간세포암에서 간 및 순환 microRNA miR-221 및 miR-222의 임상적 의의

배경 및 근거 간세포 암종(HCC)은 전 세계적으로 6번째로 많이 발생하는 암이며 암 관련 사망의 3번째 원인입니다.

수술적 절제는 임상 바르셀로나-클리닉 간암(BCLC) A기 질환 환자를 위한 최선의 근치적 치료 옵션으로 남아 있으며 다발성 질환 또는 제한된 혈관 침범이 있는 더 진행된 B기에서도 이점을 보여주었습니다.

5년 생존율이 50~70%인 근치적 치료에도 불구하고 수술 후 5년 후 재발률은 70%에 이른다. 따라서 재발 및 생존에 대한 예후 인자를 규명하기 위해서는 더 많은 노력이 필요하다.

MicroRNA는 세포 증식, 분화, 세포 사멸 및 배아 발달의 주요 조절자 역할을 하는 작은 비암호화 RNA 분자의 한 종류로, 전사 후 수준에서 유전자 발현을 미세하게 조정합니다. 표적 유전자에 따라 발암 유전자 또는 종양 억제 인자로 작용합니다. HCC에서, b-카테닌, Ras, TGF-b, JAK/STAT와 같은 분자 네트워크의 후속 활성화 및 고도로 제어된 피드백 메커니즘의 생성과 함께 마이크로 RNA의 소수 클러스터의 상향 조절 또는 하향 조절이 보고되었습니다.

발암에 대한 이들의 관여는 진단, 모니터링 및 치료와 같은 임상 적용 개발을 위한 중요한 조사 영역을 나타냅니다. MicroRNA 프로필은 정상 조직과 암 조직을 구별하고 기원 조직을 식별하며 다른 하위 유형이나 특정 발암성 이상을 식별할 수 있습니다. 실제로, microRNA 잘못된 발현 패턴은 결정하기 어려운 종양의 기원을 식별하는 데 더 정확하며, 이는 종양이 독특한 조직 microRNA 발현 프로파일을 더 명확하게 유지함을 시사합니다.

MicroRNA는 환자 추적 관찰을 위한 조기 진단 바이오마커로도 유용할 수 있습니다.

간 종양 형성에서 miR-221 및 miR-222의 역할은 완전히 밝혀지지 않았습니다. 이전 연구에서는 일치하는 간경변 조직과 비교할 때 HCC 종양 샘플의 83%에서 miR-221이 상향조절되었음을 보여주었습니다.

건강한 정상 대조군과 비교하여 HCC 환자에서 혈청 miR-221의 증가된 발현이 발견되었으며, 이는 다른 불량한 예후 인자의 존재 및 간 절제 후 불량한 결과와 관련이 있었습니다.

간 샘플에서 microRNA를 추출하는 것은 종양을 절제할 수 있는 능력이나 각 환자에서 간 생검을 수행할 수 있는 가능성에 의해 제한됩니다. 반대로, 혈액 샘플은 분석을 위해 수집 및 저장하기 쉽습니다. 현재 간 조직(종양 및 비종양)에서 miR-221 및 miR-222의 발현과 순환하는 miR-221 및 miR-222 수준 사이의 상관관계가 명확하게 확립되지 않았습니다.

이 상관 관계의 확인은 간 생검을 필요로 하지 않고 HCC 환자를 3상 시험에 포함시키기 위해 대리 마커로 사용할 수 있는 순환 수준의 컷오프를 식별할 수 있게 합니다. 지침.

이것은 HCC 환자의 쌍을 이룬 종양/비종양 간 조직과 혈액 샘플에서 miR-221과 miR-222의 과발현 사이의 상관관계를 평가하고 대리 마커로 사용하기 위한 순환 수준의 컷오프를 식별하기 위한 파일럿 연구입니다. 임상 시험에서.

따라서 이 연구는 혈액 내 miR-221 및 miR-222 발현이 조직 발현과 상관관계가 있는지, 그리고 순환 수준이 종양 간 조직에서 과발현의 대용물로 사용될 수 있는지 평가하는 것을 목표로 합니다.

이 평가가 HCC의 진단 및 후속 조치에서 순환하는 miRNA의 강한 상관관계 및 신뢰성을 보여야 하는 경우, 이러한 miRNA 및 관련 경로를 대상으로 하는 향후 임상 시험은 조직 수준을 평가할 필요 없이 기존 관행으로 채택함으로써 이점을 얻을 수 있습니다. 간 생검.

시험은 헬싱키 선언의 원칙, GCP 원칙 및 적용 가능한 모든 규제 요구 사항(있는 경우)에 따라 수행됩니다.

NHS Grampian Biorepository는 이 연구에 사용할 익명화된 샘플을 제공할 것입니다. NHS Grampian Biorepository는 이러한 유형의 연구에 대해 이미 윤리적 승인을 받았습니다. 연구 개발 승인을 받을 것입니다.

방법 스코틀랜드 국립 생물 저장소에 저장된 HCC 환자 및 연령이 일치하는 건강한 대조군의 혈액 샘플을 실시간 역전사 중합효소 연쇄 반응(RT)을 통해 순환 miR-221 및 miR-222 발현에 대해 테스트합니다. -qPCR). 유사하게, miR-221 및 miR-222의 수준은 쌍을 이룬 암 및 건강한 간 조직 형태 HCC 환자에서 평가될 것이다.

샘플 분석은 Robert Gordon University(RGU) - Aberdeen의 Institute for Health and Wellbeing Research 실험실에서 수행됩니다.

RT-qPCR을 통한 샘플 분석 및 microRNA 정량 결과는 연구실 시설에서 수석 조사관과 연구팀이 함께 수행합니다.

샘플을 분석하여 종양 및 비종양 간 조직 사이의 miR-221 및 miR-222 과발현을 평가하고 이것과 순환 miR-221 및 miR-222 사이의 상관관계를 평가합니다. 순환 수준은 연령에 맞는 건강한 대조군의 결과와 비교됩니다.

연구에서 생성된 데이터의 관리인은 수석 연구원이 됩니다.

샘플은 RGU의 실험실 시설에 보관되며 수석 조사관과 연구팀만 접근할 수 있습니다.

연구에서 생성된 데이터는 맞춤형 스프레드시트에 수집되어 CI와 연구팀만 액세스할 수 있는 인트라넷에 보관됩니다.

컴퓨터 파일의 익명 데이터는 연구 조사자만 액세스할 수 있는 암호로 보호된 데이터베이스에 저장됩니다.

모든 서면 파일은 NHS Grampian Biorepository에 의해 저장되는 동의를 제외하고 Robert Gordon University의 보안 저장소 내의 잠긴 충전 캐비닛에 저장됩니다.

Aberdeen 대학과 NHS Grampian 모니터링 절차를 따를 것입니다.

연구가 끝나면 샘플은 다른 프로젝트에서 사용하기 위한 윤리적 승인이 있을 때까지 연구팀에 의해 저장되며, 연구에서 생성된 데이터는 연구 조사자만 액세스할 수 있는 암호로 보호된 데이터베이스에 저장됩니다.

동의 절차 NHS Grampian Biorepository는 전담 연구 간호사를 통한 조직 샘플 및 혈액 수집과 NHS Grampian Biorepository 문서의 일부인 환자 정보 시트 및 동의서 사용에 대해 환자의 정보에 입각한 동의를 구합니다.

Biorepository 동의 절차에 따라 본 연구에 사용된 모든 샘플에 대해 동의를 얻을 것입니다.

시험 흐름도

• HCC 환자로부터 얻은 5개의 동결된 한 쌍의 간 종양 및 비종양 조직 및 5개의 동결 혈장 샘플은 National Bio-Repository Scotland(HCC Group, HCC)에 보관되어 있습니다. 순환하는 miRNA(Plasma Control Group, PCG)의 발현을 연관시키기 위해 5명의 자발적인 연령 일치 건강한 대조군을 모집할 것입니다.
• 한 쌍의 냉동 HCC 조직 표본과 인접한 비암성 정상 간을 RNA 안정화 튜브에 수집하고 프로토콜에 따라 추가 분석 및 miRNA 추출까지 -80C에서 보관합니다. 표본의 평균 크기는 직경 2mm x 10mm입니다.
• HCC 그룹과 PCG(BD Vacutainer K3-EDTA 혈액 수집 튜브에 8-10ml)에서 수집한 혈액 샘플을 수집합니다. 모든 샘플은 프로토콜에 따라 추가 처리 및 분석 및 miRNA 추출을 위해 Bio-Repository로 전송됩니다.
• 쌍을 이룬 HCC/비암성 조직에서 miRNA 추출 결과를 비교하고 HCC 그룹 혈장에서 대조군(PCG 그룹)의 일치된 혈장과 비교할 것입니다.