovább kell vizsgálni. Ezért a fenti eredmények fényében a kutatók meghatározzák az interleukin-21 (IL-21) szintjét a krónikus gingivitisből, krónikus parodontitiszből és a kontroll betegekből származó GCF-ben a nem sebészeti parodontális terápia előtt és után, valamint az interleukin-21 (IL-21) szintjét. a parodontális szövetek destrukciójának klinikai paraméterei.

ANYAG ÉS MÓDSZEREK:

BETEGEK:

Harmincnégy beteget (19 férfit és 15 nőt, 20-60 év közöttiek) vettek fel egymás után hat hónapon keresztül (2014 áprilisától 2014 szeptemberéig) a bangalorei Krishnadevaraya Dental Sciences College of Dental Sciences járóbeteg osztályáról, Bangalore-ban és Karnatakában. A tanulmány etikai engedélyét az intézményi etikai bizottság (02-D012-36773) szerezte be. A vizsgálatot a 2008-as Helsinki Nyilatkozatban leírt etikai elvek szerint végezték. A vizsgálat menetét elmagyarázták, és minden résztvevőtől írásos beleegyezést kaptak, mielőtt bevonták őket a vizsgálatba. Közülük 24 fogágybetegségben szenvedő beteget 12 krónikus fogínygyulladásos és 12 krónikus parodontózisos betegbe csoportosítottak, míg kontrollként 10 egészséges személyt soroltunk be. A beválasztási kritériumok a következők voltak: 14 vagy annál több működő foggal rendelkező betegek, szisztémásán egészséges betegek, akik nem részesültek semmilyen sebészeti és nem sebészeti parodontális kezelésben, illetve nem kaptak antibiotikumot vagy nem szteroid gyulladáscsökkentő kezelést a vizsgálat elmúlt 6 hónapjában. . A krónikus fogínygyulladást úgy határozták meg, hogy a szondázási mélység (PD) legfeljebb 4 mm, és több mint 25%-a ínyvérzéssel rendelkező hely (BOP).15 A krónikus parodontitist úgy határozták meg, hogy a szondázási mélység legalább 5 mm, a RAL legalább 8 mm, és legalább 10%-a BOP-pozitív, és a csontvesztés bizonyítéka radiográfiával meghatározva. Azokat a betegeket, akik önkéntesként jelentkeztek, és nem észlelték a fokozott PD vagy AL hiánya miatt kimutatott parodontális betegséget, egészséges kontrollcsoportnak tekintették.

Klinikai mérések:

A klinikai paramétereket az összes fogra mértük és értékeltük, kivéve a 3. őrlőfogakat, mind a hat helyen minden fog esetében (mesio-bukkális, disto-bukkális, diszto-lingvális, középnyelvi és mesiolinguális). Ezek a paraméterek a zsebmélység (PD), a fogínyvérzés, azaz az ínyindex (GI), a supragingivális plakk felhalmozódás dichotóm mérése, azaz a plakk index (PI) mérése és a szondázáskor jelentkező vérzés (BOP) a hasadék tövéből álltak. Egy kalibrált vizsgáló (MN) végezte el az összes betegértékelést és mérést.

GCF minták gyűjtése és elemzése:

Mindhárom csoportban a GCF-mintákat az alapvonalon és a kezelés után 6 héttel gyűjtöttük. A helyszín kiválasztása a szájüreg egyetlen helyére feljegyzett legmagasabb pontszámon alapult. Minden alanyban egyetlen helyet választottunk ki a gingivális rés-folyadék gyűjtésére, ahol a legrosszabb gyulladásos megnyilvánulások (krónikus gingivitis) és a legmagasabb RAL-szint (krónikus parodontitis) voltak. Vizsgálatunkban minden alanyban egyetlen helyet választottunk ki, hogy elkerüljük a több helyről származó minták összegyűjtését, mivel a parodontitis helyspecifikus betegség. A GCF minták gyűjtése előtt a szupragingivális plakkot vattapellettel távolítottuk el, elkerülve a marginális gingiva érintkezését. A standard papírcsíkokat óvatosan, körülbelül 2 mm mélységig behelyeztük a barázdába/zsebbe 30 másodpercre a GCF összegyűjtésére. A vérrel szennyezett csíkokat eldobták, és más helyet használtak a csereminták beszerzésére. Krónikus fogínygyulladásban szenvedő betegeknél a következő legmagasabb GI-pontszámmal rendelkező alternatív mintavételezést, krónikus parodontózisos betegeknél pedig a következő legmélyebb szondázási zsebmélységet (PPD}) választottuk az alternatív mintahelynek. Kalibrált készüléket használtunk a GCF mintatérfogat mennyiségi meghatározására, és a leolvasott értékeket tényleges térfogatra (μL) konvertáltuk egy standard görbe alapján, amelyet a folyadék (μL) desztillált víz térfogatának periotron leolvasásával készítettünk perio-col csíkokban. Egy üres ínyfolyadék-gyűjtő (perio-col) csíkot helyeztünk a periotron folyadék meta-érzékelői közé, és a műszert úgy állítottuk be, hogy nulla értéket mutasson. Mikroliteres fecskendőt használtunk 0,25-1,25 μl folyadék (desztillált víz) pontos bejuttatására a perio-col csíkra. A csíkokat azonnal a periotron érzékelők közé helyezték. A periotron pontszáma a rögzített folyadék ismert térfogatát jelenítette meg. Ezt a lépést még háromszor megismételtük 0,25 μl tesztfolyadékkal, és feljegyeztük az átlagos pontszámot. A fenti lépést megismételtük 0,5, 0,75, 1,0, 1,25 µl térfogattal, és minden esetben a periotron átlagértékét számítottuk és rögzítettük. Miután az összes pontszámot megkaptuk, egy standard görbét számítottunk ki ismert folyadéktérfogattal (X-tengely) és periotron-pontszámmal (Y-tengely). Hasonló módon a vizsgálati betegek GCF térfogatait (egészségügyi, krónikus gingivitis, krónikus parodontitis) automatikusan periotron pontszámmal határoztuk meg. A standard kalibrációs grafikonból származó interpoláció a folyadék térfogatát adta meg. A térfogatmérés után a kiválasztott helyekről származó csíkokat azonnal 200 μl foszfát pufferoldatot tartalmazó mikrocentrifuga csövekbe helyeztük. A mintákat a további elemzésig -80 °C-on tároltuk.

ELISA

Az IL-21 szintjét a GCF-ben ELISA-val határoztuk meg a gyártó utasításai szerint. A fehérjék eluálásához a periopapír csíkokat tartalmazó csövet vortexeljük és 30 másodpercig homogenizáljuk, majd 12 500 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk 4 °C-on 5 percig. A kit monoklonális antitest MT 21.3 biotint és humán rekombináns IL-21 standardot (befogott antitest) használt. A mintákat három párhuzamosban futtattuk az ELISA érzékenységének hitelesítésére, és az összes mintát az ELISA kimutatási határán belülinek találtuk. A szubsztrát abszorbanciájának mérésére 450 nm elemi hullámhosszú ELISA olvasót (Spectramax 190 Ab sorbance microplate reader; molekuláris eszközök; Sunnyvale, CA, USA) használtunk. A kapott abszorbanciaértékeket meghatározott térfogatra (pg/ml) a standard referenciagörbével konvertáltuk. Az egyes helyeken a fehérjekoncentrációt (pg/mL) úgy határoztuk meg, hogy a teljes IL-21 mennyiséget (pg) elosztottuk a gingivális résfolyadék térfogatával (μL), majd a (pg/μL) értékeket (pg/mL) konvertáltuk. .

Parodontális kezelési protokollok:

Kiinduláskor elvégezték a klinikai paraméterek meghatározását és a GCF minták gyűjtését minden betegnél. Valamennyi beteg alapos szájhigiénés utasítást, teljes szájüregi szupragingivális szubgingivális hámlást, valamint gyökérgyalulást kapott. A III. csoport nem sebészeti parodontális terápiáját 2-3 alkalommal végeztük. Egyetlen kalibrált vizsgáló (MN) látta el a kezelést minden vizsgálati beteg számára.

STATISZTIKAI ANALÍZIS:

A vizsgálat teljesítményét és a mintaméret számítását a GCF IL-21 szint változása alapján határoztuk meg. A jelenlegi becslések kísérleti tanulmányként, amely 12 beteget vont be minden tesztcsoportba és 10 beteget a kontrollcsoportba, 34 beteg teljes mintájával. A II. típusú hibaszint β = 0,20 (80%-os teljesítmény) és az I. típusú hibaszint α=0,05 (5%-os valószínűséggel). Statisztikailag elemeztük a preoperatív és posztoperatív PI, GI, BOP, PD, RAL és IL-21 értékű minták megoszlását. Az adatokat a Microsoft Excel programba vittük be, és az SPSS {statisztikai csomag társadalomtudományokhoz}, ver.10.05) csomag segítségével elemeztük. Az arányokat Khi-négyzet teszt (χ2) szignifikanciapróbával hasonlítottuk össze. Az adatok normálisságát Shapiro-Wilk teszttel teszteltük. Student t-tesztet végeztünk a kezelés előtti és utáni különbségek meghatározására. Egymódú varianciaanalízist (ANOVA) alkalmaztunk a csoportok közötti különbség tesztelésére. A biokémiai és klinikai paraméterek összehasonlítását Kruskal-Wallis nem-paraméteres teszttel végeztük. P<0,05 statisztikailag szignifikánsnak tekinthető.