Efecto de la terapia periodontal no quirúrgica sobre los niveles de interleucina-21 en el líquido crevicular gingival

Introducción

La enfermedad periodontal es una enfermedad polimicrobiana que afecta los tejidos de soporte de los dientes. Una parte integral de la enfermedad periodontal implica la destrucción de los tejidos periodontales que resulta de la estimulación del desafío bacteriano para la respuesta inmunoinflamatoria del huésped. La periodontitis crónica es la forma más común de enfermedad periodontal en la población adulta. El biofilm de la placa bacteriana es el factor primitivo de la periodontitis, pero la mayor parte de la destrucción de los tejidos periodontales terminaría finalmente por una secuencia de reacciones inmunoinflamatorias. Como resultado de la activación celular, los mediadores inflamatorios incluyen citocinas, quimiocinas, etc. que contribuyen colectivamente a la destrucción de tejidos y la reabsorción ósea. Las citocinas se pueden agrupar como Th1, Th2, Th17 y T reguladoras (Treg) en función de su patrón de expresión y efectos sobre las células o tejidos diana.5 Clásicamente, la enfermedad periodontal se ha explicado por la vía Th1/Th2. Las células Th1 se detectan con más frecuencia en la etapa temprana de las lesiones periodontales, lo que sugiere que las células Th1 están asociadas con una respuesta protectora contra la infección bacteriana, mientras que las células Th2 predominan en el período posterior y avanzado de la enfermedad, y tienen un papel en la destrucción y progresión de la lesión periodontal. lesiones La vía IL-23/IL-17 ha descrito un tipo alternativo de respuesta del huésped a las bacterias patógenas. Esta vía alternativa se produce cuando las bacterias inducen la síntesis de IL-23/17 en lugar de IL-12, que desempeña un papel fundamental en el inicio y mantenimiento de la respuesta inflamatoria. La vía IL-23/17, en comparación con la vía Th1/Th2 clásica, es una respuesta inmunitaria celular muy afinada que tiene una multitud de funciones que unen el brazo innato y adaptativo de la respuesta inmunitaria.9 Las citoquinas Th17 (IL-17, IL-21, IL-22, IL-6, factor de necrosis tumoral {TNF}-a, etc.)8 participan en la enfermedad periodontal, pero es cuestionable si su papel dominante es protector o destructivo del huésped. . Estas citoquinas no han sido dilucidadas en diferentes estados inflamatorios en la periodontitis.

IL-21 es una citocina de tipo I, estructuralmente parece similar a las proteínas IL-2, IL-4 e IL-15. La IL-21 está compuesta principalmente por células T activadas, pero dirige un amplio espectro de células mieloides y linfoides del sistema inmunitario, que facilitan que la IL-21 module la inmunidad adquirida e innata.10 La IL-21 compite en la inmunidad contra las células tumorales11 y las infecciones virales crónicas,12 sin embargo, el enorme logro de la IL-21 se ha correlacionado con el avance de las enfermedades inmunoinflamatorias en varios órganos.13 La IL-21 está elevada en condiciones dermatológicas como biopsias de piel14 de pacientes con lupus eritematoso sistémico, psoriasis y dermatitis atópica. Además, la interpretación de IL-21 se corresponde con la presencia de células Th17 en líquido sinovial y sangre periférica de pacientes con artritis reumatoide.

Se ha estudiado ampliamente el papel de la IL-21 en la inflamación; el aspecto del tratamiento en sus niveles en las enfermedades periodontales necesita ser explorado más a fondo. Por lo tanto, a la luz de los hallazgos anteriores, los investigadores determinaron los niveles de interleucina-21 (IL-21) en GCF de gingivitis crónica, periodontitis crónica y pacientes de control antes y después de la terapia periodontal no quirúrgica junto con la correlación de parámetros clínicos de destrucción de los tejidos periodontales.

MATERIAL Y MÉTODOS:

PACIENTES:

Treinta y cuatro pacientes (19 hombres y 15 mujeres, de 20 a 60 años de edad) se inscribieron consecutivamente durante un período de seis meses (abril de 2014 a septiembre de 2014) del departamento ambulatorio de periodoncia, Krishnadevaraya College of Dental Sciences, Bangalore y Karnataka. La autorización ética para el estudio se obtuvo del comité de ética institucional (02-D012-36773). El estudio se realizó de acuerdo con los principios éticos descritos en la Declaración de Helsinki de 2008. Se explicó el procedimiento del estudio y se obtuvo el consentimiento informado por escrito de todos los participantes antes de su inclusión en el estudio. Entre ellos, 24 pacientes con periodonto enfermo se agruparon en 12 pacientes con gingivitis crónica y 12 pacientes con periodontitis crónica, mientras que 10 individuos sanos se incluyeron como control. Los criterios de inclusión fueron: pacientes con más de o igual a 14 dientes funcionales, pacientes sistémicamente sanos que no habían recibido ningún tipo de terapia periodontal quirúrgica y no quirúrgica o que recibieron antibióticos o terapia antiinflamatoria no esteroide en los últimos 6 meses del estudio . La gingivitis crónica se definió como tener una profundidad de sondaje (DP) menor o igual a 4 mm y más del 25 % de los sitios con sangrado gingival presente (BOP).15 La periodontitis crónica se definió como tener profundidad de sondaje mayor o igual a 5 mm, RAL mayor o igual a 8 mm, con más de o igual al 10% de sitios con BOP positivo y evidencia de pérdida ósea determinada radiográficamente.16 Los pacientes que se ofrecieron como voluntarios sin evidencia de enfermedad periodontal determinada por la ausencia de aumento de PD o AL se consideraron como grupo de control sano.

Medidas clínicas:

Los parámetros clínicos se midieron y evaluaron para todos los dientes, excepto los terceros molares, en los seis sitios de cada diente (mesiovestibular, distovestibular, distolingual, mediolingual y mesiolingual). Estos parámetros consistieron en la profundidad de la bolsa (PD), la evaluación del sangrado gingival, es decir, el índice gingival (GI), la medición dicotómica de la acumulación de placa supragingival, es decir, el índice de placa (PI) y el sangrado al sondaje (BOP) en la base del surco. Un examinador calibrado (MN) realizó todas las evaluaciones y mediciones de los pacientes.

Recolección y análisis de muestras de GCF:

En los tres grupos, las muestras de GCF se recolectaron al inicio y 6 semanas después del tratamiento. La selección del sitio se basó en la puntuación más alta registrada para un solo sitio en la cavidad oral. Se seleccionó un solo sitio en cada sujeto que mostró las peores manifestaciones inflamatorias (gingivitis crónica) y el nivel más alto de RAL (periodontitis crónica) para la recolección de líquido crevicular gingival. En nuestro estudio, seleccionamos un solo sitio en cada sujeto para evitar la combinación de muestras de múltiples sitios, ya que la periodontitis es una enfermedad específica del sitio. Antes de la recolección de muestras de GCF, la placa supragingival se eliminó con bolitas de algodón evitando el contacto con la encía marginal. Se insertaron cuidadosamente tiras de papel estándar a una profundidad de aproximadamente 2 mm, en el surco/bolsa durante 30 segundos para la recolección de GCF. Las tiras contaminadas con sangre se descartaron y se utilizó un sitio alternativo para obtener muestras de reemplazo. En pacientes con gingivitis crónica, se recogieron muestras alternativas con las siguientes puntuaciones GI más altas y en pacientes con periodontitis crónica se seleccionó la siguiente profundidad de bolsa de sondaje más profunda {PPD} para el sitio de muestra alternativo. Se usó un aparato calibrado para cuantificar el volumen de muestra de GCF y las lecturas se convirtieron en volumen real (μL) por referencia a una curva estándar, preparada usando la lectura de periotrón del volumen de líquido (μL) de agua destilada en tiras de perio-col. Se colocó una tira de recolección de líquido gingival en blanco (perio-col) entre los metasensores de líquido de periotrón y el instrumento se ajustó para mostrar una lectura de cero. Se usó una jeringa de microlitros para administrar con precisión 0,25-1,25 μL de líquido (agua destilada) a la tira de perio-col. Las tiras se colocaron inmediatamente entre los sensores de periotrón. El volumen de puntuación del periotrón mostró el volumen conocido de fluido registrado. Este paso se repitió tres veces más con 0,25 µl de fluido de prueba y se registró la puntuación media. El paso anterior se repitió utilizando un volumen de 0,5, 0,75, 1,0, 1,25 μL, y en cada caso se calculó y registró el valor medio de periotrón. Una vez obtenidas todas las puntuaciones, se calculó una curva estándar con el volumen de líquido conocido (eje X) y la puntuación del periotrón (eje Y). De manera similar, los volúmenes GCF (de salud, gingivitis crónica, periodontitis crónica) de los pacientes del estudio se obtuvieron automáticamente con la puntuación de periotrón. La interpolación del gráfico de calibración estándar dio el volumen de fluido. Después de medir el volumen, las tiras de los sitios seleccionados se colocaron inmediatamente en tubos de microcentrífuga individuales que contenían 200 μL de solución tampón de fosfato. Las muestras se almacenaron a -80 °C hasta su posterior análisis.

ELISA

Los niveles de IL-21 en el GCF se determinaron mediante ELISA de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para eluir las proteínas, el tubo que contenía las tiras de papel perio se agitó y homogeneizó durante 30 segundos y luego se centrifugó a 12.500 rpm a 4 °C durante 5 minutos. El kit utilizó el anticuerpo monoclonal MT 21.3 biotina y el estándar IL-21 recombinante humano (anticuerpo capturado). Las muestras se analizaron por triplicado para autenticar la sensibilidad de ELISA y se encontró que todas las muestras estaban dentro del límite de detección de ELISA. Se utilizó un lector de ELISA (lector de microplacas de absorción Spectramax 190; dispositivos moleculares; Sunnyvale, CA, EE. UU.) con 450 nm como longitud de onda elemental para medir la absorbancia del sustrato. La conversión de las lecturas de absorbancia obtenidas en volumen definido (pg/mL) se realizó usando una curva de referencia estándar. La concentración de proteína en cada sitio (pg/mL) se determinó dividiendo la cantidad total de IL-21 (pg) por el volumen de líquido crevicular gingival (μL) y posteriormente los valores (pg/μL) se convirtieron en (pg/mL) .

Protocolos de tratamiento periodontal:

Al inicio del estudio, se realizaron parámetros clínicos y recolección de muestras de GCF para todos los pacientes. Todos los pacientes recibieron instrucciones detalladas de higiene oral, un raspado supragingival subgingival de boca completa junto con un alisado radicular. La terapia periodontal no quirúrgica para el grupo III se realizó en 2-3 citas. Un único examinador calibrado (MN) proporcionó tratamiento a todos los pacientes del estudio.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO:

El poder del estudio y el cálculo del tamaño de la muestra se determinaron sobre la base del cambio en el nivel de IL-21 del GCF. Estimaciones actuales como un estudio piloto que incluyó 12 pacientes en cada grupo de prueba y 10 en el grupo de control con un tamaño de muestra total de 34 pacientes. Se calculó un nivel de error de tipo II de β = 0,20 (80 % de potencia) y un nivel de error de tipo I de α = 0,05 (5 % de probabilidad). Se analizó estadísticamente la distribución de las muestras con los respectivos valores de PI, GI, BOP, PD, RAL e IL-21 antes y después de la operación. Los datos se ingresaron en Microsoft Excel y se analizaron con el paquete SPSS {paquete estadístico para ciencias sociales}, ver.10.05). Las proporciones se compararon mediante la prueba de significación de la prueba de chi-cuadrado (χ2). La normalidad de los datos se probó mediante la prueba de Shapiro-Wilk. Se realizó una prueba t de Student para determinar los valores de diferencia antes y después del tratamiento. Se usó un análisis de varianza (ANOVA) de una vía para probar la diferencia entre los grupos. La comparación de los parámetros bioquímicos y clínicos se realizó mediante la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis. P<0,05 se consideró estadísticamente significativo.