肝細胞癌における肝臓および循環マイクロRNA miR-221およびmiR-222の臨床的意義

背景と理論的根拠 肝細胞癌 (HCC) は、世界で 6 番目に罹患している癌であり、癌関連死亡の 3 番目の原因です。

外科的切除は、バルセロナクリニック肝がん（BCLC）ステージ A の臨床疾患を持つ患者にとって依然として最良の治癒治療選択肢であり、多病巣性疾患または限定的な血管浸潤を伴うより進行したステージ B であっても利点が示されています。

治癒治療の 5 年生存率は 50 ～ 70% ですが、手術後 5 年後の再発率は 70% にも上ります。 したがって、再発と生存の予後因子を特定するには、さらなる努力が必要です。

マイクロRNAは、小さな非コードRNA分子のクラスであり、細胞の増殖、分化、アポトーシスおよび胚発生の重要な調節因子として機能し、転写後レベルで遺伝子発現を微調整します。 それらは、標的遺伝子に応じて、癌遺伝子または腫瘍抑制因子として作用します。 HCCでは、いくつかのマイクロRNAクラスターの上方制御または下方制御が報告されており、それに続いてβ-カテニン、Ras、TGF-b、JAK/STATなどの分子ネットワークが活性化され、高度に制御されたフィードバック機構が構築されます。

発がんへのそれらの関与は、診断、モニタリング、治療といった臨床応用の開発にとって重要な研究分野となります。 マイクロRNAプロファイルは、正常組織と癌性組織を区別し、起源の組織を特定し、また、異なるサブタイプまたは特定の発癌性異常を識別することができます。 実際、microRNA の誤発現パターンは、他の方法では特定が難しい腫瘍の起源を特定する際により正確であり、腫瘍が独特の組織 microRNA 発現プロファイルをより明確に維持していることを示唆しています。

マイクロRNAは、患者の追跡調査のための早期診断バイオマーカーとしても役立つ可能性がある。

肝腫瘍形成における miR-221 および miR-222 の役割は完全には解明されていません。 以前の研究では、対応する肝硬変組織と比較した場合、HCC 腫瘍サンプルの 83% で miR-221 が上方制御されていることが示されました。

健康な正常対照と比較して、HCC患者では血清miR-221の発現増加が見られ、これは他の予後不良因子の存在と肝臓切除後の予後不良と関連していた。

肝臓サンプルからのマイクロ RNA の抽出は、腫瘍を切除できるか、各患者の肝生検を実行できるかによって制限されます。 それどころか、血液サンプルは分析のために収集して保存するのが簡単です。 現時点では、肝臓組織 (腫瘍性および非腫瘍性) における miR-221 および miR-222 の発現と、循環 miR-221 および miR-222 レベルとの間の相関関係は明確には確立されていません。

この相関関係が確認されれば、肝生検を必要とせずに第 3 相試験に HCC 患者を含めるための代用マーカーとして使用できる循環レベルのカットオフ値を特定することが可能になります。肝生検は臨床上の理由から禁忌であることが多く、ガイドライン。

これは、HCC患者の腫瘍性/非腫瘍性肝臓組織および血液サンプルのペアにおけるmiR-221とmiR-222の過剰発現の間の相関関係を評価し、代用マーカーとして使用する循環レベルのカットオフを特定するためのパイロット研究です。臨床試験中。

したがって、この研究は、血液中の miR-221 および miR-222 の発現が組織発現と相関するかどうか、また循環レベルが腫瘍肝組織における過剰発現の代用として使用できるかどうかを評価することを目的としています。

この評価により、HCC の診断および追跡調査において循環 miRNA の強い相関性と信頼性が示された場合、これらの miRNA およびその関連経路を対象とした将来の臨床試験では、組織レベルを評価する必要性の代わりに、これが従来の慣行として採用されることで恩恵を受ける可能性があります。肝臓生検。

試験は、ヘルシンキ宣言の原則、GCP の原則、および適用されるすべての規制要件 (存在する場合) に準拠して実施されます。

NHS Grampian Biorepository は、この研究に使用される匿名化されたサンプルを提供します。 NHS グランピアン バイオリポジトリは、すでにこの種の研究に対する倫理的承認を取得しています。 研究開発の承認が求められます。

方法 スコットランド国立バイオリポジトリに保管されている HCC 患者および年齢が一致する健康な対照者からの血液サンプルは、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応 (RT) によって循環 miR-221 および miR-222 発現について検査されます。 -qPCR)。 同様に、miR-221 および miR-222 のレベルは、HCC 患者の癌組織と健康な肝組織のペアで評価されます。

サンプル分析は、アバディーンのロバート ゴードン大学 (RGU) の健康福祉研究所の研究室で行われます。

サンプルの分析結果と RT-qPCR によるマイクロ RNA の定量は、主任研究者と研究チームによって実験室施設で行われます。

サンプルを分析して、腫瘍性肝組織と非腫瘍性肝組織間の miR-221 および miR-222 の過剰発現を評価し、これと循環 miR-221 および miR-222 との相関関係を評価します。 循環レベルは、年齢を一致させた健康な対照の結果と比較されます。

研究によって生成されたデータの管理者は主任研究者となります。

サンプルは RGU の実験施設に保管され、主任研究者と研究チームのみがアクセスできます。

研究によって生成されたデータは、特注で作成されたスプレッドシートに収集され、CI と研究チームのみにアクセスが制限された状態でイントラネット上に保管されます。

コンピュータ ファイル上の匿名化されたデータは、研究者のみがアクセスできる、パスワードで保護されたデータベースに保存されます。

書かれたすべてのファイルは、NHS グランピアンバイオリポジトリに保管される同意を除き、ロバート・ゴードン大学の安全な保管場所内の施錠された充填キャビネットに保管されます。

アバディーン大学とNHSグランピアンのモニタリング手順に従います。

研究終了後、サンプルは別のプロジェクトで使用するための倫理的承認を得るまで研究チームによって保管されますが、研究によって生成されたデータは、研究者のみがアクセスできるパスワードで保護されたデータベースに保管されます。

同意プロセス NHS グランピアン バイオリポジトリは、専任の研究看護師を通じて組織サンプルと血液の収集について患者にインフォームド コンセントを求め、NHS グランピアン バイオリポジトリの文書の一部である患者情報シートと同意書の使用を求めます。

この研究で使用されるすべてのサンプルについては、バイオリポジトリの同意プロセスに従って同意が得られます。

トライアルの流れ

• HCC 患者から採取された 5 つの凍結対肝腫瘍組織および非腫瘍組織と 5 つの凍結血漿サンプル。スコットランド国立バイオリポジトリ (HCC グループ、HCC) に保管されています。 循環 miRNA の発現を関連付けるために、5 人の自発的な年齢を一致させた健康な対照を募集します (血漿対照グループ、PCG)。
• ペアの凍結 HCC 組織標本とそれらに隣接する非癌性正常肝臓を RNA 安定化チューブに収集し、プロトコールに従ってさらなる分析と miRNA 抽出を行うまで -80℃ で保存します。 試験片の平均サイズは直径 2 x 10 mm です。
• HCC グループと PCG の両方から採取された血液サンプル (BD Vacutainer K3-EDTA 採血管に 8 ～ 10 ml) が採取されます。 すべてのサンプルは、さらなる処理のためにバイオリポジトリに送信され、プロトコルに従って分析および miRNA が抽出されます。
• 対の HCC/非癌性組織からの miRNA 抽出の結果が比較され、HCC グループの血漿が対照の対応する血漿 (PCG グループ) と比較されます。