HCC의 조기 진단 도구로서 혈액 혈장의 새로운 분자 분광 바이오마커

주제: 환자 모집은 찰스 대학교 의과대학 제1학부 내부 클리닉의 위장병학, 간장학 및 신진대사과 및 프라하의 군사 대학 병원(MUH 프라하)에서 수행됩니다. 샘플 세트 크기의 선택은 아래에 명시되어 있습니다(하위 섹션 데이터 수집 및 통계 분석).

그룹 A: 유럽 간 연구 협회(EASL)에서 최근 발표한 표준 진단 기준에 따라 HCC 진단이 확인된 간경변 환자 ~100명. 바르셀로나 클리닉 간암(BCLC)에 따른 모든 HCC 단계의 환자, 우리 부서에서는 연간 약 40-50명의 환자가 포함될 것입니다.

그룹 B: HCC 또는 이형성 결절이 없는 간경변 환자 ~100명 환자는 일반 실험실 검사 및 6개월 간격의 간 초음파 검사와 함께 정기적인 임상 방문으로 모니터링됩니다(간세포암 발병 위험이 있는 간경변증 환자에 대한 감시 권장).

그룹 C: 간경변증이 없는 ~50명의 건강한 지원자(체코군 신병, 체코군 현역 군인).

모든 연구 그룹의 일상적으로 검사된 생화학(예: 총 단백질, 알부민, 알파 태아 단백질 등)은 새로 식별된 분광/대사 바이오마커와 상관관계가 있습니다. 연구에 포함된 각 피험자로부터 서명된 정보에 입각한 동의서를 확보할 것입니다(아래 나열된 포함/제외 기준). 혈장 준비: 이미 확립된 샘플 수집, 준비 및 분석 절차에 따라 모든 피험자의 전체 항응고제 처리(K3EDTA) 혈액을 정맥 천자로 수집하고 1500 × g에서 10분 동안 원심분리합니다. 혈장 분획은 즉시 동결되고(-80°C에서 보관) 분광 및 대사체학 분석을 위해 UCT Prague로 이송됩니다. 각 분석에 앞서 샘플을 실온(~25°C)에서 해동하고 10분 동안 13,000 x g에서 0.45μm 멤브레인 필터를 통해 원심분리합니다. 그 후, 스펙트럼 측정이 수행됩니다(ROA 및 Raman의 경우 관심 있는 신호와 겹치고 높은 형광 함량으로 인해 발생하는 큰 진폭의 스펙트럼적으로 넓은 배경을 억제하기 위해 동역학 형광 소광제가 추가됩니다. 혈장 분자).

분광 분석: 프로젝트 목표를 달성하기 위해 조사관은 두 가지 chiroptical 방법(ECD 및 ROA)의 고유한 조합과 비편광 변형(IR 흡수 및 라만 분광법)을 활용합니다. ECD는 왼쪽과 오른쪽 원형 편광 방사선 사이의 흡수 차이를 감지하는 반면, 상업적으로 이용 가능한 산란 원형 편광 ROA 설정은 비편광 입사 방사선을 사용하여 산란광에서 원형 편광 성분 사이의 작은 강도 차이로 작동합니다. 이 두 가지 방법 모두 3D 구조와 펩티드, 단백질, 당류, 핵산 등과 같은 여러 키랄 생체 분자의 형태에 대한 고유한 민감성을 나타냅니다(20). 이러한 유형의 화합물 중 일부는 HCC 발생 중에 혈장의 3D 구조 또는 농도가 달라지는 화합물 중 일부일 수 있습니다. ECD는 키랄 분자의 전반적인 형태를 민감하게 반영하지만 ROA는 특정 결합 유형에 중점을 둡니다. 따라서 오히려 구조적 세부 사항을 반영합니다. 일반 2차 구조 요소, 특히 나선 및 베타 시트의 펩타이드 백본 밴드 외에도 ROA 스펙트럼에는 루프 및 회전과 같은 별개의 밴드가 포함되어 있습니다. 3차 구조에 대한 정보를 제공합니다. 따라서 ECD, ROA 및 비편광 분광법을 동시에 사용하면 특정 결과의 신뢰성을 높일 수 있습니다.

또한, 임상 실습에서 아직 확립되지 않은 다양한 분석 접근법과 기술을 결합하면 혈장 내 HCC 관련 분자 및/또는 그 대사물의 형태 및 농도 변화를 반영하는 스펙트럼 특징 내에서 사소한 변화를 감지할 가능성이 높아질 것입니다. 우리가 아는 한, UCT Prague 분석 화학과의 실험실은 이러한 모든 기술을 사용할 수 있는 세계 유일의 실험실이며 동시에 생체 유체 분석에 대한 장기적인 경험을 가지고 있습니다. 분석에 사용되는 모든 장비는 상업적으로 이용 가능하므로 임상 실험실에서 구입할 수 있습니다.