Клиническое значение печеночных и циркулирующих микроРНК miR-221 и miR-222 при гепатоцеллюлярной карциноме

Предыстория и обоснование Гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) является шестым наиболее распространенным видом рака в мире и третьей причиной смертности от рака.

Хирургическая резекция остается лучшим вариантом радикального лечения для пациентов с клиническим раком печени в Барселоне (BCLC) на стадии А, и она продемонстрировала преимущества даже на более поздней стадии В с мультифокальным поражением или ограниченной сосудистой инвазией.

Несмотря на радикальное лечение, предлагающее 5-летнюю выживаемость 50-70%, частота рецидивов через 5 лет после операции достигает 70%. Поэтому необходимы дополнительные усилия для выявления прогностических факторов рецидива и выживания.

МикроРНК представляют собой класс малых некодирующих молекул РНК, которые действуют как ключевые регуляторы клеточной пролиферации, дифференцировки, апоптоза и эмбрионального развития, тонко настраивая экспрессию генов на посттранскрипционном уровне. Они действуют как онкогены или супрессоры опухолей в зависимости от генов-мишеней. При ГЦР сообщалось об усилении или подавлении нескольких кластеров микроРНК с последующей активацией молекулярных сетей, таких как b-катенин, Ras, TGF-b, JAK/STAT, и созданием строго контролируемого механизма обратной связи.

Их участие в канцерогенезе представляет собой важную область исследований для развития их клинических применений: диагностики, мониторинга и терапии. Профили микроРНК могут различать нормальную и раковую ткань, идентифицировать ткань происхождения, а также различать различные подтипы или специфические онкогенные аномалии. В самом деле, паттерны неправильной экспрессии микроРНК более точны в определении происхождения опухолей, которые трудно определить другими способами, что позволяет предположить, что опухоли более четко сохраняют уникальный профиль экспрессии тканевых микроРНК.

МикроРНК также могут быть полезны в качестве биомаркеров ранней диагностики для последующего наблюдения за пациентами.

В онкогенезе печени роль miR-221 и miR-222 полностью не выяснена. Предыдущие исследования показали, что миР-221 активировалась в 83% опухолевых образцов ГЦК по сравнению с соответствующей цирротической тканью.

Повышенная экспрессия миР-221 в сыворотке крови была обнаружена у пациентов с ГЦК по сравнению со здоровыми людьми из контрольной группы, что было связано с наличием других неблагоприятных прогностических факторов и более неблагоприятными исходами после резекции печени.

Извлечение микроРНК из образцов печени ограничено возможностью резекции опухоли или возможностью выполнения биопсии печени у каждого пациента. Напротив, образец крови легко взять и сохранить для анализа. В настоящее время четко не установлена ​​корреляция между экспрессией миР-221 и миР-222 в ткани печени (опухолевой и неопухолевой) и уровнями циркулирующих миР-221 и миР-222.

Подтверждение этой корреляции позволило бы определить пороговое значение циркулирующих уровней, которое можно было бы использовать в качестве суррогатного маркера для включения пациентов с ГЦР в испытания фазы 3 без необходимости биопсии печени, которая часто противопоказана по клиническим причинам и согласно методические рекомендации.

Это пилотное исследование для оценки корреляции между сверхэкспрессией миР-221 и миР-222 в парных опухолевых/неопухолевых тканях печени и образцах крови у пациентов с ГЦК и для определения порогового значения циркулирующих уровней для использования в качестве суррогатного маркера. в клинических испытаниях.

Таким образом, это исследование направлено на оценку того, коррелирует ли экспрессия миР-221 и миР-222 в крови с экспрессией в ткани и могут ли циркулирующие уровни использоваться в качестве суррогата сверхэкспрессии в опухолевой ткани печени.

Если эта оценка продемонстрирует сильную корреляцию и надежность циркулирующих миРНК при диагностике и последующем наблюдении за ГЦК, будущие клинические испытания, направленные на эти миРНК и связанные с ними пути, могут выиграть от принятия этого в качестве обычной практики вместо необходимости оценки уровней в тканях от биопсии печени.

Испытание будет проводиться в соответствии с принципами Хельсинкской декларации, принципами GCP и всеми (если таковые имеются) применимыми нормативными требованиями.

Биорепозиторий NHS Grampian предоставит анонимные образцы для использования в этом исследовании. Биорепозиторий Grampian NHS уже имеет этическое одобрение для таких исследований. Будет запрошено одобрение исследований и разработок.

Методы Образцы крови пациентов с ГЦР и контрольной группы того же возраста, хранящиеся в Национальном биорепозитории Шотландии, будут протестированы на экспрессию циркулирующих миР-221 и миР-222 с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени (RT). -кПЦР). Аналогичным образом, уровни миР-221 и миР-222 будут оцениваться при парном раке и здоровой ткани печени у пациентов с ГЦК.

Анализ проб будет проводиться в лаборатории Института исследований здоровья и благополучия Университета Роберта Гордона (RGU) в Абердине.

Результаты анализа образцов и количественного определения микроРНК с помощью RT-qPCR будут проводиться главным исследователем вместе с исследовательской группой в лабораторных условиях.

Образцы будут проанализированы для оценки сверхэкспрессии миР-221 и миР-222 между опухолевой и неопухолевой тканью печени и для оценки корреляции между этим и циркулирующими миР-221 и миР-222. Циркуляционные уровни будут сравниваться с результатами здоровых контролей того же возраста.

Хранителем данных, полученных в ходе исследования, будет главный исследователь.

Образцы будут храниться в лабораториях RGU, и доступ к ним будет только у главного исследователя и исследовательской группы.

Данные, полученные в ходе исследования, будут собраны в специальную электронную таблицу, которая будет храниться во внутренней сети с доступом только для CI и исследовательской группы.

Анонимизированные данные о компьютерных файлах будут храниться в защищенных паролем базах данных, доступных только исследователям.

Все письменные файлы будут храниться в закрытых шкафах для заполнения в безопасном хранилище в Университете Роберта Гордона, за исключением разрешений, которые хранятся в биорепозитории NHS Grampian.

Будут соблюдены процедуры мониторинга Абердинского университета и NHS Grampian.

По окончании исследования образцы будут храниться исследовательской группой в ожидании этического одобрения для использования в другом проекте, тогда как данные, полученные в ходе исследования, будут храниться в защищенных паролем базах данных, доступных только исследователям.

Процесс получения согласия Биорепозиторий NHS Grampian получает информированное согласие пациентов на сбор образцов тканей и крови через специальную медсестру-исследователя и использует информационный лист пациента и форму согласия, которые являются частью документации биорепозитория NHS Grampian.

Согласие будет получено для всех образцов, используемых в этом исследовании, в соответствии с процессом согласия биорепозитория.

Пробная блок-схема

• Пять замороженных парных опухолевых и неопухолевых тканей печени и пять образцов замороженной плазмы, полученные от пациентов с ГЦР и хранящиеся в Национальном биорепозитории Шотландии (HCC Group, HCC). Пять добровольных здоровых контролей соответствующего возраста будут набраны, чтобы связать экспрессию циркулирующих микроРНК (группа контроля плазмы, PCG).
• Парные замороженные образцы ткани HCC и прилегающая к ним незлокачественная нормальная печень будут собираться в пробирки для стабилизации РНК и храниться при температуре -80°C до дальнейшего анализа и выделения миРНК в соответствии с протоколом. Средний размер образца будет 2 на 10 мм в диаметре.
• Образцы крови, взятые как из HCC Group, так и из PCG (8–10 мл в пробирки для сбора крови BD Vacutainer K3-EDTA), будут собираться. Все образцы будут отправлены в биорепозиторий для дальнейшей обработки, а затем анализа и выделения микроРНК в соответствии с протоколом.
• Результаты экстракции miRNAs из парных HCC/незлокачественных тканей будут сравниваться, а из плазмы группы HCC будут сравниваться с соответствующей плазмой контроля (группа PCG).