HCCの早期診断ツールとしての血漿中の新規分子分光バイオマーカー

被験者: 患者の募集は、カレル大学の第一医学部の内科クリニックおよびプラハの軍事大学病院 (MUH プラハ) の消化器病学、肝臓病学および代謝学科で行われます。 サンプル セット サイズの選択については、以下で明確にします (サブセクション データ収集と統計分析)。

グループ A: 欧州肝臓学会 (EASL) によって最近発表された標準的な診断基準に従って HCC 診断が確認された肝硬変患者 100 人まで。 Barcelona Clinic Liver Cancer (BCLC) によるすべての HCC ステージの患者は、当科では年間 40 ～ 50 人の患者が含まれます。

グループ B: 検査時およびフォローアップの次の 12 か月以内に HCC または異形成結節のない肝硬変の患者 100 人まで。 患者は、一般的な臨床検査と6か月間隔での肝臓超音波による定期的な臨床訪問によって監視されます（HCC発症のリスクがある肝硬変患者に推奨される監視）。

グループ C: 肝硬変のない健康な志願者 ~ 50 人 (チェコ軍の新兵、チェコ軍の現役軍人)。

研究対象のすべてのグループの日常的に検査される生化学 (総タンパク質、アルブミン、アルファ フェト タンパク質など) は、新たに同定された分光学的/メタボロミクス バイオマーカーと関連付けられます。 署名されたインフォームド コンセントは、研究に含まれる各被験者から確保されます (以下にリストされている包含​​/除外基準)。 血漿調製：サンプル収集、調製および分析のためのすでに確立された手順に従って、すべての被験者の全抗凝固剤処理（K3EDTA）血液を静脈穿刺によって収集し、1500×gで10分間遠心分離します。 血漿画分はすぐに凍結され (-80 ° C で保存)、分光学的およびメタボロミクス分析のために UCT プラハに輸送されます。 各分析の前に、サンプルを室温 (~25 °C) で解凍し、0.45 μm メンブレン フィルターを通して 13,000 × g で 10 分間遠心分離します。 続いて、スペクトル測定が実行されます (ROA およびラマンの場合、動蛍光消光剤が追加されて、目的の信号と重複し、高濃度の蛍光によって引き起こされる大振幅のスペクトル的に広いバックグラウンドが抑制されます)。血漿中の分子）。

分光分析: プロジェクトの目的を達成するために、研究者は 2 つのキロプティカル手法 (ECD と ROA) の独自の組み合わせを利用し、非偏光バリアント (IR 吸収とラマン分光法) で補完します。 ECD は左円偏光放射と右円偏光放射の間の吸収差を検出しますが、市販の散乱円偏光 ROA セットアップは、非偏光入射放射を使用した散乱光の円偏光成分間の小さな強度差で動作します。 これらの方法はどちらも、ペプチド、タンパク質、糖類、核酸などのいくつかのキラルな生体分子の 3D 構造と配座に対して固有の感度を示します (20)。 これらのタイプの化合物のいくつかは、その 3D 構造または血漿中の濃度が HCC の発生中に変化するものである可能性があります。 ECD はキラル分子の全体的なコンフォメーションを敏感に反映しますが、ROA は特定の結合タイプに焦点を当てています。したがって、むしろ構造の詳細を反映しています。 通常の二次構造要素、特にヘリックスとベータ シートからのペプチド バックボーン バンドに加えて、ROA スペクトルには、ループとターンからの異なるバンドが含まれています。それらは三次構造に関する情報を提供します。 したがって、ECD、ROA、および非偏光分光法を同時に使用すると、特定の調査結果の信頼性が向上します。

さらに、臨床現場でまだ確立されていないさまざまな分析アプローチと技術​​を組み合わせることで、血漿中のHCC関連分子および/またはそれらの代謝産物の立体構造と濃度の変化を反映したスペクトル特徴内の小さな変化を検出する可能性が高まります。 私たちの知る限りでは、UCTプラハの分析化学部門にある私たちの研究室は、これらの技術をすべて利用できる世界で唯一の研究室であり、同時に生体流体分析の長期的な経験を持っています. 分析に使用されるすべての機器は市販されているため、;臨床検査室で購入できます。